基于21种医院外用制剂微生物限度检查方法学验证的研究修改

何佩贞

（广西医科大学第一附属医院药学部 广西 南宁 530021）

基于21种医院外用制剂微生物限度检查方法学验证的研究修改

何佩贞

（广西医科大学第一附属医院药学部 广西 南宁 530021）

目的：分析基于21种医院外用制剂微生物限度检查方法学验证。方法：按照2010年版本的《中国药典》规定，选取本市21种医院外用制剂完成细菌、霉菌及酵母菌计数方法以及控制菌检查法完成相应的检验工作。结果：在21种医院外用制剂中，有14种外用制剂回收率≤70.00%，控制菌检查结果得到，其中有8种制剂品种试验菌无法检出，需要进行深入的培养基稀释法、薄膜过滤法、离心法以及中和法等方法来完成试验。结论：被检样品一定要完成微生物限度检查方法学验证，这样才可以促使检验结果具有高度的有效性以及准确性。

医院外用制剂；微生物限度；检查方法；验证

试验条件的好坏会直接影响到微生物试验结果的影响性，尤其在制剂中混有大部分较强的抑菌成分的时候，如果只是使用常规性质的微生物限度检查方法，得到的结果就很难顺利的将 污染的微生物情况有效的反映出来。根据2010年版本的《中国药典》中药品的微生物限度检查法的相关规定得到，需要使用相应的检验方法完成验证。所以，本次研究选取本市21种医院外用制剂完成细菌、霉菌及酵母菌计数方法以及控制菌检查法完成相应的检验工作。以下为详细的报道内容：

1.基本资料以及检验方法

1.1 基本资料

1.1.1 样品采集

选取本市21种医院外用制剂，详细为：止汗擦剂、炉甘石洗剂、酒渣鼻洗剂、补骨脂酊、含酚炉甘石洗剂、雷佛奴尔溶液、硫磺白色洗剂、苯酚滴耳液、氢化可的松软膏、醋酸洗必泰溶液、新氢松乳膏、尿素霜、氧化锌软膏、酮康唑霜、复方苯甲酸软膏、水杨酸软膏、硫磺霜、复方锌氧粉、足癣浸泡剂、磺胺嘧啶银霜、复方氯霉素洗剂。每一份制剂取样3个批号。上述样品均由3家医院提供。

1.1.2 试验菌株以及试药配置

选取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌。营养肉汤培养基、玫瑰红钠琼脂培养、营养琼脂培养基等，上述所有试剂都是分析纯。

1.2 检验方法

严格按照2010年版本的《中国药典》相关规定，每一份样品分别开展超过三次的平行试验，计算其回收率高低［1］。

1.2.1 制备菌液

1）选取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌以及枯草芽孢杆菌营养肉汤培养物，其培养温度为37摄氏度，经过18～24小时的培育，取1ml的培养物以及9ml浓度的0.9%无菌氯化钠溶液，完成10倍稀释，直到10－6为止，统计其倍稀释得到，含菌数为50～100cfu／ml，完成活菌计数，放置备用。

2）选取白色念珠菌改良马丁液体培养物，其培养温度为25摄氏度，经过18～24小时的培育，取1ml的培养物以及9ml浓度的无菌氯化钠溶液，稀释同上，统计其倍稀释得到，含菌数同上，完成活菌计数，放置备用。

3）选取黑曲霉斜面培养物，其培养温度为25摄氏度，经过7天的培育，在培养物加入4ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱。将菌液吸取出来，之后取1ml的混合液以及9ml的盐水，完成10倍稀释，直到10－4为止，孢子数大致上是50～100cfu／ml的孢子悬液，放置备用［2］。

1.2.2 制备供试液

在上述液体制剂和混悬剂中选取10ml或10g的供试品，将PH值为7.0的无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液加入样品中，直到100ml，均匀混合在一起。最后完成1：10供试液的配制，放置一边等测量。对上述难以溶于水的固体制剂以及半固体制剂，就需要选取5g的供试品，在其中加入5g的司盘80、10g的聚山梨酯80无菌混合物、3g的单硬脂酸甘油酯，将上述混合物放置烧杯中，使用无菌玻棒搅拌，待其成为团状之后就在其中加入PH值为7.0的无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液（温度为45度）加入样品中，直到100ml，边加边搅拌，最大程度的乳化供试品，作为1：20的供试液。使用最低稀释级供试液完成试验。

1.2.3 验证试验

验证酵母菌计数方法、细菌计数方法以及霉菌计数方法。根据相应的药典进行验证试验，4组试验得到：首先是实验组，选取1ml制备的供试液，同时选取50～100cfu的试验菌，将其分别注入平皿，将琼脂培养基倾入，每一株试验菌需要平行制备两个平皿，在培养完成之后需要对其菌数进行详细的点计。其次菌液组，多所加的试验菌数进行有效的测定。接下来是供试品对照组：选取跟试验组一致供试液测定供试品的本底菌数。最后是稀释剂对照组，供试品由相应的稀释剂替代，将试验菌加入，保持最终菌浓度为1ml供试液含50～100cfu，对其菌落数进行有效的测定［3］。

2.结果

经过实验之后，基于21种医院外用制剂中，有14种（66.67%）外用制剂回收率≤70.00%，控制菌检查结果得到，其中有8种（38.09%）制剂品种试验菌无法检出，则需要开展深入的培养基稀释法、薄膜过滤法、离心法以及中和法等方法来完成试验。

3.讨论

根据结果得到，需要使用很多种联合方法才可以有效的消除抑菌活性。在开展医院制剂的方法验证活动的过程中，需要根据实际情况使用常规实验方法以及培养基稀释法或者是联合使用中和法，最后还需要使用薄膜过滤法，按照上述顺序完成工作［4］。因为薄膜过滤法虽然是一个较为可靠的方法之一，但是大部分难溶于水的医院制剂而言，薄膜过滤法难以有效的完成操作，在完成试验之后需要完成滤器的清洗，清洗起来非常的麻烦。控制菌检查的过程中因为存在增菌的培养，在细菌计数的时候村在抑菌品种，开展控制菌检查的过程中都可以有效的完成试验菌的检出。综上所述，被检样品一定要科学有效的完成微生物限度检查方法学验证，这样才能够促使检验结果具有高度的有效性以及准确性。

［1］ 左秀萍，贾立华.医院制剂影响微生物限度检查结果诸因素分析［J］.中国药事，2012，04（08）：102－103

［2］ 孙岚，何芳.5种医院制剂微生物限度检查法方法验证［J］.中国医院药学杂志，2011，08（11）：552－556

［3］ 韦曦，邱双成，王翠荣.29种医院制剂微生物限度检查方法验证［J］.中国药房，2012，08（01）：325－326

［4］ 雷柳冰，廖瑜.炉甘石薄荷脑洗剂微生物限度检查方法的建立与验证［J］.中国社区医师（综合版），2013，07（15）：1112－1113

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1009－6019（2015）07－0061－01