急性阑尾炎患者阑尾病灶组织分离的病原体及其耐药性分析

罗 标，梁结玲，刘琼章，徐艳红，欧阳辉妹，邓润钦

(东莞市茶山医院检验科1、普外科2，广东 东莞 523380)

急性阑尾炎患者阑尾病灶组织分离的病原体及其耐药性分析

罗 标1，梁结玲1，刘琼章1，徐艳红1，欧阳辉妹1，邓润钦2

(东莞市茶山医院检验科1、普外科2，广东 东莞 523380)

目的 了解急性阑尾炎患者中常见病原体及其对抗菌药物的耐药性，为临床选择抗菌药物治疗提供参考。方法对2011年1月至2013年12月收集的415例阑尾病灶组织标本采用法国生物梅里埃公司ATB半自动微生物鉴定仪进行细菌鉴定和药敏试验，对药敏结果采用WHONET5.6软件进行统计分析，并对大肠埃希菌、奇异变形杆菌、肺炎克雷伯菌进行了超广谱β-内酰胺酶(ESBL)检测。结果从415例阑尾病灶组织中分离出348株病原体，其中G-杆菌322株(92.52%)，G+球菌26株(7.47%)；检出率居前5位的病原菌依次为大肠埃希菌(76.14%)、铜绿色假单胞菌(6.90%)、奇异变形杆菌(3.45%)、肺炎克雷伯菌(3.16%)和粪肠球菌(1.44%)。药敏结果显示大肠埃希菌耐药率较低者依次为亚胺培南（0）、哌拉西林/他唑巴坦（0）、阿米卡星(5.3%)、头孢西丁(10.2%)和阿莫西林/克拉维酸(24.6%)，大肠埃希菌耐药率较高者依次为青霉素类抗生素类（86.8%～90.6%）、复方新诺明(67.9%)及第一、二代头孢菌素类药物(60.3%～67.9%)，G+球菌对万古霉素、替考拉宁、左旋氧氟沙星耐药率最低，对其他抗菌药物都有不同程度的耐药。ESBL确证试验结果显示，265株大肠埃希菌检出124株，产酶率为46.8%；奇异变形杆菌、肺炎克雷伯菌均未检出产ESBL菌株。结论急性阑尾炎感染细菌以G-杆菌为主，特别是以大肠埃希菌居首位；此菌对青霉素类、头孢类和喹诺酮类抗菌药物的耐药率逐年上升，特别是产ESBL菌株呈现出多药耐药现象严峻。应加强病原菌的检测和药敏试验，合理选择抗生素，减少耐药菌株的产生和扩散。

急性阑尾炎；病灶组织；病原体；敏感性试验；抗药性

急性阑尾炎是普外科腹腔感染中最常见的急腹症之一。由于抗菌药物的广泛滥用，导致阑尾感染的细菌谱和药物敏感性的不断变迁，增加了急性阑尾炎治疗的难度，因此，正确合理使用抗菌药物在急性阑尾炎的非手术治疗和手术治疗中均有重要作用。为了解2011年1月至2013年12月本院急性阑尾炎患者的病原菌分布及其耐药性，本文对普外科送检的415例急性阑尾炎标本中分离出的348株病原菌进行了鉴定和耐药性分析，为临床外科医生在治疗急性阑尾炎时合理使用抗菌药物提供病原学依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源 标本来源于20l1年1月至2013年12月在本院普外科根据WHO的急性阑尾炎的诊断标准确诊的415例行阑尾切除术患者。患者阑尾病灶组织标本全部由普外科手术时采集。

1.2 仪器与试剂 采用法国生物梅里埃公司生产的ATB细菌鉴定及药敏分析仪以及配套试剂盒。血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯和MH平板购自广东江门凯林公司。

1.3 质控菌株 金黄色葡萄球菌ATCC 25923、大肠埃希菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC27853、粪肠球菌ATCC29212均由广东省临床检验中心提供。

1.4 方法

1.4.1 细菌培养及鉴定 将手术采集的阑尾组织标本置入增菌培养瓶内制成悬液，依照常规方法接种于血平板、麦康凯和巧克力平板，35℃孵育18～24 h。采用法国生物梅里埃公司生产的ATB细菌分析仪进行菌株鉴定和药敏试验。

1.4.2 超广谱β-内酰胺酶(ESBL)确证试验 按2010年版CLSI标准执行操作：选用头孢他啶、头孢他啶/棒酸，头孢噻肟、头孢噻肟/棒酸两对纸片进行试验，两个药物中有任何一个在加克拉维酸后抑菌环直径与不加克拉维酸的抑菌环直径相比增大值≥5 mm时判定为产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)。

1.4.3 结果分析 采用WHONET 5.6软件进行数据分析。每例患者只计算第1份标本分离的非重复株细菌。

2 结果

2.1 病原体分布 由415例阑尾组织标本培养标本分离出病原体共348株(83.85%)，其中，G-杆菌322株(92.52%)，检出率居前5位的病原菌依次为大肠埃希菌265株(76.15%)、铜绿假单胞菌24株(6.90%)、奇异变形杆菌12株(3.45%)、肺炎克雷伯菌11株(3.16%)和粪肠球菌5株(1.44%)；G+球菌26株(7.47%)，其中以粪肠球菌多见，见表1。

表1 2011-2013年阑尾组织分离病原体分布构成比

2.2 药敏试验结果 主要G-杆菌对常见抗菌药物的耐药率见表2。ESBL确证试验结果显示，265株大肠埃希茵共检出124株，产酶率为46.8%；奇异变形杆菌、肺炎克雷伯菌均未检出。主要G+菌细菌对常见抗菌药物的耐药率见表3。

表2 主要G-杆菌对常见抗菌药物的耐药率[株（%）]

表3 主要G+球菌对常见抗菌药物的耐药率[株（%）]

3 讨 论

本研究回顾分析了急性阑尾炎患者阑尾病灶组织标本普通培养分离出病原体的种类及主要病原体的耐药性。急性阑尾炎患者阑尾病灶组织标本普通培养的阳性率为83.85%，与国内报道[1-3]接近。结果显示，引起急性阑尾炎的病原菌以G-杆菌为主，占92.52%，与国内报道[1]接近，其次为革兰氏阳性球菌。在革兰氏阴性杆菌中大肠埃希菌是急性阑尾炎最常见的致病菌，居首位，占总分离率的76.15%，其次为铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌和肺炎克雷伯菌，分别占总分离率的6.90%、3.45%、3.16%，与国内报道[1，3]接近；G+菌占7.47%，主要为粪肠球菌(1.44%)、鸟肠球菌(1.44%)、屎肠球菌(1.15%)等，接近于文献[1]报道。265株大肠埃希菌检出产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)菌124株，产酶率为46.8%，明显高于文献[4]报道，接近于文献[5]报道。可能与本院近年来在临床治疗中对青霉素类、头孢类和喹诺酮类抗菌药物的广泛应用及其同类之间的频繁更换使用相关。

药敏结果显示，大肠埃希菌耐药率较低者依次为亚胺培南(0)、哌拉西林/他唑巴坦(0)、阿米卡星(5.3%)、头孢西丁(10.2%)、阿莫西林/克拉维酸(24.6%)，耐药率较高者依次为青霉素类抗生素类(86.8%～90.6%)、复方新诺明(67.9%)及第一、二代头孢菌素类药物(60.3%～67.9%)，而且对庆大霉素耐药率达49.1%。这种多药耐药现象可能是产ESBIs大肠埃希菌所占比例较高所致，ESBLs菌株不仅携带ESBLs质粒，还同时带有对氨基糖苷类、喹诺酮类和磺胺类等多种耐药基因，使其具有多种不同的耐药表型。由于ESBLs能水解β-内酰胺类抗生素，因此对产ESBLs的大肠埃希菌引起的感染不能单独应用β一内酰胺类抗生素，需用加酶抑制剂的复合剂是用药的较佳选择[6]。

从本组资料可以看出，哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、阿米卡星、头孢西丁及头孢吡肟具有很强的抗菌活性，故可作为急性阑尾炎G-杆菌的经验用药。虽然临床上亚胺培南和阿米卡星都效果显著，但前者作为广谱抗生素极易产生二重感染，一般不作为首选药物，只用于产ESBLs菌株的治疗，后者因其具有肾毒性，在临床中也应慎重使用。本组数据显示，肠球菌属对红霉素高度耐药，对万古霉素、替考拉宁、左旋氧氟沙星保持高度敏感，虽然对耐万古霉素的肠球菌(VRE)未发现，但国内外对VRE均有报道[7]，因此临床治疗肠球菌引起的感染时应慎重使用万古霉素，以减少耐万古霉素肠球菌产生。

综上所述，由于广谱类抗菌药物的广泛应用，导致病原菌感染率及耐药性的不断增高，特别是产ESBL菌株呈现出多药耐药现象严峻。临床在进行治疗时应结合病原菌检测及药敏结果，同时重视对产ESBLs菌株的检测，合理选择抗菌药物，避免盲目的经验性用药，减少耐药菌株的产生和扩散。

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[4]朱德妹,汪 复,张婴元.2004年上海地区细菌耐药性监测[J].中国抗感染化疗杂志,2005,5(4):195-200.

[5]诸葛小玲,滕 敏,杨 青,等.2005年浙江大学医学院附属第一医院细菌耐药性监测[J].中国抗感染化疗杂志,2007,7(4):263-268.

[6]廖新华,王 辉.大肠埃希菌感染临床分布及耐药性分析[J].实用中医药杂志,2011,27(3):196.

[7]杨 青,俞云松,倪语星,等.2010年中国CHINET肠球菌属细菌耐药性监测[J].中国感染与化疗杂志,2012,12(3):92-97.

Pathogens isolated from lesion in patients of acute appendicitis and drug resistance analysis.

LUO Biao1,LIANG Jie-ling1,LIU Qiong-zhang1,XU Yan-hong1,OUYANG Hui-mei1,DENG Run-qin2.Department of Clinical Laboratory1,Department of General Surgery2,Dongguan Chashan Hospital,Dongguan 523380,Guangdong,CHINA

Objective To investigate the common pathogens isolated from lesion in patients of acute appendicitis and to analyze their drug resistance,in order to provide guidance for clinical selection of reasonable antibiotics.MethodsA total of 415 samples of appendicitis lesions from January 2011 to December 2013 were collected.The bacteria identification and microbial sensitivity were performed using BioMerieux semi-automatic bacteria identification analyzer.The results of microbial sensitivity were analyzed by WHONET5.6 software.Extended spectrum beta lactamases(ESBL)onEscherichia coli,proteus,Klebsiella pneumoniaewere also detected.ResultsA total of 348 strains of pathogens were isolated,including 322 strains of Gram-negative bacilli(92.52%),and 26 strains of Gram-positive cocci(7.47%).The top five pathogens detected wereEscherichia coli(76.15%),Pseudomonas aeruginosa(6.90%),Proteus mirabilis(3.45%),Klebsiella pneumoniae(3.16%)andEnterococcus faecalis(1.44%).The microbial sensitivity results showed that the drugs showed low resistance rate to E.coli included imipenem(0%),piperacillin-tazobactam(0%),amikacin(5.3%),cefoxitin(10.2%),amoxicillin-clavulanic acid 24.6%).and that the drugs with high resistance were penicillin antibiotic(86.6%～90.6%),and compound sulfamethoxazole(67.9%)and first and second generation cephalosporin drugs(60.3%～67.9%).G+cocci showed extremely low resistance to vancomycin,teicoplanin,levofloxacin,and were resistant to other antimicrobial agents to varying degrees.Results of ESBL confirmatory test showed that 124 of the 265 strains(46.8%)ofEscherichia coliwere ESBL-producing.No ESBL-producing strains were detected inProteus mirabilisandKlebsiella pneumoniae.ConclusionAcute appendicitis is mainly caused by G-nagative bacilli,especiallyEscherichia coli.The bacteria show increasing resistance to penicillin,cephalosporin and quinolone year by year,and the ESBL-producing strains,especially,show multi-resistance.We should strengthen pathogen detection and drug sensitivity test,choose antibiotics reasonably to reduce the generation and diffusion of drug-resistant strains.

Acute appendicitis;Lesions;Pathogens;Sensitivity test;Drug resistance

R656.8

A

1003—6350（2015）10—1466—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.10.0522

2014-10-08)

梁结玲。E-mail：csyyjyk@yeah.net