甘麦宁心胶囊中梓醇含量测定的不确定度分析

刘激扬，王晓飞，于 玲，姚红伟，胡 好，柴江平

甘麦宁心胶囊中梓醇含量测定的不确定度分析

刘激扬1，王晓飞1，于 玲1，姚红伟1，胡 好1，柴江平2

目的 对高效液相色谱法测定梓醇含量的测量不确定度进行分析，以找到影响不确定度的因素，为质量标准的制定提供科学依据。方法 采用高效液相色谱法测定甘麦宁心胶囊中梓醇含量，评估不确定度。结果 标准不确定度为2.70%，含量为(1.17±0.063)mg/g。结论 本试验建立的不确定度评估方法适用于HPLC法测定梓醇含量的不确定度评定。

测量不确定度；梓醇；高效液相色谱

甘麦宁心胶囊是由地黄、麦冬、桂枝、人参等多味中药制成的胶囊，具有补脾和胃，益气复脉之功效，临床用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心动悸脉结代。本研究依据《化学分析测量不确定度评定》、《声明检测或校准结果及与规范符合性的指南》[1，2]中有关规定，对HPLC法测定梓醇含量的测量不确定度进行了分析，以期找出影响不确定度的因素并进行评估，为评价质量标准及检验报告提供有力依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 1200型高效液相色谱仪(Agilent)，XP205型电子天平(DHAUS AP250D)，超声清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，梓醇对照品(中过食品药品检定研究院，110808-201210)，乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，甘麦宁心胶囊(批号20140426，20140428，20140430，自制)。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱: SHISEIDO C18(MG 4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)；检测波长：320 nm；流速:1.0 ml/min；柱温：30 ℃。进样量10 μl。

1.2.2 对照品溶液制备 精密称定梓醇对照品约5 mg，置于50 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2～10 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，即得。

1.2.3 供试品溶液制备 精密称取甘麦宁心胶囊内容物2.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续虑液2 ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至10 ml量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，即得。

1.2.4 色谱行为 在本实验建立的色谱条件下，甘麦宁心胶囊中梓醇能与制剂中其他成分很好分离，理论塔板数为13 663。HPLC色谱图见图1。

1.2.5 线性关系考察 线性关系的考察 取梓醇对照品溶液，分别进样1、5、10、15、20、25、30 μl。将峰面积(Y)对质量浓度(X)进行线性回归，得到回归方程为Y=5.0924X-0.3141(r=1)。表明梓醇在(0.02～0.60) μg范围内线性关系良好。

图1 甘麦宁心胶囊HPLC色谱图

1.2.6 精密度考察 取梓醇对照品溶液，每次进样10 μl，重复进样7次，测定梓醇峰面积，平均峰面积为50.3，结果梓醇的RSD为0.703%(表1)。

表1 甘麦宁心胶囊中梓醇含量测定精密度试验结果

1.2.7 重复性考察 取同一批号供试品(批号：20140428)，按“1.2.3供试品溶液的制备”项下方法平行制备6份样品，进样，按测得的梓醇含量计算：RSD为1.01%。结果表明重复性良好(表2)。

表2 甘麦宁心胶囊中梓醇含量测定重复性试验结果 (n=6)

1.2.8 稳定性考察 取同一批供试品溶液(批号：20140428)，每隔2 h进样一次，进行稳定性试验考察，结果表明供试品溶液在16 h内稳定，按测得的梓醇峰面积计算：RSD为1.48%(表3)。

表3 甘麦宁心胶囊中梓醇含量测定稳定性试验结果

1.2.9 加样回收率实验 取已知含量的供试品6份(批号：20140428；含量：1.16 mg/g)，精密称定，分别精密加入已知含量的的梓醇对照品溶液(1.868 mg/ml)1 ml，按“3.3供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，再精密量取该供试品溶液5 ml置10 ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，按“3.1色谱条件”测定梓醇的含量，计算回收率，结果见表4。

2 结 果

2.1 含量测定 取3批甘麦宁心胶囊内容物，按“1.2.3”项下方法处理，HPLC测定，梓醇含量计算结果见表5。

表4 甘麦宁心胶囊中梓醇含量测定加样回收试验结果

表5 甘麦宁心胶囊中梓醇含量测定试验结果

2.2 不确定度数据分析与计算

2.2.1 数学模型

式中：X为供试品梓醇含量，mg/g；Ax为供试品梓醇HPLC色谱峰面积；m0为对照品的取样量，g；V0为对照品稀释体积，ml；A0为梓醇对照品的HPLC色谱峰面积；mx为供试品取样量，g；Vx为供试品稀释体积，ml

2.2.2 不确定度来源分析 根据2.2.1数学模型分析不确定度来源，(1) 称量时产生的质量不确定度u(m0)、u(mx)；(2) 定容时产生的容量不确定度u(V0)和u(Vx)；(3) HPLC法测定峰面积带进的不确定度u(A0)、u(Xx)三方面，6个分量。

2.2.3 称量时产生的不确定度 称量产生的不确定度主要来源是电子天平校准不确定度和重复称量产生的不确定度。

由2.2.3.1、2.2.3.2两项合成为称量不确定度u合

2.2.4 定容时产生的容量不确定度

2.2.4.3 容量瓶重复性不确定度 用水定容，称重，重复10次，得标准偏差直接用于标准不确定度。UR(50)(V)=0.014 ml；UR(10)(V)=0.017 ml。

2.2.5 HPLC法测定峰面积带入不确定度

2.2.5.1 系统效应带入的不确定度[6]由中国计量院出具的仪器检定结果，得定量测量的误差为0.04%作为相对标准不确定度，即urel1(A)=0.0004。

2.2.5.2 随机效应导致的分量 3份供试品行HPLC检测，平行两次，相应的峰面积见表6。

标准不确定度u2(A)=S(A)=1.76。相对标准不确定度urel2(A)=u2(A)/A=0.0241。

2.2.6 合成标准不确定度uc(X) 将各项相对标准不确定度用方和根法合成，得到梓醇含量的合成相对标准不确定度

uc(X)/X=

=0.0270

得：uc(X)/X = 2.70%。由此得合成不确定度uc(X)= 1.17×2.70%=0.0316 mg/g。

2.2.7 扩展不确定度U 取包含因子k(95)=2(近似95%置信概率) ，则U=k·uc(X)，则U=2×0.0316=0.063 mg/g，因此，供试品梓醇含量为(1.17±0.063)mg/g。

3 讨 论

根据测量不确定度结果，可以看出在影响此法检测结果的各个分量中，液相色谱仪带入的不确定度较为显著，主要原因是峰面积较小导致误差相对较大，因此，在考虑到操作合理性前提下，可以适当增加对照品与样品进样量，从而减少误差。其次称量带入的不确定度也较为显著，主要由于对照品称量带入，分析原因：由于对照品称样量较少，造成误差增大；解决方案：在经济允许的情况下，标准制定时，适当增加对照品称样量，从而减少误差。

质量标准的拟定和对药品进行合格判定时应当考虑到不确定度，只有把不确定度加入判定结果，才能够保证含量测定结果的准确性、重复性。本研究建立了HPLC法测定梓醇含量不确定度分析方法，为同类含量测定方法的建立提供参考。

[1] 国家质量监督检验检疫总局. JJF1135-2005 化学分析测量不确定度评定[S]. 北京: 中国计量出版社， 2005.1-8.

[2] 中国合格评定国家认可委员会. 声明检测或校准结果及与规范符合性的指南[M]. 北京:中国合格评定国家认可委员会，2009：4-7.

[3] 孙 莉. HPLC 法测定炔诺酮片含量及含量均匀度的不确定度分析[J]. 中国药房， 2009， 20(4):294-296.

[4] 车晓彦,伍丕娥,周 娟,等. 麦冬药材TLC及HPLC 特征图谱研究[J]. 药物分析杂志, 2012,32(12):2263.

[5] 杨仕林,李小刚,谢 云.RP-HPLC法测定天王补心丸中梓醇的含量[J].中国药方，2012,23(24):2289-2290.

[6] 李慎安. JJF1059-1999 《测量不确定度评定与表示》讨论之六 测量仪器不确定度[J]. 中国卫生检验杂志, 2006，16(4): 39-40.

(2015-04-24收稿 2015-08-08修回)

(责任编辑 张 楠)

Measurement of uncertainty of catalpinoside in Ganmainingxin Capsule

LIU Jiyang1, WANG Xiaofei1, YU Ling1, YAO Hongwei1, HU Hao1, and CHAI Jiangping2.

1. Institute for Drug Control of People’s Armed Police Force，Beijing 102613，China; 2. Guang Anmen Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100053，China

Objective To find out the effect factors of uncertainty by analyzing the uncertainty of measurement in determination of catalpinoside by HPLC and provide the evidence to evaluate the measurement. Methods The Catalpinoside in Ganmainingxin Capsules was determined by HPLC. The causes and effects were simplified and uncertainty was appraised. Results The uncertainty result was 2.70% and the result of content was(1.17±0.063)mg/g. Conclusions The mathematic model established is suitable for uncertainty analysis of catalpinoside by HPLC.

uncertainty of measurement; catalpinoside; HPLC

刘激扬，硕士，E-mail:wangxiaofei1317@163.com

1.102613 北京，武警药品仪器检验所;2.100053 北京，中国中医科学院广安门医院

王晓飞，E-mail:wangxiaofei1317@163.com

R927.2