宫颈病变组织中 USP22、HIF-1α表达变化

摘要:目的　观察宫颈病变组织中泛素特异性肽酶22(USP22)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达变化。方法选择15例正常宫颈(对照组)、25例CIN(CIN组)、45例宫颈癌(宫颈癌组)患者的宫颈组织，分别用免疫组化法、RT-PCR法检测各组宫颈标本中的USP22、HIF-1α蛋白及mRNA。结果　对照组、CIN组、宫颈癌组USP22蛋白阳性表达率分别为0、32．0%、57．8%，HIF-1α蛋白阳性表达率分别为20．0%、56．0%、82．2%。各组USP22、HIF-1α蛋白阳性表达率比较，P均＜0．05。对照组、CIN组、宫颈癌组USP22 mRNA相对表达量分别为1．047±0．339、2．214±0．866、5．822±5．489，HIF-1α mRNA相对表达量分别为1．048±0．315、2．305±1．083、4．313±3．122，各组USP22、HIF-1α mRNA相对表达量比较，P均＜0．05。结论　宫颈组织USP22、HIF-1α表达随宫颈病变恶性程度提高而升高，二者共同参与宫颈恶性病变的发生发展过程。

doi: 10．3969/j．issn．1002-266X．2015．38．022

文献标志码: B

文章编号: 1002-266X(2015)38-0056-02

通信作者:孔红霞

宫颈癌是全球最常见的妇科恶性肿瘤之一。从宫颈上皮内瘤变(CIN)演变成宫颈癌一般历时数年，其间适当干预可阻止恶变。泛素特异性肽酶22 (USP22)是一种特异性较高的去泛素化酶，在多种恶性肿瘤中普遍高表达，也是肿瘤干细胞标志物之一 ［1～3］，但在宫颈疾病的表达国内尚未见报道。缺氧诱导因子1α(HIF-1α)是组织细胞在缺氧状态下最主要的转录因子，在肿瘤的血管形成、能量代谢、侵袭转移等方面起着关键作用 ［4］。2014年1～10月，我们检测比较了正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中USP22、HIF-1α蛋白及mRNA表达，探讨二者在宫颈癌和CIN诊断、治疗及预后判断中的临床价值。现报告如下。

1材料与方法

1．1临床资料　宫颈癌组织45例(宫颈癌组)，取自行子宫全切术治疗的宫颈癌患者，年龄29～65 岁;腺癌2例，鳞癌43例;临床分期Ⅰ期18例，Ⅱ期20例，Ⅲ期及以上7例;病理分级G 1级20例，G 2级14例，G 3级11例;术前均未接受放化疗。CIN标本25例，取自行宫颈锥切术或子宫全切术的CIN患者，年龄24～55岁;正常宫颈组织标本15例(对照组)，取自子宫肌瘤行子宫全切术患者，年龄40～59岁。

1．2 USP22、HIF-1α蛋白检测方法　采用免疫组化法。取各组宫颈组织标本，甲醛固定，石蜡包埋。免疫组化染色试剂盒购于武汉三鹰生物技术有限公司，严格按说明书操作。USP22以细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性，HIF-1α以细胞核和细胞质中均出现棕色颗粒为阳性。高倍镜下取10个视野，每个视野至少计数100个细胞。阳性细胞数＜5%为0分，5%～25%为1分，25%～50%为2分，51%～75% 为3分，≥75%为4分;阳性细胞染色强度，细胞无显色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，黄棕色为3分。2项评分乘积＜1为阴性，≥1为阳性。

1．3 USP22、HIF-1α mRNA检测方法　采用RTPCR法，严格按照试剂盒说明书操作，以GAPDH作为内参。ΔCT = CT(目的基因)－CT(内参基因)，以ΔCT值代表宫颈组织目的基因的表达情况，以2 －ΔΔCT代表各组宫颈组织目的基因表达相对于内参的变化倍数。

1．4统计学方法　采用SPSS 16．0统计软件。组间比较采用χ 2检验和方差分析。P＜0．05为差异有统计学意义。

2　结果

2．1 USP22、HIF-1α蛋白　对照组、CIN组、宫颈癌组USP22蛋白阳性表达率分别为0、32．0%(8/25)、57．8% (26/45)，HIF-1α蛋白阳性表达率分别为20．0% (3/15)、56．0% (14/25)、82．2% (37/45)。各组USP22、HIF-1α蛋白阳性表达率比较，P均＜0．05。。

2．2 USP22、HIF-1α mRNA对照组、CIN组、宫颈癌组USP22 mRNA相对表达量分别为1．047± 0．339、2．214±0．866、5．822±5．489，HIF-1α mRNA相对表达量分别为1．048±0．315、2．305±1．083、4．313±3．122;各组USP22、HIF-1α mRNA相对表达量比较，P均＜0．05。

3　讨论

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤，分子靶向治疗已经成为近年来宫颈癌研究的热点 ［5］。USP22是泛素特异性水解酶家族成员之一，在各种恶性肿瘤中高度表达。其基因位于人类第17号染色体上，编码的蛋白质主要通过去泛素化的作用，调节修饰细胞内一系列的生物化学反应，如细胞的生长分化、控制细胞周期、激活转录因子、调控信号转导通路等。研究 ［6］认为，USP22可作为肿瘤干细胞新标签，有望成为控制肿瘤的关键点。其作用机制可能是USP22将组蛋白H2A、H2B泛素化作用降解，从而控制基因复制和表达，以此调节细胞周期 ［7］。邓美洲等 ［8～10］采用RNA干扰技术有效沉默USP22基因表达，明显抑制了肿瘤细胞生长，但具体机制仍不明确。胡晶等 ［10］报道，USP22表达与小细胞肺癌病理分级、临床分期、淋巴转移等密切相关。近年来有学者报道，USP22在直肠癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、口腔鳞癌、食管鳞癌中高表达，但在宫颈癌中的表达国内尚无报道。本研究结果显示，USP22蛋白、mRNA在宫颈癌组织中同样高表达，提示USP22在宫颈癌的发生发展中起着关键作用。

HIF-1α是与肿瘤缺氧微环境有关的核心转录因子 ［11］。正常组织中HIF-1α主要通过泛素化作用降解，若过表达则会导致下游的靶基因高表达。例如，HIF-1α作用于糖酵解关键酶为肿瘤的生长提供能量，或作用于血管内皮生长因子(VEGF) ［12］等，从而为肿瘤血行转移和淋巴转移提供了保障。文献 ［13］报道，宫颈癌组织中HIF-1α表达与组织病理分级、分期等相关，可作为早期宫颈癌和宫颈癌预后的判断指标。尤其是HIF-1α、VEGF在宫颈癌中的表达高度相关 ［13，14］，更进一步证实，HIF-1α为宫颈癌肿瘤细胞生长提供了血供，为肿瘤细胞转移开辟了道路。本研究结果与之相符。本研究结果显示，宫颈病变组织中USP22、HIF-1α表达变化趋势一致。这可能是由于USP22去除了与HIF-1α结合的泛素，使HIF-1α高表达; HIF-1α作用于下游VEGF促使血管生成，为淋巴结转移开辟道路，同时激活糖酵解的关键酶为肿瘤提供能量。USP22过表达可调节细胞周期，使肿瘤细胞无限增殖，无限增殖的肿瘤细胞就会形成缺氧微环境;这一方面诱导了HIF-1α的高表达，另一方面又可反过来影响机体泛素—去泛素化的平衡，激发USP22高表达。有研究 ［15］表明，当细胞处于氧饱和度相对较高的状态下，HIF-1α几乎不表达。是否可以通过调节氧浓度来调控USP22的表达从而控制肿瘤发展，有待进一步研究。