草酸钙肾结石患者肾脏组织中纤维黏连蛋白的表达及意义

木拉提·马合木提, 袁留亚, 杜广建, 张　涛,

艾克帕尔·阿布拉1, 艾尼瓦尔·牙生2

(1. 新疆医科大学第二附属医院 泌尿外科, 新疆 乌鲁木齐, 830028;

2. 新疆医科大学第一附属医院 泌尿中心, 新疆 乌鲁木齐, 830054)

草酸钙肾结石患者肾脏组织中纤维黏连蛋白的表达及意义

木拉提·马合木提1, 袁留亚1, 杜广建1, 张涛1,

艾克帕尔·阿布拉1, 艾尼瓦尔·牙生2

(1. 新疆医科大学第二附属医院 泌尿外科, 新疆 乌鲁木齐, 830028;

2. 新疆医科大学第一附属医院 泌尿中心, 新疆 乌鲁木齐, 830054)

摘要:目的探讨纤维连接蛋白(FN)在草酸钙肾结石患者肾脏组织中的表达及意义。方法选取14例草酸钙肾结石患者作为病例组，另选取同期因其他非肾结石原因接受肾脏切除的12例患者作为对照组。采用免疫组化染色法(S-P法)对2组患者进行FN抗体染色。结果病例组中8例为中到强阳性表达，而对照组中只有2例为中到强阳性表达。2组FN表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论FN在草酸钙肾结石患者肾脏组织中呈强阳性表达。

关键词:纤维连接蛋白; 草酸钙结石; 免疫组化

纤维连接蛋白(FN)是一种非胶原性的a2糖蛋白，目前研究[1]发现其作用有参与细胞与细胞、细胞与基质之间的黏连，维持细胞的正常形态、为细胞基质再生起支架作用、促进细胞迁移、对单核-巨噬细胞有趋化作用、参与止血与血液凝固、通过调理作用增强吞噬细胞的吞噬能力等作用。有研究发现随着肾间质纤维化程度的加重，FN的表达随之升高。本研究通过对草酸钙肾结石肾脏组织FN 免疫组化染色，探讨FN在草酸钙肾结石肾脏组织中的表达及意义，现报告如下。

1资料与方法

1.1　一般资料

选取2013年4—9月在本院接受经皮肾镜技术(PCNL)及开放手术治疗的14例草酸钙肾结石患者作为病例组。另选取同期因其他非肾结石原因(肾脏外伤性破裂、肾脏肿瘤、肾盂输尿管交.界处狭窄至肾脏积水无功能)接受肾脏切除的12例患者作为对照组。所有入选者均知情同意，且本研究得到新疆医科大学第二附属医院伦理委员会的批准。

1.2　方法

采用兔抗人FN多克隆抗体和SP试剂盒，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化染色采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(S-P法)，具体步骤参照北京中杉金桥生物技术有限公司提供的UltraSensitiveTMS-P免疫组化染色步骤说明进行。免疫组化染色过程中，每例均以PBS液代替一抗作为阴性对照，以正常肾皮质组织作为阳性对照。

免疫组化分析FN染色阳性结果判定请病理科专家判读。FN主要定位于肾脏皮质组织的细胞外基质。光镜下(400倍)随机观察3个高倍视野，根据着色强度的多少进行评分，未无未着色记为阴性(-)，弱阳性(浅棕色)记为(+)，中等阳性(棕色)性记为(2+)，强阳性(深棕色)性记为(3+)。

1.3　统计学方法

应用SPSS 17.0软件进行统计分析，两组间两两比较采用非参数Mann-Whitney U秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

病例组中8例为中到强阳性表达，其中(-)2例，(+)4例，(2+)6例，(3+)2例，阳性细胞外基质表现为棕色或深棕色着色；对照组中只有2例为中到强阳性表达，其中(-)6例，(+)4例，(2+)1例，(3+)1例。病例组FN的阳性表达程度显著高于对照组，差异有统计学意义(U=44,P=0.032)。

3讨论

泌尿系结石是一种世界范围内的常见病、多发病，其中草酸钙及含草酸钙的泌尿系结石约占85%。其病因仍未完全明确，目前发现与生活习惯、自然环境、遗传等因素密切相关，发病有明显的地区差异和种族差异[2-4]。研究[5]显示草酸钙结石可能是由于基因变异与其他因素综合作用而形成的最常见的结石。

FN是一种单基因编码组成的多功能糖蛋白，分子量230 KD，其基因定位于人类染色体2q34～36, Patel证明约有50个外显子。除少数例外，基因上的外显子与蛋白肽链中的重复序列相对应。既往研究[4]中，尿中柠檬酸盐和镁这两种离子抑制剂和大分子化合物TH蛋白、酸性黏多糖、肾钙素、骨桥蛋白和纤维连接蛋白等非离子大分子被认为可能是肾结石的保护因素。FN主要由成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞合成和分泌，也可由血浆FN转化而来。FN是网状内皮系统的调理素，具有止血、抗血栓、促进细菌黏附、调节细胞分裂和增殖、增进细胞连接、促进组织修复等功能，其最重要和最根本的功能特性是参与细胞与细胞、细胞与基质之间的黏连[6]。纤维连接蛋白能够结合纤维蛋白及纤维蛋白原，是其他胶原沉积于肾小管和间质的先决条件之一，可能是作为这些细胞外基质成分之间的中心环节而起作用，同时纤维连接蛋白也是一种重要的调理介质，其通过与整合素的结合在介导细胞增殖与器官硬化过程中起着重要作用[7]。FN还对成纤维细胞具有化学趋动作用和细胞运动的基质作用[8]，能吸引成纤维细胞向创伤区定向迁移，促进肉芽组织向创伤区生长，以增生修复损伤的组织结构。当肾小管上皮受损时晶体易在其表面成核和生长，可能是草酸钙结石最初成核部位[9-10]。体外研究[11-12]表明，FN可以结合到草酸钙晶体表面，通过抑制草酸钙晶体的内吞和草酸钙晶体对肾小管上皮细胞的黏附作用，从而抑制草酸钙结石的形成，因此被认为是尿液中草酸钙结石的主要抑制因子之一。

本研究中，病例组肾组织中FN的表达明显较对照组增高，说明草酸钙结石可以刺激FN的过度分泌，从而抑制草酸钙结石的进一步形成。国外学者[13-14]也曾发现在不活动的复发性结石患者中，草酸钙结晶可以刺激肾小管过度分泌FN，且作用强度与FN的量有关。在草酸钙晶体的刺激下肾小管上皮细胞的不同基因可能变异，这些基因的变异可能导致蛋白质的表达发生改变[15]。在本研究中发现，对照组中只有2例为中到强阳性表达，6例不表达FN，而在病例组肾脏组织细胞外基质中8例为中到强阳性表达。虽然FN具有抑制结石形成和生长的作用，但草酸钙晶体形成过多时，FN可能失去了抑制草酸钙晶体的作用。这也反映了这一阶段FN不断增加、沉积，并发生细胞与细胞外基质之间的生物学效

应，使细胞和胶原、纤维蛋白等结合更加紧密，加重了肾脏实质的纤维化。这可能是草酸钙晶体刺激引起FN表达过高，从而引起肾纤维化[16]。

参考文献

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[15]Miyazawa K, Aihara K, Ikeda R, et al. cDNA macroarray analysis of genes in renal epithelial cells exposed to calcium oxalate crystals[J]. Urol Res,2009,37(1):27.

[16]朱恒梅, 祝胜郎, 陈结慧,等. 多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖致大鼠肾脏系膜细胞细胞外基质沉积中的作用[J].中国医药导报, 2012, 31(9): 8.

Expression and significance of fibronectin in kidney tissue of patients with calcium oxalate nephrolith

MULATI Mehmut1, YUAN Liuya1, DU Guangjian1, ZHANG Tao1,

AIKEPAER Abula1, AINIWAER Yasheng2

(1.DepartmentofUrinarySurgery,TheSecondAffiliatedHospitalofXinjiangMedical

University,Urumqi,Xinjiang, 830028; 2.UrinaryCenter,TheFirstAffiliated

HospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi,Xinjiang, 830054)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the expression and significance of fibronectin (FN) in kidney tissue of patients with calcium oxalate nephrolith. MethodsA total of 14 patients with calcium oxalate nephrolith were enrolled into medical case group and another 12 patients in the same period underwent nephrectomy were selected as control group. FN antibody was stained in both groups by immunohistochemistry staining (S-P method). ResultsThere were 8 patients with median to strong positive expression in the medical case group and 2 patients in the control group. There was significant difference of FN expression between the two groups (P<0.05). ConclusionFN can express strongly and positively in patients with calcium oxalate nephrolith.

KEYWORDS:fibronectin; calcium oxalate nephrolith; immunohistochemistry

通信作者:艾尼瓦尔·牙生, E-mail: mekit@126.com

基金项目:新疆维吾尔自治区自然科学基金面上项目(201211A048)

收稿日期:2014-12-19

中图分类号:R 692.4

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)05-146-02DOI: 10.7619/jcmp.201505054