白藜芦醇对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

李国伟

(太康县人民医院，河南 太康 475400)

白藜芦醇对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

李国伟

(太康县人民医院，河南 太康 475400)

目的：探讨白藜芦醇对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用和机制。方法：将64只健康雄性Wistar大鼠随机均分为假手术组、模型对照组、白藜芦醇40 μg/g组和白藜芦醇20 μg/g组4组，每组16只。白藜芦醇40，20 μg/g组大鼠于造模前30 min腹腔注射相应质量分数的白藜芦醇溶液，假手术组和模型对照组大鼠仅予以同体积的8.5 g/L NaCl溶液，连用7 d。造模结束后，采用生物化学法测定各组大鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)，采用TUNEL法测定肾组织的细胞凋亡状况。结果：白藜芦醇40，20 μg/g组血清Cr、BUN水平低于模型对照组(P<0.05)；其肾组织SOD、GSH-Px水平高于模型对照组，而MDA水平低于模型对照组(P<0.05)；其肾组织凋亡指数低于模型对照组(P<0.05)。白藜芦醇两剂量组间的血清Cr、BUN水平，肾组织SOD、GSH-Px、MDA水平及凋亡指数对比，差别均有统计学意义(P<0.05)。结论：白藜芦醇能够通过抗氧化和抗凋亡作用保护大鼠肾缺血再灌注损伤。

肾缺血再灌注损伤/药物作用；白藜芦醇/药效学；肌酐；尿素氮；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化物酶；丙二醛；凋亡指数

肾缺血再灌注损伤多见于肾移植、肾脏供血动脉损伤、肾脏挫伤等病理生理过程中，自由基过剩、钙超载、细胞凋亡、炎症反应等均参与了其发生、发展过程[1-2]。白藜芦醇是一种多酚类化合物，提取自桑椹、虎杖、葡萄等，具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等作用，已被证实能够保护大脑、心脏、肝脏、肾脏等器官或组织的缺血再灌注损伤[3-4]。本研究观察了白藜芦醇对大鼠肾缺血再灌注模型血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)，肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)，以及肾脏细胞凋亡指数的影响，探讨其对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用和机制。

1 材料与方法

1.1 动 物

健康雄性Wistar大鼠64只，6月龄，体质量(350±37)g，由河南省实验动物中心提供，质量合格证号：SCXK(豫)2013-0001。

1.2 药品、试剂与仪器

白藜芦醇，纯度≥98%，西安天一生物技术有限公司产品，批号130712；临用前以8.5 g/L NaCl溶液配制成质量分数为4，2 g/L的白藜芦醇溶液，然后根据大鼠体质量按10 μL/g给药。血清Cr、BUN试剂盒，购自上海申索佑福医学诊断用品有限公司，批号依次是130824、130812；SOD、GSH-Px、MDA、考马斯亮兰蛋白试剂盒，购自南京建成生物工程研究所，批号依次是20130817，20130815，20130807，20130820；TUNEL试剂盒，美国Roche公司产品，批号13211142483。C8000全自动生化分析仪，美国Abbott Laboratories公司产品；721型分光光度计，上海第三分析仪器厂产品。

1.3 动物分组、用药与模型的建立

将64只大鼠随机分为假手术组、模型对照组、白藜芦醇40 μg/g组和白藜芦醇20 μg/g组4组，每组16只。白藜芦醇40 μg/g组、白藜芦醇20 μg/g组大鼠于造模前30 min腹腔注射相应质量分数的白藜芦醇溶液，假手术组和模型对照组大鼠予以等体积质量分数为8.5 g/L NaCl溶液，连用7 d。大鼠肾缺血再灌注模型的建立：造模前禁食、禁水12 h，腹腔注射10 g/L 戊巴比妥钠(0.4 μL/g)麻醉，常规术前准备，腹腔正中切口，切除左肾以避免健侧代偿的发生，游离右肾动、静脉并夹闭，缺血1 h并再灌注4 h。假手术组仅切除左肾和游离右肾动、静脉，而不夹闭。

1.4 检测指标

1.4.1 血清Cr、BUN

造模结束时，采集每组中8只大鼠的静脉血5 mL，4 ℃ 3 500 r/min离心10 min，测定血清Cr、BUN。

1.4.2 肾组织SOD、GSH-Px和MDA

将采集完静脉血的大鼠处死，取右侧肾脏，称取100 mg肾皮质，添加8.5 g/L NaCl溶液，制成匀浆，4 ℃ 3 500 r/min离心10 min，取上清液，测定SOD、GSH-Px和MDA，并用考马斯亮兰法测定总蛋白检测。

1.4.3 肾脏细胞凋亡指数

将各组剩余的8只大鼠处死，取右侧肾脏，切取合适大小的组织块，经40 g/L多聚甲醛固定，制成蜡块，4 μm厚度切片，进行TUNEL染色，计算凋亡指数。阳性结果判断：TUNEL染色后，正常肾细胞的细胞核呈蓝色；细胞膜明显皱缩，细胞核呈棕黄色，且未见炎症反应，判定为阳性。高倍镜(400倍)下计数凋亡细胞及总细胞数，并选择5个视野取其平均值，其中凋亡指数=(总凋亡细胞数/总观察细胞数)×100%。

1.5 统计学方法

2 结 果

2.1 各组血清Cr、BUN水平对比

见表1。

组 别Cr/(μmol·L-1)BUN/(μmol·L-1)假手术组37.24±5.84*9.96±1.38*模型对照组180.43±28.5985.23±10.80白藜芦醇40μg/g组89.22±17.61*32.08±5.76*白藜芦醇20μg/g组110.27±20.39*#40.18±8.33*#F值257.42589.241P值<0.001<0.001

注：与模型对照组对比，*P<0.05；与白藜芦醇40 μg/g组对比，#P<0.05。

2.2 各组肾组织SOD、GSH-Px和MDA水平对比

见表2。

组 别SOD/(U·mgport-1)GSH-Px/(U·mgport-1)MDA/(nmol·mgport-1)假手术组215.69±33.21*189.45±19.67*2.16±0.33*模型对照组80.07±15.6170.20±11.329.62±1.54白藜芦醇40μg/g组142.66±20.54*121.78±17.60*4.29±1.18*白藜芦醇20μg/g组117.35±17.03*#100.29±15.25*#6.89±1.42*#F值279.447450.61333.743P值<0.001<0.001<0.001

注：与模型对照组对比，*P<0.05；与白藜芦醇40 μg/g组对比，#P<0.05。

2.3 各组肾脏细胞凋亡指数对比

见表3。

组 别凋亡指数/%假手术组6.22±1.58*模型对照组41.64±7.22白藜芦醇40μg/g组19.79±5.37*白藜芦醇20μg/g组26.90±6.73*#F值75.005P值<0.001

注：与模型对照组对比，*P<0.05；与白藜芦醇40 mg/kg组对比，#P<0.05。

3 讨 论

本研究从自由基及细胞凋亡两个方面观察白藜芦醇对肾缺血再灌注损伤的影响，在所选指标中，Cr、BUN用于肾脏损伤的严重程度评估，SOD、GSH-Px和MDA用于判断机体清除自由基能力及过氧化程度，凋亡指数用于评估肾脏组织细胞凋亡的发生情况。有研究[3,5]显示：白藜芦醇对缺血再灌注损伤的主要保护机制是提高机体自由基清除酶的活性、减轻机体的炎症反应、阻止细胞凋亡的发生发展、改善缺血再灌注部位的微循环状态、抗凝作用，减轻钙超载现象，以及减轻线粒体的破坏程度。本文结果显示：模型对照组血清Cr、BUN水平低于假手术组(P<0.05)，提示造模成功；白藜芦醇40，20 μg/g组血清Cr、BUN水平低于模型对照组(P<0.05)，提示白藜芦醇能够减轻肾缺血再灌注损伤损伤；其肾组织SOD、GSH-Px水平高于模型对照组，而MDA水平低于模型对照组(P<0.05)，提示白藜芦醇对肾缺血再灌注损伤组织具有抗氧化作用；其肾组织凋亡指数低于模型对照组(P<0.05)，提示白藜芦醇具有抗凋亡作用。白藜芦醇两剂量组血清Cr、BUN水平，肾组织SOD、GSH-Px、MDA水平及凋亡指数对比，差别均有统计学意义(P<0.05)，提示白藜芦醇的这些作用可能具有剂量依赖性，在一定范围内剂量越高，效果越明显。本研究表明：白藜芦醇能够通过抗氧化和抗凋亡作用来保护大鼠肾缺血再灌注损伤。

[1]傅耀文，张文岚，薛立娟.缺血再灌注对肾细胞内钙水平和细胞凋亡的影响[J].中华泌尿外科杂志,2004,25(12):834-837.

[2]Ziypak T, Halici Z, Alkan E, et al. Renoprotective effect of aliskiren on renal ischemia/reperfusion injury in rats: electron microscopy and molecular study[J].Ren Fail, 2015, 37(2):343-354.

[3]徐冰，林焕冰，王茜,等.白藜芦醇苷对脑缺血再灌注模型大鼠的保护作用[J].中国药房,2013,24(43):4040-4043.

[4]战仕花，王苹，尹万忠.白藜芦醇对喉癌Hep-2细胞顺铂敏感性的增强作用及其机制[J].吉林大学学报：医学版,2015,41(2):282-286.

[5]刘辉.白藜芦醇对大鼠脊髓缺血再灌注损伤组织的保护作用[J].中国实用神经疾病杂志,2014,17(19):99-100.

(编辑 陶 珠)

1001-6910(2015)07-0053-03 ·实验研究·

R22

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.07.27

2015-04-22；

2015-05-06