HOXA10启动子区基因多态性与子宫内膜容受性的相关性研究

符免艾，黄 林，冼梅兰，周立花，胡 英，李 娟，张云霞

(1.海南省农垦总医院生殖科，海南 海口 571100；2.海南医学院生物化学教研室，海南 海口 571100；3.海南医学院2012临本4班，海南 海口 571199)

HOXA10启动子区基因多态性与子宫内膜容受性的相关性研究

符免艾1，黄 林2，冼梅兰3，周立花1，胡 英1，李 娟1，张云霞2

(1.海南省农垦总医院生殖科，海南 海口 571100；2.海南医学院生物化学教研室，海南 海口 571100；3.海南医学院2012临本4班，海南 海口 571199)

目的 探讨HOXA10启动子区基因多态性对体外受精及胚胎移植(IVF-ET)患者子宫内膜容受性的影响。方法将2013年7月至2014年7月在海南省农垦总医院行IVF-ET的不孕患者220例按照妊娠结局分为妊娠成功组(117例)和受孕失败组(103例)，检测两组患者HOXA10基因启动子区SNP位点rs3779456多态性，利用统计学软件SPSS19.0探讨其基因型及等位基因与女性子宫内膜容受性的关联性。结果对TT基因型和(CC+CT)的比较结果及对CC基因型和(TT+CT)的比较结果显示P均＜0.05，且TT在受孕并正常发育组和受孕失败组的OR值为1.45。对等位基因T和C的分析显示差异无统计学意义(P＞0.05)。结论基因型TT有利于子宫内膜对胎儿的容受性，而CC则反之。

HOXA10；子宫内膜容受性；胚胎移植技术；启动子；基因多态性

女性生殖能力的影响因素非常复杂，任何影响排卵、受精、着床的因素都可能导致女性生殖能力的下降，例如遗传因素、解剖异常、内分泌紊乱、免疫因素、感染及环境因素等都可导致不孕不育[1-2]。近些年来，遗传因素在女性生殖能力中所起的作用越来越被医学界所重视，诸多影响女性生殖能力的基因相继被发现,例如骨桥蛋白编码基因、整合素基因、白细胞介素-1基因、雌激素受体基因、孕激素受体基因、同源框基因10等[3]。HOXA10属于DNA结合蛋白，表达量随月经周期呈现周期性变化，且在着床窗口期表达增加，与胚胎着床密切相关[4]。

文献表明该基因通过调节大量下游基因的表达而参与子宫内膜容受性的建立过程，并调节胚胎的定位和粘附，使胚胎着床成功并正常生长发育。启动子是控制基因表达水平的重要元件，其碱基序列的变化将直接影响基因的表达量，进而形成个体差异。单核苷酸多态性(SNP)是碱基序列变化最常见的形式，也是形成个体差异最基本的遗传因素。HOXA10启动子区碱基序列SNP多态性可决定启动子的活性，影响HOXA10基因的表达量，进而影响HOXA10所调节的下游基因的表达，最终影响女性的子宫内膜容受性及生殖能力。本文通过体外受精与胚胎移植(IVF-ET)成功与不成功人群的病例比对研究进一步探讨其启动子结构对子宫内膜容受性的关联性，为开展女性生殖能力评价及开展个体化医疗提供理论参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年7月至2014年7月在海南省农垦总医院生殖医学中心接受IVF-ET并在3次或3次内移植结束后有妊娠结局的不孕患者220例，按照妊娠结局将患者分为成功受孕并继续妊娠组117例，受孕失败组103例。排除标准：排除子宫内膜异位症等其他子宫问题导致的不孕患者，排除因男方因素导致的不孕患者，成功受孕并流产组数据不纳入本文分析。分组评估标准：3次以内(含3次)成功受孕且胎儿正常发育者归为妊娠成功组，3次以内(含3次)成功受孕但发生生化妊娠或者妊娠过程中胎儿停止发育、流产等不能成功产下婴儿者归为成功受孕并流产组，3次以内(含3次)未能移植成功者为受孕失败组。

1.2 基因多态性检测方法 采集患者空腹静脉血于EDTA抗凝管中，利用血液基因组提取试剂盒提取患者基因组DNA，DNA编号排序后委托生物公司进行多态性分析。

1.3 统计学方法 利用Excel录入患者信息，利用SPSS19.0软件对数据进行统计学分析。检验水准α=0.05，对组间差异采用四表格卡方检验，P＜0.05认为差异具有统计学意义。优势比(OR值)为受孕组中某基因型与其他基因型发生率的比值/失败组中该基因型与其他基因型发生率的比值，OR值大于1说明该基因型有利于子宫内膜对胎儿的容受性，反之则不利。

2 结果

如表1所示，两组不孕患者中均可检验出TT、CT、CC三种基因型，卡方检验结果为P=0.27，大于检验水准，说明三种基因型在组间的差异不显著。对TT基因型和(CC+CT)的比较结果及对CC基因型和(TT+CT)的比较结果显示P均小于0.05，且TT在受孕并正常发育组和受孕失败组的OR值为1.45，说明基因型TT有利于子宫内膜的容受性。对等位基因T和C的分析显示差异无统计学意义。

表1 IVF-ET患者rs3779456多态性与妊娠结局的关联分析[例（%）]

3 讨论

生殖是物种繁衍的正常生理现象，孕育后代是一个女性基本的权利和义务，也是维持家庭稳定和幸福及社会发展的必要因素，尤其是在我国，不孕不育往往给家庭及其成员带来极大的痛苦，甚至会导致家庭破裂。目前我国有10%～15%的妇女患有不孕不育症，研究女性生殖的相关机制并采取针对性的干预措施，将可能成为解决这一难题的必要途径。

有研究显示HOXA10基因的表达在月经周期中呈现波动，其中黄体中期呈高表达，特异性表达于子宫内膜腔上皮细胞和基质细胞，且受雌激素调控，这与人类的植入窗开放同步[5]。多项对不明原因的不孕妇女的子宫内膜中HOXA10的研究发现，不孕妇女较自然怀孕妇女子宫内膜中mRNA的表达量明显降低[6-7]。此外，有学者等研究发现[8-9]，当HOX10基因表达量下降时，受其直接调节的下游基因的表达量也随之下降。因此我们认为，HOXA10基因的表达量与该基因功能的实现密切相关，从而直接影响女性的生殖能力。单核苷酸多态性(Single nuclear polymorphism，SNP)是基因组DNA最常见的形式，也是形成个体差异最基本的遗传因素。从理论上推断，启动子区碱基序列SNP多态性可能会决定启动子的活性，影响HOXA10基因的表达量，进而影响HOXA10所调节的下游基因的表达，最终影响女性的生殖能力。

我们对220位具有妊娠结局的不孕患者进行了基因检测分析，HOXA10基因启动子区的一个多态位点rs3779456(T→C突变)存在TT、CT、CC三种基因型，其中TT基因型在成功受孕组中出现的频率是受孕失败组的1.45倍，猜测该基因型可能有利于子宫内膜容受性的提高，而CC则可能不利之。在对等位基因T和C的组间差异进行χ2检验时，P=0.07，该值接近检验水准，因此猜测T和C有可能存在组间差异。但猜测的证实需要进一步扩大样本量进行研究。

[1]高爱梅,郭东晓,裴凌云,等.不孕不育症影响因素的研究[J].中国妇幼保健,2011,26(6):3280-3281,3290.

[2]王思慧,傅 萍,姜 萍.不孕不育与遗传学相关因素的研究进展[J].中国优生与遗传杂志,2012,20(1):126-128.

[3]魏丽坤,张 雷,王霭明.子宫内膜容受性的形态学和分子生物学相关标志[J].生殖医学杂志,2008,17(1):74-78.

[4]Zanatta A,Rocha AM,Carvalho FM,et al.The role of the Hoxa10/HOXA10 gene in the etiology of endometriosis and its related infertility:a review[J].J Assist Reprod Genet,2010,27 (12):701-710.

[5]Taylor A,Arici D,Olive A,et al.HOXA10 is expressed in re sponse to sex steroids at the time of implantation in the hu man endometrium[J].ClinInvest,1998,101(7):1379-1384.

[6]Daftary GS,Kayisli U,Seli E,et al.Salpingectomy increases peri-implantation endometrial HOXA10 expression in women with hydrosalpinx[J].Fertil Steril,2007,87(2):367-372.

[7]Daftary GS,Taylor HS.Hydrosal pinx fluid diminishes endo metrial cell HOXA10 expression[J].Fertil Steril,2002,78(3):577-580.

[8]Troy PJ,Daftary GS,Bagot CN,et al.Transcriptional repres sion of periimplantation EMX2 expression in mammalian re production by HOXA10[J].Mol Cell Biol,2003,23(1):1-13.

[9]Tary GS,Roy PJ,Bagot CN,et al.Direct regulation of beta integrin subunit gene expression by HOXA10 in endometrial cells[J].Mol Endocrinol,2002,16(3):571-579.

Investigation on the relationship of polymorphism of Hox110 promoter and the endometrial receptivity.

FU Mian-ai1,HUANG Lin2,XIAN Mei-lan3,ZHOU Li-hua1,HU Ying1,LI Juan1,ZHANG Yun-xia2.
1.Department of Reproduction,Hainan Provincial Nongken General Hospital,Haikou 571100,Hainan,CHINA;2.Department of Biochemistry,Hainan Medical University,Haikou 571100,Hainan,CHINA;3.Class 4,2012 Medical Student,Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan,CHINA

Objective To investigate the effect of polymorphism of the HOXA10 promoter on the endometrial receptivity of patients who underwent in vitro fertilization-embryo transfer(IVF-ET).MethodsTwo hundred and twenty infertile patients who underwent IVF-ET from July 2013 to July 2014 in Hainan Provincial Nongken General Hospital were divided into two groups according to pregnancy(117 cases,the success group)or not(103 cases,the failure group).The polymorphism of rs3779456 located in the HOXA10 promoter was detected,and the data were analyzed by SPSS19.0 to investigate the correlation between the genotypes and the endometrial receptivity of patients.ResultsThe difference between TT and(CC+CT)was significant with P＜0.05,and the difference between CC and (TT+CT)was significant as well.The OR value of TT frequency in the success group and the failure group was 1.45. There was no significant difference between the frequency of allele T and C(P＞0.05).ConclusionTT is beneficial to the endometrial receptivity,while CC may be on the contrary.

Endometrial receptivity;In vitro fertilization-embryo transfer(IVF-ET);Promoter;Gene polymorphism

R711

A

1003—6350（2015）15—2221—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.15.0802

2015-04-10)

海南省卫生厅科研项目(编号：13A200036)

张云霞。E-mail：zhangyunxia1977@qq.com