肺炎支原体肺炎患儿血清及支气管肺泡灌洗液中SP-A、SP-D和KL-6含量变化及意义*

石家庄市妇幼保健院儿科(石家庄 050056)

柴玲彦 赵 红 刘连凤 刘彦霞 杨秀丽

·临床研究·

肺炎支原体肺炎患儿血清及支气管肺泡灌洗液中SP-A、SP-D和KL-6含量变化及意义*

石家庄市妇幼保健院儿科(石家庄 050056)

柴玲彦 赵 红 刘连凤 刘彦霞 杨秀丽

目的：探讨肺表面活性蛋白A、D(SP-A、SP-D)和KL-6在肺炎支原体肺炎(MPP)血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中变化及意义。方法：采用自身对照方法，根据肺CT影像结果对32例单侧肺实变MPP患儿血清、患侧和健侧BALF中SP-A、SP-D与KL-6进行检测和统计分析。结果：32例MPP患儿患侧BALF中SP-A、SP-D和KL-6含量分别为243(90～468)、187(43～333)和148(47～426)；健侧分别为104(37～257)、56(25～131)和35(12～147)；血清中分别为35(25～69)、33(9～149)和24(15～62)。血清中KL-6与患侧和健侧BALF中KL-6的相关系数分别是-0.534和-0.378。结论：CAP患儿血清中SP-A、SP-D和KL-6水平变化与肺组织感染具相关性，血清中KL-6可能比SP-A、SP-D更为敏感。

目前小儿社区获得性肺炎(Community-acquired pneumonia, CAP)炎症方面的化验检查只能反映宿主全身炎症状况，不能直接反映肺组织的炎症状况和细胞损伤程度，不能对损伤肺组织转归及预后提供客观评估指标[1-2]。2012年10月至2014年10月对我院儿科确诊为肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumonia pneumonia, MPP)患儿血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺表面活性蛋白A、D(SP-A，SP-D)和KL-6的变化进行了研究，旨在寻找能够反映肺组织被感染后损伤程度的生化指标，以评估肺组织感染损伤严重程度。

资料与方法

1 一般资料 本组MPP患儿32例，男18例，女14例，年龄8个月至14岁，平均年龄(4.5±1.1)岁。诊断符合实用儿科学第七版肺炎诊断标准。病程10～14 d。肺CT影像均显示病变侧肺实变面积大于同侧同层横断面积1/3，而对侧无实变及渗出MPP的患儿(右肺17例，左肺15例；其中13例伴有胸腔积液)。均排除细菌感染、病毒感染、肺结核、真菌感染、儿童哮喘及其他肺疾病。本研究通过我院医学伦理委员会批准。所有研究对象均签署知情同意书。

2 研究方法 采用自身对照方法，将血清、病变侧BALF和健侧BALF三组中KL-6、SP-A、SP-D进行比对研究。

2.1 肺炎支原体(MP)抗体测定：入院第1天进行MP-IgM、MP-Ab检测。采用明胶颗粒载体间接凝集试验，动态血清检测MP特异性抗体(日本富士SERODIA-MYCOⅡ试剂盒)。首份血清MP-Ab滴度>1∶160时，2周后取第2份血清检测MP-Ab；首份MP血清MP-Ab滴度<1∶160时，每5～7d或距首次采血4周后采血检测MP-Ab滴度。32例患儿双份血清MP-Ab滴度升高≥原滴度4倍或≤原滴度的1/4，且MP-IgM阳性。

2.2 血清标本采集和标本制备：32例肺CT显示具有单侧肺实变改变的MPP患儿，入院后1～7 d内按照《儿科支气管镜术指南(2009年版)》[3]全麻下行支气管肺泡灌洗术，灌洗术经患儿家长知情同意和我院医学伦理委员会批准。术前采血2 ml，4℃条件下以3000 r/min离心10 min[5]，取上清于-80℃储存待检。

2.3 BALF标本采集和标本制备：患儿在全麻下行支气管肺泡灌洗术，灌洗时将37℃生理盐水1ml/(kg·次)分别注入同一患儿健侧肺段和患侧肺段，用100 mmHg的负压立即将灌洗液抽回，共灌洗3～4次，回收率≥40%，取患儿双侧肺BALF[4-5]，标本制备同血清。术中除1例见支气管狭窄外，其余未见痰栓、息肉等阻塞支气管。

2.4 血清及BALF中SP-A、SP-D和KL-6的检测：血清及BALF中SP-A、SP-D和KL-6的检测使用美国Santa Cruz 生物公司SP-A、SP-D试剂盒。操作步骤简要如下：将标准品稀释后加样，标准品孔加入标准品50μl，待测品孔加入40μl样品，再加入抗体各10μl。加入链霉亲和素50μl，振荡混匀，37℃水浴1h。每孔加满稀释20倍的洗涤液，加显色剂显色，用酶标仪以450 nm波长依序测量各孔的吸光度值(A)。蛋白定量：取141支一次性试管，分别向管内加入2.5 ml碱性铜液，20μl样品，混匀，室温放置20min，分别向管内加入250μl酚试剂，充分混匀，室温放置30 min，以未加样品的第一号管作为空白对照，在650 nm处进行比色测定，记录A值。

2.5 统计学方法:采用SPSS 18.0统计学软件。数据为非正态分布，采用中位数和四分位数间距[M(IQR)]对数据进行统计描述；组间比较采用Friedman秩和检验，两两比较采用配对Wilcoxon符号秩检验，采用Bonferroni法调整检验水准；相关性分析采用Spearman秩相关系数。P<0.05差异有统计学意义。

结 果

1 32例MPP患儿病变侧BALF、健侧BALF和血清中SP-A、SP-D和KL-6含量的变化 本组患儿患侧BALF中KL-6和SP-A、SP-D水平明显高于健侧BALF和血清中KL-6和SP-A、SP-D水平，差异有统计学意义(P<0.01)。血清中SP-A水平与健侧BALF中SP-A相比，差异有统计学意义(P<0.01)，而血清中SP-D、KL-6与健侧BALF中SP-D、KL-6相比，差异均无统计学意义(P均>0.05) ，见表1。

表1 32例单侧病变患儿BALF与血清中KL-6和A、D含量的比较[mg/L，M(IQR)]

注：与患侧BALF组比较，*P<0.01；与健侧BALF组比较，△P<0.01

2 32例MPP患儿病变侧BALF、健侧BALF和血清中KL-6和SP-A、SP-D含量的相关性 Spearman秩相关分析显示，血清中KL-6含量与患侧和健侧BALF中KL-6含量分别呈中度负相关和低度均负相关(P均<0.05)。而血清中SP-A、SP-D含量与患侧和健侧BALF中SP-A、SP-D含量均无相关性(P均>0.05)，见表2。

表2 单侧病变患儿血清与BALF中KL-6和SP-A、SP-D含量的相关系数

注：与血清中比较，*P<0.05

讨 论

肺炎支原体肺炎(MPP)是小儿CAP中常见的一种，探索反映被肺组织感染后的血清生化指标对于研究肺组织感染变化规律，指导临床治疗和评估预后具有重要意义。本研究结果显示，32例MPP患儿患侧BALF中SP-A、SP-D和KL-6含量明显高于健侧，提示SP-A、SP-D和KL-6含量增高与患侧被感染肺组织密切相关，此与32例患儿肺部CT显示结果相一致。且患侧BALF中SP-A、SP-D和KL-6含量均高于血清中SP-A、SP-D和KL-6含量，提示：①肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC-Ⅱ)合成释放和分泌的SP-A、SP-D和KL-6含量的高低与肺组织是否被感染密切相关，肺CT扫描显示为肺实变的患侧BALF中SP-A、SP-D和KL-6明显高于未发生实变的健侧。②感染肺组织BALF中SP-A、SP-D和KL-6的变化比血清中SP-A、SP-D和KL-6的变化更为敏感、迅速和直接。这可能与下列机制有关：宿主肺组织被MP感染初期，AEC-Ⅱ损伤早期，SP-A、SP-D和KL-6合成增加，代偿性分泌增高，释放SP-A、SP-D和KL-6进入肺泡腔，使感染严重的患侧BALF中SP-A、SP-D和KL-6的含量明显高于健侧和血清中含量[6]。肺泡上皮细胞和血管内皮细胞因炎症反应受到损伤，导致肺泡毛细血管通透性增加，SP-A、SP-D和KL-6通过肺泡毛细血管管壁入血[7]，从而导致血清中SP-A、SP-D和KL-6水平升高。血清中SP-A、SP-D和KL-6水平直接反映了AEC-Ⅱ、且间接反映了AEC-I以及内皮细胞等的损伤[8-9]。③本研究中血清中SP-A含量与患侧和健侧BALF中SP-A的含量间差异均有统计学意义，而SP-D、KL-6只与患侧差异有统计学意义，说明在感染的某一阶段，血清中SP-D、KL-6能够体现出患侧与健侧的差异，即肺组织被感染与未被感染的差异。这可能与SP-A在AEC-Ⅱ的含量较高有关，SP-A大量储存与AEC-II的板层小体之内，且与感染的阶段有关[10]。④从表1中还可以推测：肺组织被感染阶段和程度不同，患侧或健侧BALF和血清中SP-A、SP-D和KL-6含量不同。在感染的某一时刻，血清中SP-A含量可能与健侧BALF中SP-A差异无统计学意义，但疾病进展后产生显著差异；有可能病情再发展，血清中SP-D和(或)KL-6的含量也会与健侧BALF中的含量发生显著变化。也可以推测，血清中SP-A、SP-D和KL-6的含量在肺组织被感染的某一时刻或不同阶段与健侧肺组织BALF中含量或差异无统计学意义，即可以代表肺组织正常水平(范围)；如果高于此水平(范围)则可能预示肺组织被感染，且含量不同感染的程度也不同。近10年来肺部感染损伤标志物的研究[8,11]越来越受到重视。Ishikawa等[12]2011年研究报道SP-A、SP-D和KL-6在COPD患者诱导痰中的水平升高，与本研究结果相似。

为了更好地寻找反映被感染肺组织的临床生化指标，对32例MPP患儿血清中SP-A、SP-D和KL-6含量与被感染肺组织BALF中SP-A、SP-D和KL-6含量的相关性进行了研究，结果表明血清中KL-6含量与患侧和健侧BALF中KL-6含量密切相关。提示在肺组织感染时，血清中KL-6可能成为比血清中SP-A、SP-D更为敏感的反映肺组织细胞损伤程度的生化指标，且与通过有创性检测BALF中KL-6水平评估肺组织损伤程度相比更容易实施和接受。Sato等[13]通过对ARDS患者的研究表明，血清KL-6是衡量肺损伤病理严重程度的指标，且对ARDS的预后估计与评价有一定的重要意义。这与Nathani等[14]和Kondo等[15]研究的结果相同：血清KL-6不仅是反映肺泡炎症的一个指标，同时也是评估ARDS预后的良好指标。血清中SP-A、SP-D和KL-6在肺组织感染性疾病中的变化，可能与病原微生物的种类、肺组织被感染损伤的程度和阶段有关，需要对不同种类的感染和感染的不同阶段进行动态研究。本研究因无健康儿童血清和BALF中SP-A、SP-D和KL-6作正常对照组，且受样本数量限制，研究结果存在一定的局限性，需要不同地域、有代表性的多中心、大样本，甚至不同年龄段的儿童进行系统地研究。

综上所述，MPP患儿血清和BALF中SP-A、SP-D和KL-6含量与肺组织被感染与否密切相关。在肺组织感染损伤的某一阶段，血清中KL-6水平比血清中SP-A、SP-D更能反映肺组织被感染损伤的状况。

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(收稿：2015-03-11)

Alterations of SP-A, SP-D and KL-6 in serum and bronchoalveolar lavage fluid in children with Mycoplasma pneumoniae pneumonia

Pediatrics Department of Maternal and Child Health Hospital in Shi Jiazhuang City (Shijiazhuang 050056)

Chai Lingyan Zhao Hong Liu Lianfeng et al

Objective: To study the alterations and relationship of surfactant protein(SP)-A, SP-D and KL-6 in serum and bronchoalveolar lavage fluids (BALF) in children with Mycoplasma pneumonia pneumonia (MPP). Methods: Self-control method was used for the study on SP-A, SP-D and KL-6 in serum, infected and non-infected BALFs in 32 MMP children with only one side of MPP. Results: The contents of SP-A, SP-D and KL-6 in infected BALF were 243(90-468), 187(43-333), 148(47-426); 104(37-257), 56(25-131), 35(12-147) in non-infected BALF; 35(25-69), 33(9-149) and 24(15-62) in serum. The correlation coefficient of KL-6 between serum and infected BALF were -0.534 and -0.378. Conclusion: There are significant correlation between the alterations of SP-A, SP-D and KL-6 in serum and lung infection in children with CAP. KL-6 in serum may be more sensitive than SP-A and SP-D.

Pneumonia mycoplasma/physiopathology Pulmonary surfactant protein Bronchoalveolar lavage fluid Child

*石家庄市科学技术研究与发展指导计划课题(131461053)

肺炎，支原体/病理生理学 @肺表面活性蛋白 支气管肺泡灌洗液 儿童

R725.6

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.07.012