老龄大鼠尿量、离子浓度及皮质醇的变化❋

吴君，韩芸，梁伟玲，荆雪宁，黄萍

(1.山东中医药高等专科学校，山东烟台264199;2.滨州医学院，山东烟台264003; 3.广州中医药大学，广州510006)

老龄大鼠尿量、离子浓度及皮质醇的变化❋

吴君1，韩芸2，梁伟玲1，荆雪宁1，黄萍3△

(1.山东中医药高等专科学校，山东烟台264199;2.滨州医学院，山东烟台264003; 3.广州中医药大学，广州510006)

目的:观察老龄大鼠24 h及水负荷后5 h尿量、尿中Na+、K+、Cl-浓度及血清皮质醇(Cort)含量的变化，研究肾虚多尿模型。方法:老年大鼠20只，青年大鼠20只，用代谢笼法测24 h尿量及水负荷5 h尿量，用生化分析仪测尿液中Na+、K+、Cl-浓度，采用ELISA测血中Cort的含量。结果:老龄大鼠5 h、24 h尿量明显增多，尿液中Na+、Cl-浓度明显增加，K+浓度明显降低，血清中Cort的含量明显降低。结论:老龄大鼠尿量增多，且Na+、K+及Cl-排泄异常，血清中Cort的含量明显降低，表明其可作为肾虚多尿模型进行试验研究。

老龄大鼠;尿量;离子浓度;皮质醇;

人口老龄化是当今世界大多数国家面临的共同问题，我国是老龄化发展最快的国家之一，无论男性女性，其老龄进程均与膀胱功能的显著改变和临床症状有关［1］。老年人排尿功能障碍也是由于各脏腑功能的失常及其各脏腑间的失调所致，但其中最主要的一个原因是膀胱失约，在病理情况下，如开合失调则可以引起“膀胱不利为癃，不约为遗溺”(《素问·宣明五气》)。因此，膀胱的病理表现主要是排尿异常，除膀胱直接感受湿热外邪等，多由肾病所累及。肾气充足，能温煦膀胱，固摄有权，膀胱开阖有度，以维持水液的正常代谢。本课题选用老龄大鼠作为研究对象，探讨其是否可以作为“肾虚多尿”的动物模型来验证药物“补肾缩尿”的功效。

1 材料

1.1 实验动物及饲养条件

SD大鼠(3月龄)SPF级，雌雄各半，体质量160～180 g，由广州中医药大学实验动物中心提供(许可证号SCXK(粤)2008-0020，合格证号0065097)。20月龄SD老龄大鼠SPF级，由成都达硕动物中心提供(许可证号SCXK(川)2008-24，合格证号0022687，动物实验设施使用证明号0043550及0032584)。饲养条件:温度(24±2)℃，湿度50%～70%，采用12 h∶12 h昼夜间断照明;每天添加饲料1次，换水2次，更换垫料2次;动物自由进食、饮水。

1.2 试剂与仪器

酶标仪:RT-2100C，美国RAYTO公司产品;日立7180型生化分析仪:日本日立公司产品; JA1203N型电子天平:上海精密仪器有限公司产品; TD25-WS多管架自动平衡离心机:赛特湘仪离心机仪器有限公司产品;三用电热恒温水浴箱，上海跃进医疗器械厂;JA1203N型电子天平:上海精密仪器有限公司产品。

2 方法

2.1 实验分组

取老年大鼠(20月龄)20只，青年大鼠(3月龄)20只，设置空白对照组20只，模型对照组20只。适应性饲养7 d，每天观察并记录动物的一般情况，包括活动、外观形态、毛色光泽、精神状态等变化。

2.224 h尿量及水负荷后5 h尿量

2组动物置于代谢笼中，禁食不禁水18 h后，留取24 h尿液测定尿量(放入和拿出前轻压大鼠下腹部排尽余尿)。根据大鼠体质量灌胃，各组均以3 mL/100 g的生理盐水做水负荷，然后按其下腹部排尽尿液，放入代谢笼内，收集5 h内尿量。

2.3 尿Na+、K+、Cl-浓度

将24 h总尿量收集的尿液取2 mL分装于试管中，用生化分析仪测定尿液中Na+、K+、Cl-浓度。保持实验室温度、湿度，尽量减少尿液挥发。

2.4 血清Cort的测定

收集尿液结束后，乙醚麻醉，大鼠眼眶静脉丛取血3 mL，置离心机中以4000 r/min离心10 min，取血清置-20℃冰箱备用。检测方法按照试剂盒操作说明进行。

3 结果

3.1 一般症状

老龄大鼠与空白对照组比较，出现倦卧、嗜睡懒动、行动迟缓、反应迟钝、毛发发黄无光、目光晦暗、精神不振等外部症状。

3.2 老龄大鼠5 h和24 h尿量变化

结果提示，与空白组比较，老龄大鼠5 h、24 h尿量明显增多(P＜0.05)。

表1 老龄大鼠5 h和24 h尿量变化(±s)

表1 老龄大鼠5 h和24 h尿量变化(±s)

注:与空白组比较:#P＜0.05;与空白组比较:##P＜0.01(下同)

组别鼠数5 h尿量(mL/100 g)24 h尿量(mL/100 g) 200.83±0.324.23±1.16模型组201.53±0.45#6.4±1.63空白组#

3.3 老龄大鼠尿中Na+、K+、Cl-浓度的变化

结果提示，与空白组比较，老龄大鼠尿液中Na+、Cl-浓度明显增加(P＜0.05～0.01)，K+浓度明显降低(P＜0.05)。

表2 老龄大鼠尿中Na+、K+、Cl－浓度变化(±s)

表2 老龄大鼠尿中Na+、K+、Cl－浓度变化(±s)

组别鼠数Na+(mmol/L)Cl-(mmol/L)K+(mmol/L) 2023.05±6.7570.28±29.8449.54±11.76模型组2026.74±11.21﹟94.34±32.47﹟﹟33.48±11.87空白组﹟

3.4 老龄大鼠血清Cort含量变化

结果提示，与空白组比较，老龄大鼠血清中Cort含量明显降低(P＜0.05)。

表3 老龄大鼠血清中Cort含量影响(±s)

表3 老龄大鼠血清中Cort含量影响(±s)

组别鼠数Cort含量(ng/mL) 20347.57±75.23模型组20242.193±51.23空白组﹟

4 讨论

随着老龄化的发展，尿频、尿急、夜尿增加等下尿路症状正逐渐成为影响老年人生活质量的主要原因之一。中医学指出，肾为先天之本，肾虚是衰老的根本原因之一。衰老是体内精气变化至一定阶段时出现的必然现象，肾中精气的盛衰决定着衰老的速度。肾虚证实为未老先衰，而衰老就是生理性肾虚，在进行肾阳虚的研究时可将老龄作为相应的研究对象［2］。很多临床观察以及相关报道也都倾向于阳虚，特别是肾阳虚是衰老之本的结论，而且表明肾阳虚的病理基础是下丘脑-垂体-靶腺轴功能下降。刘国林［3］对自然衰老大鼠进行观察及实验，结果表明自然衰老雄性健康SD大鼠具有肾阳虚的实质，能够作为肾阳虚动物模型来应用。此外据临床报道，年老时人的神经-内分泌和免疫机能下降，这与肾阳虚衰的病人极为相似，自然衰老虽不一定具有肾阳虚衰的表象，却具有肾阳虚的内涵，因此人们常将自然衰老动物作为肾阳虚动物模型［4］。

皮质醇是肾上腺皮质分泌的主要激素之一，是机体神经内分泌调节为重要的一环，其含量占血中17-羟类固醇总量的4/5，亦是现代医学研究神经内分泌生理病理变化的重要指标，也是研究肾理论的重要手段［5］。肾脏通过对Na+、K+及Cl-的排泄调节来维持机体内环境的稳态，如果Na+、K+及Cl-浓度出现异常则表明肾脏重吸收功能障碍。本研究发现，老龄大鼠出现倦卧、嗜睡懒动、行动迟缓、反应迟钝、毛发发黄无光、目光晦暗、精神不振等外部症状，5 h、24 h尿量明显增多;老龄大鼠尿液中Na+、Cl-浓度明显增加，K+浓度明显降低;老龄大鼠血清中Cort的含量明显降低，表明老龄大鼠可以作为“肾虚多尿”动物模型来验证药物“补肾缩尿”的功效，为后续进一步的试验研究开展打下了研究基础。

［1］赵新鸿，熊恩庆，宋波，等.老年大鼠膀胱逼尿肌舒张功能改变的神经机制研究［J］.华北国防医药，2004，1(1):36.

［2］沈自尹.肾阳虚证的定位研究［J］.中国中西医结合杂志，1997，17(1):50-51.

［3］刘国林.自然衰老SD大鼠肾阳虚模型的研究［D］.广州中医药大学硕士研究生论文，2005.

［4］沈自尹.从调理内环境着眼:论肾阳虚老年人潜能的异同［J］.中国中西医结合杂志，1993，15(6):362.

［5］丁桥年，师成杰，赵方萍，等.血皮质醇测定对中医肾虚理论的探［J］.青海医药杂志，1988，6:31-33.

Changes in urine，ion concentration and cortisol in aged rats

WU Jun1，HAN Yun2，LIANG Wei-ling1，JING Xue-ning1，HUANG Ping3△
(1．Shandong College of Traditional Chinese Medicine，Yantai 264199，China;2．Binzhou Medical University，Yantai 264003，China;3 Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China)

Objective:The model of excessive urination due to Kidney deficiency was investigated by observing the 24 h urination，5 h urination after the water load，urinary Na+、K+、Cl-concentration and the content of cortisol in serum was investigated in the aging rat.Methods:20 aged rats and 20 young rats were chosen.The 5 h urination after the water load in rats and 24 h urination was measured in metabolic cages.The urinary Na+、K+、Cl-concentration was measured by biochemistry analyzer.The concentration of Cort was detected by ELISA in the blood of the natural aging rats.Results The 5 h and 24 h urination of aging rats significantly increased.The quantity discharged of Na+、Cl-significantly decreased and K+increased，the content of Cort significantly decreased too.Conclusion:Excessive urination，Abnormal excretion of Na+、Cl-、K+and the Content decreased significantly in serum，which indicate the aged rats were used as the model of excessive urination due to kidney deficiency for experimental study.

Aged rats;Urination volume;Ion concentrations;Cortisol

R285.5

:B

:1006-3250(2015)05-0515-02

2015-02-09

国家自然科学基金资助项目(30873425);山东省高等学校科技计划项目(J12LM52);山东中医药高等专科学校中西医基础重点学科资助

吴君(1981-)，男，山西人，讲师，医学博士，从事中药复方药理的临床与研究。

△通讯作者:黄萍，教授，从事中药新药与保健品的研发，Tel:18254579188，E-mail:hping@gzhtcm.edu.cn。