miR-126在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

龙 丹，刘伏香，周 艳，梁云香

(中国人民解放军一六九医院妇产科，湖南 衡阳 421002)

miR-126在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

龙 丹，刘伏香，周 艳，梁云香

(中国人民解放军一六九医院妇产科，湖南 衡阳 421002)

目的 研究miR-126在宫颈癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法收集宫颈癌组织标本78例。采用qRT-PCR技术检测宫颈癌组织及癌旁正常宫颈组织中miR-126的表达情况，并分析miR-126在宫颈癌组织中的表达水平与宫颈癌患者临床病理参数之间的关系。结果miR-126在宫颈癌组织中的表达相对于癌旁正常宫颈组织中的表达明显下调(P＜0.001)。miR-126在宫颈癌组织中的高表达率与宫颈癌患者的组织分化程度、淋巴结转移以及临床分期明显相关，即miR-126在低分化组的高表达率明显低于高中分化组(P=0.013)，在有淋巴结转移组的高表达率明显低于无淋巴结转移组(P=0.005)，在Ⅲ～Ⅳ期组中的高表达率明显低于Ⅰ～Ⅱ期(P=0.007)。而miR-126在宫颈癌组织中的高表达率在不同年龄、肿瘤大小、HPV感染患者组之间比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论miR-126可能参与宫颈癌的发生发展，检测miR-126的在宫颈癌中的表达对预测宫颈癌的浸润转移具有重要意义。

MiR-126；宫颈癌；侵袭；转移

microRNAs(miRNAs)是一类内源性、长度为18～25 nt的单链，非编码小RNA分子，通过与靶基因3'非编码区结合，从而特异性调控靶基因的表达，发挥类似癌基因或抑癌基因的功能[1]。miRNAs是重要的调控因子，能调控细胞的增殖、分裂、分化、凋亡等过程。研究显示miR-126在多种肿瘤中表达下调，并且类似于抑癌基因样作用[2-4]。此外，miR-126在乳腺癌、成人T细胞白血病、结肠癌以及恶性间皮瘤中低表达，并且与患者的不良预后相关[5-7]。研究显示miR-126在宫颈癌组织中的表达明显低于正常宫颈组织，然而，目前尚无有关miR-126在宫颈癌中的临床意义以及预后价值的研究报道。本次研究通过qRT-PCR技术检测miR-126在宫颈癌组织与癌旁正常宫颈组织中的表达，探讨miR-126与宫颈癌转移、预后等之间的关系，为进一步揭示宫颈癌的发病机制以及寻找宫颈癌预后分子标志物提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 病例资料 收集2010年5月至2013年12月期间我院收治并确诊为宫颈癌的患者78例，年龄26～72岁，平均(54±15)岁。所有宫颈癌患者术前均未行放化疗等抗肿瘤治疗。病理学分类按照宫颈癌FIGO分期标准。病理诊断结果经两名以上病理学专家确诊。所取正常宫颈组织距癌缘＞5 cm，HE染色证实为非癌组织。

1.2 主要材料 TRIZOLTM Reagent购自invitrogen公司；逆转录试剂盒购自Promega公司；qRT-PCR miRNA Detection Kit购自上海吉玛公司。其余试剂均为国产分析纯。

1.3 qRT-PCR 称取每个宫颈癌标本和癌旁正常宫颈组织各适量，用液氮研磨法将上述各种组织磨成粉末，用Trizol法抽提组织中总RNA，并逆转录合成cDNA于-80°C保存备用。PCR扩增采用Real time qRT PCR实时定量试剂盒，扩增反应体系为20 μl，其中包括TaqDNA polymerase(5 U/μl)0.2 μl，MiR-126 primers(5 μmol/L)0.4 μl，2×SYBR Mix 10 μl，miRNA-126 product 2.0 μl，灭菌蒸馏水7.4 μl。循环体系为：95°C 3 min，95°C 12 s，62°C 35 s，72°C 30 s，一共40个循环。以U6为内参，所测定的miR-126的相对表达量采用2-ΔΔCT法分析。

1.4 统计学方法 应用SPSS16.0软件进行统计学处理，计数资料比较采用χ2检验或确切概率法，计量资料以均数±标准差(±s)表示，两组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌组织中miR-126表达水平的检测 提取宫颈癌组织和癌旁正常宫颈组织中的总RNA，以U6 snRNA为内参。采用qRT-PCR法检测宫颈癌组织和癌旁正常宫颈组织中miR-126的表达水平。选取1例癌旁正常宫颈组织的miR-126的表达值为1，以2-△△Ct表示miR-126的表达水平，然后分析得到78例宫颈癌组织中miR-126的平均表达值为(0.703±0.036)，癌旁正常卵巢组织中miR-126的平均表达值为(1.526±0.065)，二者比较，差异具有统计学意义(P＜0.001)，见图1。

图1 miR-126在宫颈癌组织和癌旁正常宫颈组织中的表达

2.2 宫颈癌组织中miR-126表达水平和临床病理参数的关系 本次研究以宫颈癌组织中miR-126表达值的中位数为临界值，miR-126的表达值大于或等于中位数为高表达，少于中位数为低表达。结果显示，miR-126在78例宫颈癌患者中有51例低表达(65.38%)，27例高表达(34.62%)，差异有统计学意义(P＜0.05)。经相关性分析发现，miR-126在宫颈癌组织中的高表达率与患者的性别、年龄、HPV感染、组织学类型以及肿瘤大小无显著相关性(P＞0.05)；而miR-126在宫颈癌组织中的高表达率与宫颈癌患者的组织分化程度、淋巴结转移以及临床分期明显相关，即miR-126在低分化组的高表达率明显低于高中分化组(P=0.013)，在有淋巴结转移组的高表达率明显低于无淋巴结转移组(P=0.005)，在Ⅲ～Ⅳ期组中的高表达率明显低于Ⅰ～Ⅱ期(P=0.007)，见表1。

3 讨论

宫颈癌的发生是一个多步骤的过程，包括从正常宫颈上皮出现内瘤变，再逐步转化为侵袭性宫颈癌。近年来，由于妇科普查以及宫颈癌早期筛查的实施，宫颈癌的发病率呈上升趋势，发病年龄也趋于年轻化。目前治疗宫颈癌的标准方案为手术加放化疗，但是不同患者的临床结局存在显著差异，并且也难以预测。因此，了解宫颈癌发生的病因、分子生物学以及遗传学机制对患者的治疗策略以及预后标记物的鉴别具有重要意义。

最近大量研究显示，miRNAs在多种肿瘤中异常表达，并且类似于癌基因或抑癌基因样作用[8]。由于miRNAs在不同组织和疾病中的特异性表达模式以及广泛的调控潜能，因此可作为诊断与预后生物标志物以及潜在的治疗靶点[9]。研究显示，miR-126在乳腺癌中表达下调，并且通过调控VEGF/ PI3K/AKT信号通路参与乳腺癌的发生发展[10]。此外，miR-126在胃癌细胞中表达下调，其低表达与胃癌的临床分期以及淋巴结转移相关，并且通过靶向调控Crk在体内外抑制胃癌细胞的增殖与转移[11]。Hamada等[12]研究显示miR-126在胰腺癌细胞中表达下调，并且通过靶向ADAM9b抑制胰腺癌细胞的迁移与侵袭，并且还可诱导EMT转化。上述研究均表明miR-126在多种肿瘤中发挥抑癌基因样作用。Yu等[13]研究显示miR-126在宫颈癌细胞中表达下调，能抑制宫颈癌细胞的增殖，并且还能增强肿瘤细胞对化疗药物博来霉素的敏感性。本次研究通过qRT-PCR法检测了miR-126在78例宫颈癌组织及癌旁正常宫颈组织的表达，发现miR-126在宫颈癌组织的表达相对比癌旁正常宫颈组织明显下调，经相关性分析发现miR-126在宫颈癌中的表达水平与宫颈癌患者的组织分化程度、临床分期以及淋巴结转移明显相关。

综上所述，miR-126在宫颈癌组织中的表达下调，且miR-126的表达状态与宫颈癌患者的肿瘤分化程度、临床分期以及淋巴结转移相关。这些结果均提示了miR-126可能参与宫颈癌的发生发展与转移过程，为miR-126成为宫颈癌临床预测生物标记物以及治疗靶点提供了实验证据。

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Expression of miR-126 in cervical cancer and its clinical significance.

LONG Dan,LIU Fu-xiang,ZHOU Yan, LIANG Yun-xiang.Department of Gynaecology and Obstetrics,the 169thHospital of Chinese PLA,Hengyang 421001, Hunan,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of miR-126 in cervical cancer and its clinical significance.MethodsExpression of miR-126 was detected in 78 cases of cervical cancer by qRT-PCR.The correlations of miR-126 expression with clinicopathologic characteristics of cervical cancer patients were analyzed.ResultsThe expression of miR-126 were significantly down-regulated in cervical cancer tissues than in the adjacent normal tissues.The difference was statistically significant(P＜0.001).Decreased miR-126 expression in cervical cancer was found to be significantly associated with histological grade(P=0.013),lymph node metastasis(P=0.005),and the FIGO stage(P=0.007).However,there was no statistically significant difference between the expression and age,tumor size,as well as HPV infection(P＞0.05).ConclusionThe expression of miR-126 may be involved in the occurrence and development of cervical cancer.Detection of miR-126 expression in cervical cancer is of great importance in the prediction of invasion and metastasis.

MiR-126;Cervical cancer;Invasion;Metastasis

R737.33

A

1003—6350（2015）17—2513—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.17.0911

2015-02-16)

湖南省中医药科研计划项目（编号：201139）

龙 丹。E-mail：806349771@qq.com