粒细胞巨噬细胞刺激因子对大鼠创面JNK通路的作用
2015-04-13郭明锋
郭明锋
(浙江省消防总队医院,浙江杭州310011)
●医学研究
粒细胞巨噬细胞刺激因子对大鼠创面JNK通路的作用
郭明锋
(浙江省消防总队医院,浙江杭州310011)
目的:研究粒细胞巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)对大鼠创面愈合的影响及对JNK信号通路的作用。方法:将30只鼠随机分为治疗组和对照组,每组各15只。于其背部制作约2cmx2cm全层皮肤缺损创面。治疗组大鼠创面外涂重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子(rhGM-CSF)凝胶,对照组创面涂抹不舍任何药物的凝胶基质。观察伤后创面愈合率、GM-CSF含量和JNK信号通路中蛋白表达量。结果:治疗组伤后不同时间的创面愈合率均明显高于对照组,P<0.05。治疗组GM-CSF含量在不同的时相点均明显高于对照组(P<0.05)。蛋白印迹结果表明治疗组大鼠创面p-JNK表达量显著升高,并且各时相点均高于对照组(P<0.05)。结论:GM-CSF能促进大鼠创面组织愈合,其机制可能与JNK信号通路激活有关。
粒细胞巨噬细胞集落刺激因子;JNK信号通路;创面愈合
粒细胞巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)是一种多功能细胞因子,研究显示[1],GM-CSF具有促进创面愈合的作用,尤其是对于难愈性创面和慢性创面有显著疗效,但作用机制尚不明了。皮肤的创伤愈合是一个十分复杂精细的生物学过程,涉及到多条细胞信号传导通路[2]。我们对创伤愈合过程中JNK信号通路的变化进行初步研究,旨在为创面愈合治疗寻找新的药物靶点。
一、材料与方法
(一)主要试剂与仪器。
p-JNK和JNK抗体,外用型重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶和外用型凝胶基质,ELlSA试剂盒。
(二)方法。
将30只鼠(上海中国科学院实验动物中心,体重180-220g)随机分为治疗组和对照组,每组各15只。于其背部制作约2cmx2cm全层皮肤缺损创面。治疗组大鼠创面外涂重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子(rhGM-CSF)凝胶,对照组创面涂抹不舍任何药物的凝胶基质,分笼饲养,每日给药1次,直至创面完全封闭。
(三)观察指标。
观察伤后创面愈合率,使用数码相机对创面进行拍照并用Image J图像分析软件进行分析,创面愈合率=(原始创面面积-各时相点创面面积)/原始创面面积x100%,采用ELISA法测定GM-CSF含量,采用蛋白质印迹法检测JNK信号通路中蛋白表达量。
(四)统计学分析。
所得数据用SPSS软件13.0分析,组间比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
二、结果
大鼠创面愈合率结果如下(见表1)。
创面组织GM-CSF含量检测与JNK信号通路蛋白表达量果如下(见表2)。
表1 两组大鼠创面愈合率比较
表2 创面组织GM-CSF含量比较
三、讨论
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种多功能的造血生长因子,研究表明GM-CSF能作用于成纤维细胞、角质细胞和内皮细胞等,具有促进细胞增殖、分化和迁移等作用[3]。同时多种参与创面修复过程的细胞如角质细胞、内皮细胞等合成分泌GM-CSF,其中角质细胞是产生GM-CSF的主要细胞。参与了创面愈合过程并发挥了重要作用,但GM-CSF促进创面愈合的具体作用机制目前尚未清楚。MAPK因其调控多条信号通路而倍受学者们普遍关注,对细胞增殖、形态发生、细胞分化和凋亡的调节等方面均发挥着重要作用,其中JNK是其重要成员之一,JNK的激活能抑制角朊细胞的分化从而促进伤口的愈合,JNK通路的激活被认为在果蝇和鼠类伤口愈合细胞迁移过程中是必要的[4]。我们研究结果显示,治疗组伤后不同时间的创面愈合率均明显高于对照组,治疗组GM-CSF含量在不同的时相点均明显高于对照组。蛋白印迹结果表明治疗组大鼠创面p-JNK表达量显著升高,并且各时相点均高于对照组,说明JNK通路的激活可能在创面愈合过程中发挥重要作用。总之,我们的研究证实粒细胞巨噬细胞集落刺激因子可以显著促进创面的愈合,其机制可能与JNK信号通路激活有关。
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R644
B
1002-1701(2015)01-0129-02
2014-01
郭明锋,男,本科,主任医师,研究方向:烧伤科。
10.3969/j.issn.1002-1701.2015.01.069