Oct4、Bim蛋白在胃腺癌中的表达及临床意义

胡海霞，李志强，李 伟，熊正文，李宏伟，黄 勇

(1.中国人民解放军251医院病理科，河北 张家口 075000；2.河北北方学院附属第二医院，河北 宣化 075100)

Oct4、Bim蛋白在胃腺癌中的表达及临床意义

胡海霞1，李志强2，李 伟1，熊正文1，李宏伟1，黄 勇1

(1.中国人民解放军251医院病理科，河北 张家口 075000；2.河北北方学院附属第二医院，河北 宣化 075100)

目的探讨八聚体结合蛋白4(Oct4)、Bim蛋白在胃腺癌及癌旁组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学（EnVisionTM）法分别检测Oct4、Bim蛋白在70例胃腺癌组织及其癌旁组织中的表达情况。结果Oct4在胃腺癌组织阳性表达率为52.86%，在癌旁组织中阳性表达率为18.57%，两者之间差异有统计学意义(χ2=17.92，P＜0.01)；Bim蛋白在胃腺癌组织阳性表达率为17.15%，在癌旁组织中阳性表达率为58.57%，两者之间差异有统计学意义(χ2=25.54，P＜0.01)。Oct4的表达与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05)，但与性别、年龄、肿瘤位置、分化程度、浸润深度无关(P＞0.05)；Bim蛋白的表达与组织学分化、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05)，但与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置、浸润深度无关(P＞0.05)。Oct4蛋白与Bim蛋白表达呈负相关(r=-0.33，P＜0.01)。结论胃腺癌组织中Oct4和Bim蛋白的异常表达，表明癌细胞呈现出干细胞化及凋亡异常，有利于肿瘤的生长、浸润。

胃腺癌；Oct4；Bim；免疫组织化学

胃组织可发生的恶性肿瘤根据其来源可分为上皮源性、间质源性及淋巴造血系统，但以上皮源性胃腺癌最常见。目前，胃腺癌主要采取以手术切除为主，化疗和生物治疗为辅的综合治疗手段，但患者的生存预后仍不理想，特别是瘤细胞的转移或是对化疗药物的不敏感或抵抗。因而，本研究主要探讨八聚体结合蛋白4(Oct4)、Bim蛋白在胃腺癌组织中的表达及两者与临床病理因素之间的关系，同时探讨两种蛋白之间的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2006年3月至2013年8月期间病理科存档的70例胃腺癌患者的相关资料，资料显示，男性42例，女性28例；年龄36~68岁，中位数年龄55岁，其中≥55岁者51例、＜55岁者19例。肿瘤大小≥3 cm者39例、＜3 cm者31例；肿瘤位于贲门18例、胃体36例、幽门16例；肿瘤分化程度：高分化25例、中分化35例，低分化10例；TNM分期：Ⅰ期12例、Ⅱ期22例，Ⅲ期27例、Ⅳ期9例；癌组织浸润黏膜下层23例、深肌层34例、浆膜层13例；肠周淋巴结转移者42例，无转移者28例。上述所有患者均为第一次治疗，之前未接受过任何相关性治疗，同时选取癌旁0.3 cm处组织70例作为对照组。

1.2 试剂和方法 Oct4鼠抗人单克隆抗体(即用型)、Bim兔抗人单克隆抗体(即用型)及Envision试剂盒、DAB显色剂均购自福州迈新生物技术有限公司。免疫组化染色采用EnVision两步法，操作步骤参照试剂盒说明书进行。阳性对照由福州迈新生物技术有限公司提供，磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断 Oct4阳性表达为细胞核和/或细胞质棕黄色，判断标准[1]：随机选择5个高倍镜视野(×400)，计算1 000个瘤细胞中阳性染色细胞所占的比例，无阳性细胞或阳性细胞数所占比例＜5%为阴性，5%~25%为弱阳性，26%~50%为阳性，＞50%为强阳性。细胞染色结果由本科室两名以上病理专家进行双盲评估，并规定阳性细胞数所占比例≤25%者记为阴性，阳性细胞数所占比例≥26%者统计记为(+)。Bim阳性表达为细胞质棕黄色、黄色或淡黄色染色。采用半定量方法测定Bim的表达，随机选取5个高倍镜视野(200倍)观察肿瘤细胞中Bim的着色细胞数及强度，分为以下4个等级：0级为≤5%，1级为5%~25%，2级为25%~60%，3级＞60%。阳性强度淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。两积分相乘，0~3分为阴性，4~12分为阳性[2]。

1.4 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件分析处理相关数据，计数资料采用χ2检验，相关性检验采用Spearman法，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Oct4、Bim在胃腺癌组织及癌旁组织中的表达 Oct4蛋白表达于癌细胞的细胞核，70例胃腺癌组织中阳性表达37例，阳性率为52.86%；癌旁组织中阳性表达13例，阳性率为18.57%，两组之间表达差异有显著统计学意义(χ2=17.92，P＜0.01)。Bim蛋白表达于癌细胞的细胞浆，70例胃腺癌组织中阳性表达12例，阳性率为17.15%；癌旁组织中阳性表达41例，阳性率为58.57%，两组之间表达差异有显著统计学意义(χ2=25.54，P＜0.01)，见表1和图1~图4。

表1 Oct4、Bim在胃腺癌组织及癌旁组织中的表达

2.2 Oct4、Bim蛋白在胃腺癌组织的表达与临床病理参数的关系 Oct4蛋白表达与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05)，但与性别、年龄、肿瘤位置、组织学分化、浸润深度无关(P＞0.05)；Bim蛋白表达与组织学分化、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05)，但与性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤位置、浸润深度无关(P＞0.05)，见表2。

表2 Oct4、Bim的表达与胃腺癌临床病理因素的关系

图1 Oct4在胃腺癌组织中阳性表达(×100)；图2 Oct4在癌旁组织中阴性表达(×100)；图3 Bim在胃腺癌组织中阴性表达(×100)；图4 Bim在癌旁组织中阳性表达(×100)

2.3 胃腺癌组织中Oct4、Bim的表达相关性 在70例胃腺癌组织中，Oct4、Bim同时阳性表达的为2例，同时阴性表达的为23例；Oct4阳性而Bim阴性的为35例，Oct4阴性而Bim阳性的为10例。经Spearman相关性检验分析，结果显示两者之间呈负相关关系(r=-0.33，P=0.00＜0.01)，见表3。

表3 胃腺癌组织中Oct4、Bim表达之间的相关性

3 讨论

人Oct4基因位于染色体6p21.31，含352个氨基酸，相对分子质量为18 kD，是胚胎干细胞保持自我更新、维持未分化状态的主要调控因子[3]，还是多能性或全能性干细胞标记物，其表达见于胚胎生殖细胞、皮肤基底细胞层的极少数细胞、胃干细胞、黑色素干细胞及乳腺干细胞等[4-6]，但在分化的组织中其表达均降低或消失[4]。近来资料显示，Oct4在多种瘤组织中呈现过表达[7-10]，这说明干细胞一定程度上参与了肿瘤的形成。赵朋朋等[11]研究发现，Oct4在正常膀胱组织中无表达，在膀胱癌组织中的表达率为76.1%，并且其表达与肿瘤病理分级、肿瘤转移有关，同时研究亦显示，Oct4阴性表达患者的3年总生存率高于阳性表达者。在胆囊癌组织中Oct4的表达明显高于慢性胆囊炎组织中的表达，且与周围脏器侵犯与否、癌组织分化程度及TNM分期有关[12]。本实验结果表明，Oct4蛋白在胃腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织，其表达与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移有关，这表明胃腺癌组织也存在干细胞的异常表达或是癌细胞的干细胞化，与肿瘤细胞的异常增殖及侵袭能力增强有关。

细胞增殖与凋亡是维持细胞功能正常的机制之一，无论两者哪个发生异常，就会造成细胞功能的异常改变，进而引起肿瘤的形成。Bim是B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)家族成员之一，具有与抗凋亡因子bcl-2相反的促凋亡作用。人Bim基因定位于2q12或2q13，其表达于造血细胞、上皮细胞、以生殖细胞及神经细胞等多种正常组织细胞，并在维持造血细胞内环境稳定、肿瘤的发生及防止自身免疫中有着重要的作用[13]。Bim蛋白在受到刺激后，其从与细胞胞浆的力蛋白复合体中游离出来，才具有促凋亡的功能[14]。资料显示，Bim在大肠癌、子宫内膜癌、甲状腺乳头状癌及乳腺癌组织中呈现低表达或无表达，明显低于相应的良性病变组织中的表达，且其表达水平的改变与肿瘤的发生发展有关[15-17，13]。本实验结果表明，Bim蛋白在胃腺癌组织中的表达远低于在癌旁组织中的表达，其表达与组织学分化、TNM分期、淋巴结转移有关，这表明癌细胞已丧失促凋亡调控的作用，进而引起癌细胞的无限增殖。

本研究结果提示，Oct4和Bim蛋白在胃腺癌组织中的表达呈现负相关，也就是说，胃腺癌组织中Oct4高表达时，Bim则表现为低表达或无表达。因而推测Oct4、Bim之间可能存在某种机制，通过此机制激活了Oct4的异常表达，进而抑制了Bim的表达，最终促进了肿瘤的无限制扩增。

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Expression of Oct4 and Bim protein in gastric adenocarcinoma and their clinical significance.

HU Hai-xia1,LI Zhi-qiang2,LI Wei1,XIONG Zheng-wen1,LI Hong-wei1,HUANG Yong1.1.Department of Pathology,the 251thHospital of Chinese PLA,Zhangjiakou 075000,Hebei,CHINA;2.Department of Pathology,the Second Affiliated Hospital of Hebei North University,Xuanhua 075100,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of Oct4 and Bim protein in gastric adenocarcinoma and their significance.MethodsThe expression of Oct4 and Bim was respectively detected by immunohistochemisty (EnVisionTM)in gastric adenocarcinoma tissue(70 cases)and pericarcinous tissue.ResultsThe positive expression rate of Oct4 was 52.86%%in gastric adenocarcinoma tissue and 18.57%in pericarcinous tissue,with statistically significant difference(χ2=17.92,P＜0.01).The positive expression rate of Bim was 17.15%in gastric adenocarcinoma tissue and 58.57%in pericarcinous tissue,with statistically significant difference(χ2=25.54,P＜0.01).The positive expression of Oct4 was related to tumor size,TNM staging,lymph node metastasis(P＜0.05),but not to gender,age,tumor site,histological differentiation and infiltrating depth(P＞0.05).The positive expression of Bim was related to histological differentiation,TNM staging,lymph node metastasis(P＜0.05),but not to gender,age,tumor size,tumor site and infiltrating depth(P＞0.05).The expression of Oct4 in gastric carcinoma tissue was negative correlated with the expression of Bim (r=-0.33,P＜0.01).ConclusionThe abnormal expression of Oct4 and Bim in gastric adenocarcinoma tissue indicates that cancer cell shows stem cellularization and anormal apoptosis,which is useful to tumor growth and infiltration.

Gastric adenoarcinoma;Oct4;Bim;Immunohistochemisty

R735.2

A

1003—6350（2015）09—1367—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.09.0491

2014-10-20)

李 伟。E-mail：liwei-324@163.com