正交试验优选养心开郁片醇沉工艺*

陈伟铭 窦建卫 王静怡 王 凌 路 波 陕西省中医药研究院(西安 710003)

正交试验优选养心开郁片醇沉工艺*

陈伟铭 窦建卫△王静怡▲王 凌 路 波 陕西省中医药研究院(西安 710003)

目的:优选养心开郁片醇沉工艺条件。方法：以出膏率和黄芪甲苷含量为指标，采用L9(34)正交试验法，优选养心开郁片醇沉工艺条件。结果：最佳醇沉最佳工艺条件为：药液浓缩至相对密度1.10～1.20(60℃)，加入乙醇使含醇量达60%，静置时间24h。结论：经正交试验优选养心开郁片的醇沉工艺是科学可行的。

养心开郁片是王静怡主任医师的经验方，用于治疗轻-中度抑郁症。具有敛阴清火、益气养心之功，用于失眠多梦、心悸气短、心神郁闷、淡漠无欲等症。本文采用L9(34)正交设计试验对该制剂的水提醇沉工艺进行优选，确保养心开郁片的质量和疗效。

1 试药与仪器 1.1 试 药 黄芪甲苷对照品(供含量测定用，批号：110781-200311)购于中国药品生物制品研究院；甲醇是色谱纯(TEDIA公司)；水是超纯水；其他试剂均为分析纯。

1.2 仪 器 高效液相色谱仪(ELSD-3000型蒸发光散射检测器；N2010色谱工作站；Lab Alliance型恒流泵)。

2 方法与结果 2.1 醇沉工艺正交试验设计 醇沉工艺与醇沉前药液的相对密度、醇沉时的含醇量、静置时间等因素关系密切。为选择最佳醇沉工艺条件，选用L9(34)正交设计表，以出膏率和黄芪甲苷含量作为考察指标，进行试验，其因素水平表见表1。

表1 醇沉因素水平表

2.2 试验步骤 按处方比例称取红参、黄芪、五味子等四味药共132g，加水浸泡2h，水煎煮提取2次，滤过，合并滤液，浓缩药液，加入乙醇使含醇量达一定浓度，静置，取上清液分别测定出膏率及黄芪甲苷含量。

2.3 出膏率测定 精密量取浓缩液20mL，回收乙醇至无醇味，放于恒重的蒸发皿中水浴烘干，105℃烘箱中烘干至恒重，取出并置于干燥器中放冷，称重，计算出膏率。

2.4 黄芪甲苷含量测定 2.4.1色谱条件：色谱柱：Diamosil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；蒸发光散射检测器：漂移管温度75℃，氮气流速2.5L·min-1。流动相：乙腈-水(32:68)；按黄芪甲苷峰计算理论板数应不低于4000。

2.4.2测定方法[1-4]：取黄芪甲苷对照品，加入甲醇，配置成对照品溶液(0.5mg /1mL),称取适量出膏率项下浸膏粉，加水溶解后，用水饱和的正丁醇提取5次，分别提取35，35，20，20，15mL，合并后再用氨试液洗涤4次，分别提取25，20，20，20mL，弃去氨液，蒸干正丁醇液，加热水10～20mL使残渣溶解，充分冷却后通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm ，长12cm)，以水50mL洗脱，弃去水液。用40%乙醇30mL洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，再用70%乙醇70mL洗脱，收集洗脱液后蒸干，用甲醇溶解，转移至 5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，作为供试品溶液；精密吸取供试品溶液20μL，对照品溶液10μL，20μL，注入液相色谱仪测定，用外标两点法对数方程计算。

2.5 醇沉工艺正交试验结果 选择黄芪甲苷的提取量与出膏率的综合评分作为此次试验的评价指标。黄芪甲苷的含量权重系数定为0.6，出膏量权重系数定为0.4。醇沉工艺进行了9次试验，试验数据、方差分析结果见表2、3。

表2 醇沉L9(34) 正交试验表

表3 醇沉工艺方差分析表

注：F0.05(2，2)=19.0，F0.01(2，2)=99.0。

方差分析结果表明：含醇量对评价指标有显著性的影响，由正交试验结果可以看出，最佳工艺为A2B2C2，即药液浓缩至相对密度1.10～1.20(60℃测)，加入乙醇使含醇量达60%，搅匀后静置24h。

2.6 验证试验 按处方量称取各药材共1320g，共三份，按照所选提取条件以及醇沉条件试验，进行纯化，结果黄芪甲苷含量为0.37mg/g(RSD=1.35%)，出膏率为24.65%(RSD=1.78%)。验证试验结果表明，优化得到的醇沉工艺稳定可行。因此确定养心开郁片的醇沉工艺为：药液浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)测，加醇使含醇量达60%，静置24h。

3 讨 论 对养心开郁片的水提液进行了醇沉精制，以黄芪甲苷含量及出膏率作为考察指标。正交试验结果经直观和方差分析表明，含醇量是影响醇沉工艺的主要因素，最终确定养心开郁片的醇沉工艺为：药液浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)测，加醇使含醇量达60%，静置24h。验证试验表明，该工艺稳定可行，为该制剂的进一步研究开发利用奠定了扎实的实验基础。醇沉精制后，除去了药材中较多的杂质，减少了给药剂量，提高了药物的稳定性。

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[2] 肖卫红，程 璐，张 耕，等.咽舒饮泡腾片中药材的水提醇沉工艺研究[J].医药导报，2009,28(4):499-501.

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(收稿2014-08-08；修回2014-09-13)

*陕西省科技统筹创新工程计划项目(2011KTCQ03-01)

工艺学, 制药 正交试验 @养心开郁片

R284

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.01.052

△西安交通大学医学院 (西安 710061)

▲通讯作者