GP73在胃癌组织中的表达及意义

福建医科大学附属龙岩第一医院（364000）林承春 林栋 黄建青

福建省龙岩市第二医院（364000）邱小辉△

胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一, 寻找胃癌发生、发展的相关基因，了解胃癌的分子遗传学机制，为胃癌的预防、诊断、治疗提供理论基础是目前的研究热点。本实验研究胃癌细胞中是否存在GP73的差异表达有助于深入理解GP73的生理病理机制，并有助于评价其作为血清肿瘤标志物的应用前景。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 病例选择 选自2012年1月～2013年8月哈尔滨医科大学附属第一临床医学院胃癌患者术后所取组织，年龄27岁～89岁，平均年龄58岁，所有患者均未合并其他系统恶性肿瘤。经病理科所证实的原发性胃癌石蜡包埋组织71例, 选取相配对的胃癌旁组织30例作为正常的胃黏膜对照标本。

1.1.2 实验试剂 兔抗人GP73多克隆抗体：购自北京博奥森生物科技有限公司；辣根过氧化物酶DAB显色剂，抗体稀释液：购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 实验方法及步骤 选取所需标本-胃癌组织标本及胃癌旁组织标本；常规石蜡包埋。连续切片5μm，每例各备2张，分别作HE染色，GP73免疫组化染色，试剂盒内已知阳性片作为阳性对照。

1.3 阳性结果的判定 细胞质或细胞核出现细致棕色颗粒定义为阳性细胞。GP73主要定位于细胞质，参照Carcangiu等半定量评分方法，根据阳性细胞数和着色强度计分，细胞着色按无色、淡棕色、棕黄色和棕褐色分别评为0、1、2、3分，阳性细胞数量按小于5%，5%～35%，36%～70%和大于70%分别记为0、1、2、3分，再根据两项评分的积，≤1分为-，2～3分为+，4～5分为++，≥6分为+++。

1.4 实验统计学处理 统计方法采用SPSS19.0进行统计分析，计数资料的比较应用卡方检验，两变量相关性分析应用Spearman相关性分析，P＜0.05有统计学差异。

2 结果

2.1 GP73蛋白在胃癌与癌旁正常组织中的表达 免疫组化结果显示：GP73蛋白表达定位于细胞质，呈棕黄色颗粒状；GP73蛋白在胃癌组织和癌旁正常组织中的阳性表达率分别为26.8%和86.7%，胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 GP73蛋白的表达与胃癌临床病例因素的关系 GP73表达水平与胃癌的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移相关，差异有统计学意义（P＜0.05）；而与年龄、性别、组织学分级、肿瘤大小无关。TNM分期中Ⅲ～Ⅳ期组、浸润深度（T3+T4）组和有淋巴结转移组的阳性表达率低于TNM分期Ⅰ～Ⅱ、浸润深度（T1+T2）组和无淋巴结转移组。GP73在胃癌组织学分级低分化组的阳性表达率（20%）比高、中分化组的表达率（25%、46.7%）低。

3 讨论

GP73在人正常结肠、肺、肾、前列腺等多个器官组织中均有表达，但表达水平相差很大，最高可达20倍。GP73主要表达于上皮细胞，本实验通过免疫组织化学研究GP73在胃癌组织中的表达，发现GP73在癌旁正常组织中阳性表达率为：86.7%，进一步证实了GP73蛋白在胃组织中的高水平表达。

GP73mRNA在胃、结肠、气管、前列腺等组织中表达水平较高，而在胎盘、脾脏、骨骼肌、淋巴组织、白细胞、正常肝细胞等组织中表达低或没有表达。发现高尔基体的凋亡相关蛋白在高分化胃癌细胞中明显高于低分化胃癌细胞，而与细胞增殖分化有关的蛋白在低分化胃癌细胞的高尔基体中又明显增多。首次明确了在胃癌分化程度不同时高尔基体的蛋白变化情况，但该项研究并未涉及到GP73。本实验研究发现GP73蛋白胃癌组织中的阳性率为：26.8%，明显低于癌旁正常组织，两者差异具有统计学意义（P＜0.05）。说明GP73的表达变化与胃癌的发生、发展有关，提示GP73其可能参与了胃癌的发生、发展，在区别胃癌的恶性程度中起着重要的作用。