氨苄西林在鸡组织中的残留消除规律

孙礼瑞，谢 星，谢恺舟*，张小杰，王剑锋，崔璐璐，刘建宇，张跟喜，戴国俊，王金玉

(1.扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009；2.江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，扬州 225009；3.南京农业大学动物医学院，南京 210095)

氨苄西林在鸡组织中的残留消除规律

孙礼瑞1,2，谢 星3，谢恺舟1,2*，张小杰1,2，王剑锋1,2，崔璐璐1,2，刘建宇1,2，张跟喜1,2，戴国俊1,2，王金玉1,2

(1.扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009；2.江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，扬州 225009；3.南京农业大学动物医学院，南京 210095)

旨在研究氨苄西林在鸡组织中残留消除规律。鸡组织样品经磷酸二氢钠溶液提取，乙腈去蛋白质，正己烷去脂肪，饱和二氯甲烷萃取，上清液经甲醛在酸性条件下沸水浴衍生化后，在激发波长327 nm、发射波长409 nm处用高效液相色谱荧光检测器检测。结果显示：该方法测定鸡组织中氨苄西林的检测限为3.5 μg·kg-1(S/N=3)、定量限为10.0 μg·kg-1(S/N=10)。氨苄西林在鸡组织样品中平均回收率在75.31%～85.87%，变异系数均低于10.20%。各试验组京海黄鸡分别按体重以120、240 mg·(kg·d)-1剂量内服氨苄西林，每天1次，连续7 d给药后，休药4 h(零休药期)，各组织中氨苄西林的残留量最高，并在休药后第3天迅速降低。休药第5天后所有组织中氨苄西林残留量均低于最高残留限量(50 μg·kg-1)，休药第9天各组织中氨苄西林残留量均低于检测限。休药后相同时间点鸡肌肉中药物残留量最低，肝中的药物残留量最高；氨苄西林在肾中残留比肌肉、肝消除缓慢且消除时间长。氨苄西林在鸡肌肉、肝和肾中的残留量均与给药剂量呈正相关。根据WT1.4软件按95%置信区间计算所得，建议黄羽肉鸡按体重以120、240 mg·(kg·d)-1剂量给药，每天1次，连续7 d后，其休药期(WT)分别为4和5 d。

氨苄西林；高效液相色谱荧光检测法；残留消除；鸡组织

氨苄西林(ampicillin，AMP)又称氨苄青霉素，为半合成青霉素，对大多数革兰阴性菌(如大肠杆菌、变形杆菌、沙门菌、嗜血杆菌、布鲁菌和巴氏杆菌等)均有较强的作用，与氯霉素、四环素相似或略强，但毒性作用小于氯霉素、四环素，被广泛用于养殖业。这种广泛应用导致AMP在可食性组织及环境中的污染，导致人群过敏及细菌耐药性等问题[1-2]。因此中国[3]和欧盟[4]均对家禽组织中的AMP最高残留限量(MRLs)作出规定，规定鸡组织中的MRLs不超过50 μg·kg-1。此外，欧盟和日本等国家将AMP列入进口动物源性食品的必检项目[4-6]，所以研究动物组织中AMP的残留检测方法及其残留消除规律具有重要的意义。

目前，国内外关于鸡组织中AMP的残留检测方法及药物代谢研究虽有报道[2,7-9]，也已制定了相关标准(GB/T 20755-2006)，但鸡组织中AMP的残留消除规律的研究尚未见报道。本试验在国内饲养条件下，连续7 d，每天1次，按体重以120、240 mg·(kg·d)-1剂量分别给京海黄鸡内服AMP，测定停药后不同时间鸡组织中AMP残留量的变化，研究AMP在鸡组织中的残留消除规律，为AMP的临床合理用药以及休药期的制定提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物及分组

选取16周龄健康京海黄鸡126羽，公、母各半，随机分为3 组，分别为氨苄西林正常剂量组(54羽)、氨苄西林双倍剂量组(54羽)、空白对照组(18羽)。试验鸡均单笼饲养，给药前分别称重、编号。试验前预饲1周，饲喂不含任何抗菌药物的全价饲料(于江苏京海禽业集团有限公司饲料厂自制)，自由饮水。

1.2 标准品、主要试剂及其配制

氨苄西林标准品：纯度99%，德国Labor Dr.Ehrenstorfer Schaefers，批号C10243080；氨苄西林原粉：纯度97.62%(实测含量)，江苏倍康药业有限公司；乙腈：色谱纯，美国Sigma公司；磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、二氯甲烷、三氯乙酸和甲醛：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；超纯水：ELGA公司超纯水仪制备，电阻率为18.2 MΩ，符合国家试验室用水规格(GB 6682-1992)。

氨苄西林标准储备液：精密称取AMP标准品10.10 mg，置于10 mL棕色容量瓶中，用超纯水溶解并定容至刻度，配制成 1.00 mg·mL-1的AMP标准贮备液，-34 ℃保存，可稳定保存2个月。

0.01 mg·L-1的KH2PO4溶液：称取KH2PO41.36 g，用适量的超纯水溶解，稀释至1 000 mL，并用0.1 mg·L-1KOH溶液调pH至5.5。

氨苄西林标准工作液：将标准品储备液用超纯水稀释至需要的相应质量浓度，4 ℃保存，每次配制后使用3 d。

20%三氯乙酸溶液：准确称取三氯乙酸20 g于100 mL容量瓶中，然后用超纯水定容。

提取液：即NaH2PO4溶液(0.01 mg·L-1)，称取1.20 g(精确到0.01 g)NaH2PO4，用适量的超纯水溶解，定容到1 000 mL，用0.1 mg·L-1的NaOH溶液调pH至 4.5，4 ℃保存。

1.3 主要仪器

高效液相色谱仪(Waters515，配备两台515型高压泵、2475型荧光检测器、柱温箱和色谱工作站等，美国Waters公司)；荧光分光光度计(日立F-4500，日本日立公司)；紫外分光光度计(UV-2401，日本岛津公司)；高速冷冻离心机(5810R型，德国Eppendof公司)；高速离心机(5804R型，德国Eppendof公司)；电子分析天平(Ax 205型，AE260S型，瑞士 Mettler Toledo公司)；数显恒温水浴锅(HH-8型，江苏金坛市中大仪器厂)；超声波清洗器(KQ-300DE型，昆山市超声仪器有限公司)；漩涡混合器(G560E型，美国Scientific Industries有限公司)；超纯水制备仪(Purelab Option，英国ELGA公司)；恒温磁力搅拌器(521-2型，上海司乐仪器有限公司)；无油真空泵(AP-01型，天津奥特塞恩斯仪器有限公司)；溶剂过滤器(1 L，天津津腾实验设备有限公司)；pH计(DELTA 320型，瑞士 Mettler Toledo公司)；组织匀浆机(ART MICCRA D-9型，德国ART-moderne Labortechnik e.k.公司)等。

1.4 给药剂量、途径及样品采集

各试验组鸡给药剂量分别按体重以120 、240 mg·(kg·d)-1给药。投药时将AMP原粉用无菌超纯水配成净含量为50 mg·mL-1的水溶液。每天上午8:00～9:00将药液通过胃管直接注入到鸡的嗉囊中，每天1次，连续7 d，于停药后4 h(即零休药期)、1 d、3 d、5 d、7 d、9 d、11 d、13 d、15 d 共9个时间点分别屠宰各试验组鸡6 羽，分别取两侧胸肌肉、全肝和全肾，于-34 ℃冰箱中保存待测。

1.5 试验方法

1.5.1 样品的提取与净化 准确称取3.0 g剪碎后的鸡肌肉(或肝或肾)组织，置于50 mL的具塞离心管中，添加0.01 mg·L-1的NaH2PO4溶液(pH 4.5)3 mL，17 000 r·min-1匀浆30 s。添加8 mL乙腈冲洗匀浆刀头并转入匀浆液中，振荡混匀，水浴超声辅助萃取15 min。4 ℃下10 700×g离心15 min，转移上清至另一干净离心管。残渣再加入2 mL磷酸二氢钠溶液重复提取一次，匀浆后再添加8 mL乙腈振荡混匀，超声萃取10 min，合并上清液。添加5 mL用75%乙腈饱和的正己烷，振荡混匀后静置并去除上层溶液，重复去脂一次。添加15 mL超纯水饱和的二氯甲烷溶液，振荡，10 700×g离心5 min。转移上清液至10 mL玻璃管。

1.5.2 样品的衍生化 将玻璃管中收集的上清液超声脱气15 min，然后置于真空干燥器中浓缩至干。向玻璃离心管中加入超纯水1 mL，然后分别加入20%三氯乙酸溶液200 μL、甲醛20 μL，漩涡混匀20 s，100 ℃水浴加热30 min。反应后取出样品，水浴冷却，将样品转移到2 mL离心管中，并用磷酸二氢钾/乙腈(V∶V=60∶40)混合溶液洗涤玻璃管两次，合并到2 mL离心管中，并定容至2 mL。12 100×g离心15 min，取上清液供高效液相色谱分析。

1.5.3 色谱操作条件及参数 色谱柱：CNW®Athena C18WP柱，粒径5 μm，4.6 mm ×250 mm i.d.；保护柱：C18，5 μm；流动相-乙腈：KH2PO4溶液(0.01 mol·L-1，pH 5.5)=40∶60(V/V)；流速：1.0 mL·min-1；激发波长327 nm，发射波长409 nm；柱温：40 ℃；进样体积：200 μL。

1.5.4 标准曲线的制备 准确吸取标准储备液适量，依次用空白基质提取液稀释成质量浓度分别为25(0.5MRL)、50(1MRL)、100(2MRL)、150(3MRL)、250(5MRL)、500(10MRL)、1 000(20MRL) μg·kg-1的标准工作液。各浓度点准确量取1 mL，按衍生化反应步骤衍生，得到系列质量浓度的AMP衍生产物，在选定的色谱条件下，按质量浓度从低到高的顺序分别进样200 μL作HPLC分析，每个质量浓度重复4次，取平均值。以所得峰面积为纵坐标(A)，标准溶液的质量浓度为横坐标(C)，绘制标准曲线，以此曲线作为待测样品的定量曲线，并求出其回归方程和相关系数。

1.5.5 回收率及精密度的测定 采用标准添加法，取剪碎的空白组织(鸡肌肉、肝、肾)样品，置于50 mL聚丙烯离心管中，添加适宜质量浓度的AMP标准溶液，使组织样品中药物质量浓度分别为10、25、50和100 μg·kg-1，室温下静置30 min，作为空白添加试样，每个质量浓度水平设置6个平行，经1.5.1、1.5.2的方法处理后，供HPLC测定，外标法定量，计算出回收率。将回收率检测剩余的样品按4个高低质量浓度合并成4份，得到4组不同药物质量浓度的样品。在1 d内不同时间用同一条标准曲线及同一台高效液相色谱仪6次重复测定4组药物质量浓度的样品，求得日内(批内)精密度。在1周内不同天用不同的标准曲线及同一台高效液相色谱仪6次重复测定4组药物质量浓度的样品，求得日间(批间)精密度。

1.5.6 检测限和定量限的测定 分别用空白肌肉、肝、肾按1.5.1步骤制取空白基质提取液，再分别向其添加一定质量浓度的AMP标准溶液，按1.5.2步骤对样品进行衍生化，取上清液进行HPLC分析，以信噪比(S/N)为3和10分别作为药物在鸡组织中的检测限(LOD)和定量限(LOQ)，并计算LOQ质量浓度点的回收率及相对标准偏差(RSD)，验证其可靠性。

1.5.7 鸡组织中氨苄西林的测定 按外标法，将鸡组织(肌肉、肝、肾)中所测的AMP色谱峰面积带入标准曲线，可得到鸡组织中AMP的残留量。

2 结 果

2.1 色谱分离

在优化的色谱条件下，测得鸡肌肉、肝、肾中AMP的保留时间分别约为7.31、7.30、7.31 min，色谱峰峰形较佳，峰间隔时间较长，且均为基线分离峰。空白提取液在上述时间无干扰峰出现，以鸡肌肉色谱图为例，见图1。

2.2 标准曲线

以AMP的色谱峰面积(A)对进样前AMP的质量浓度(C，μg·kg-1)作图，得到其标准曲线。AMP在25～1 000 μg·kg-1质量浓度范围内，色谱峰面积与质量浓度呈线性关系，且线性关系良好。AMP线性回归方程、相关系数和线性范围见表1。

2.3 样品的回收率及精密度

AMP在鸡肌肉、肝及肾中的回收率及精密度测定结果见表2。

由表2可见，在添加水平分别为10、25、50、100 μg·kg-1时，鸡肌肉样品中AMP的平均回收率在76.53%～85.87%，相对标准偏差在5.48%～8.82%；鸡肝样品中AMP的平均回收率在75.31%～83.31%，相对标准偏差在6.29%～10.20%；鸡肾样品中AMP的平均回收率为78.76%～84.26%，相对标准偏差在5.46%～9.29%。通过对样品精密度进行测定显示，AMP在鸡肌肉、肝、肾中的日内相对标准偏差分别低于8.77%、9.21%和8.99%；日间相对标准偏差分别低于12.78%、11.64%和12.54%，结果表明该方法可靠，重复性高。

A.甲醛；B．AMP(75 μg·mL-1)标准品； C．空白鸡肌肉；D．添加AMP标准品的空白鸡肌肉； E．AMP给药后的鸡肌肉A.Formaldehyde；B.Standard sample of AMP (75 μg·mL-1)；C.Blank chicken muscle；D.Blank chicken muscle added with AMP；E.Chicken muscle after oral administration of AMP图1 鸡肌肉中AMP的高效液相色谱分析Fig.1 High performance liquid chromatograms of AMP in chicken muscle

表1 氨苄西林线性回归方程、相关系数和线性范围

Table 1 The linear regression equation，correlation coefficient and linear range of AMP

样品Sample回归方程Regressionequation相关系数Correlationcoefficient线性范围/(μg·kg-1)Linearrange肌肉MuscleA=0.7787C-0.67410.999825～1000肝LiverA=0.9763C-0.25860.999425～1000肾KidneyA=0.8246C-0.43210.999725～1000

表2 氨苄西林在鸡肌肉、肝及肾中的回收率(n=6)

Table 2 Recoveries and precision of AMP in chicken muscle，liver and kidney

样品Sample添加值/(μg·kg-1)Addedlevel回收率/%Recovery相对标准偏差/%RSD日内相对标准偏差/%Intra-dayRSD日间相对标准偏差/%Inter-dayRSD肌肉Muscle10255010076.53±6.7581.65±5.6183.36±5.6785.87±4.718.826.876.805.488.776.747.236.8612.7810.5610.109.25肝Liver10255010075.31±7.6878.64±6.8780.45±5.6683.31±5.2410.208.747.046.299.218.748.147.9310.3811.649.339.26肾Kidney10255010078.76±7.3283.41±4.7483.63±4.5784.26±6.929.295.685.466.468.998.627.376.2412.5410.3710.249.66

2.4 灵敏度

应用本试验建立的检测方法，测得鸡组织(肌肉、肝、肾)中AMP的检测限、定量限均分别为3.5 μg·kg-1(S/N=3)、10.0 μg·kg-1(S/N=10)。通过表2可见，添加质量浓度为10.0 μg·kg-1时，AMP在鸡组织中的回收率均大于70%，相对标准偏差均小于20%，表明该LOD的可靠性。该方法灵敏度高，完全能满足AMP在鸡组织中残留检测的需要。

2.5 鸡组织中氨苄西林残留量的测定

鸡组织中AMP的残留量测定结果见表3，残留消除曲线见图2。

由表3和图2可见，试验组鸡分别按体重以120、240 mg·(kg·d)-1的剂量给药，每天1次，连续7 d内服给药，休药后4 h(零休药期)，各组织中AMP的残留量最高；休药后第3天AMP残留量迅速降低；休药后第5天所有组织中AMP残留量均低于最高残留限量(50 μg·kg-1)，鸡肝AMP残留量低于定量限；休药后第7天，鸡肌肉、鸡肝中AMP的残留量均低于检测限(5 μg·kg-1)，肾中AMP的残留量低于定量限；休药后第9天，肾中AMP残留量也低于检测限(5 μg·kg-1)。相同时间点鸡肝中的药物残留量在3种组织中最高，鸡肌肉中残留量最低。AMP在鸡肾中残留比鸡肌肉、肝消除缓慢且消除时间长。AMP在鸡肌肉、肝和肾中的残留量均与给药剂量呈正相关。

2.6 氨苄西林休药期的计算

采用WT1.4软件按95%置信区间计算AMP在鸡肌肉、肝和肾中的休药期，计算结果显示AMP 120、240 mg·(kg·d)-1AMP剂量组在鸡肌肉中的理论休药期分别为2.81和3.36 d；在鸡肝分别为3.50和4.80 d；在鸡肾中分别为3.82和4.76 d。AMP在鸡肾中的休药期数据拟合图见图3。

3 讨 论

3.1 色谱条件的优化

本试验采用Waters公司2475型荧光检测器检测，然而氨苄西林的母体β-内酰胺没有发光基团，需要进行衍生化反应，使其产生荧光基团，才能被荧光检测器检测到。AMP的氨基(-NH2)结构，在酸性条件下加热可以与醛基生成荧光发光物，常用的反应试剂有甲醛和水杨醛[11-12]，本试验对比了两者的衍生效果，发现AMP在与两者衍生后均能被检测到，但AMP与甲醛的衍生产物在同等条件下比其与水杨醛衍生的产物荧光性更强，因此选择甲醛作为衍生试剂。荧光检测器合适的激发波长及发射波长会提高待检物的灵敏度，上机前对AMP衍生产物使用日立-F4500型荧光光度计进行扫描，确定最佳激发波长与发射波长分别为327、409 nm。本试验选择0.01 mol·L-1的KH2PO4溶液(pH5.5)与乙腈溶液为流动相，对比不同比例的洗脱效果，发现60∶40体积比等度洗脱效果最佳，各组织空白加标样(肌肉、肾、肝)中AMP色谱峰与干扰峰分离效果良好，峰间隔时间较长，峰型较佳，均为基线分离峰。

μg·kg-1

ND.未检测到；-.未检测

ND.Not detected；-.Not measured

A.120 mg·(kg·d)-1剂量组；B.240 mg·(kg·d)-1剂量组A.120 mg·(kg·d) -1 dose group；B.240 mg·(kg·d) -1 dose group图2 鸡组织中氨苄西林残留消除曲线Fig.2 Residues eliminate curve of AMP in chicken tissues

A.120 mg·(kg·d)-1剂量组；B.240 mg·(kg·d)-1剂量组A.120 mg·(kg·d) -1 dose group；B.240 mg·(kg·d) -1 dose group图3 氨苄西林在鸡肾中休药期拟合分析Fig.3 Plot of the withdrawal time calculation for AMP in chicken kidney at the time when the one-sided 95% upper tolerance limit is below the MRL for AMP (μg·kg-1) after administration of AMP

3.2 氨苄西林的稳定性分析

AMP是在6-氨基青霉烷酸(6-APA)基础上研制的，6-APA结构的存在导致其极不稳定，易被水解。目前，关于AMP的稳定性试验大部分研究温度的影响，很少涉及到pH对其稳定性的影响[13-14]。本试验配制20 mg·mL-1的AMP标准溶液，通过磷酸盐和氢氧化钠调整pH，建立9个梯度(pH=3～11)，在-32 ℃的冰箱中保存，每天在合适的色谱条件下进行HPLC检测，连续7 d。结果发现，AMP在强碱(pH=8～11)、强酸(pH=3～5)条件下，降解较快，在pH为5时最稳定，未发现明显的降解，进一步探索了pH在5.1～5.9范围内的作用效果，pH为5.5时，AMP最稳定。S.M.Mitchell等[15]探讨了AMP在pH4～9范围内，不同温度下的稳定性，发现在碱性环境下抗生素最容易降解，其次中性环境，在酸性环境(pH=5～6)中最稳定，与本试验研究结果相似。因此本试验的提取液、流动相的pH分别设置为4.5、5.5，以保证AMP在整个前处理及分析过程的稳定性。AMP在3～100 μg·kg-1的添加质量浓度范围内，肌肉、肝、肾组织中的平均回收率分别为76.53%～85.87%、75.31%～83.31%、78.76%～84.26%，相对标准偏差均低于10.20%，日内标准偏差在6.24%～9.21%，日间标准偏差在9.25%～12.78%，满足兽药残留分析要求[16]。

3.3 氨苄西林在鸡组织中的残留消除规律

试验组鸡按体重以120、240 mg·(kg·d)-1剂量给药，每天1次，连续7 d，在休药后4 h(零休药期)到第15天的不同时间点测定肌肉、肝、肾中药物残留量，研究AMP在鸡组织中的残留消除规律。结果表明，休药4 h(零休药期)，各组织中AMP的残留量最高，并在休药后第3天迅速降低。休药第5天后所有组织中AMP残留量均低于最高残留限量(50 μg·kg-1)，休药第9天各组织中AMP残留量均低于检测限。休药后相同时间点鸡肉中药物残留量最低，鸡肝中的药物残留量最高。AMP在肾中残留比肌肉、肝消除缓慢，且消除时间长，与肾为药物代谢与排泄器官有关。AMP在肌肉、肝和肾中的残留量均与给药剂量呈正相关。

3.4 氨苄西林在鸡组织中的休药期

农业部278号文件规定[17]，AMP在肉鸡临床的休药期是7 d，根据AMP在鸡组织中的残留检测值，采用WT1.4软件按95%置信区间计算AMP在京海黄鸡肌肉、肝和肾中的休药期，计算结果显示120、240 mg·(kg·d)-1剂量组AMP在肌肉中的理论休药期分别为2.81 d和3.36 d；在肝中分别为3.50和4.80 d；在肾中分别为3.82和4.76 d。参考中国和欧盟规定的AMP在鸡组织中的最高残留限量标准(50 μg·kg-1)，为保障人民的生命健康，建议黄羽肉鸡按体重以120、240 mg·(kg·d)-1剂量内服给药，每天1次，连续7 d后，其休药期(WT)分别为4和5 d。

4 结 论

黄羽肉鸡分别按体重以120、240 mg·(kg·d)-1剂量给药，每天1次，连续7 d内服给药后，休药4 h(零休药期)，各组织中氨苄西林的残留量最高，并在休药后第3天迅速降低。休药第5天后所有组织中氨苄西林残留量均低于最高残留限量(50 μg·kg-1)，休药第9天各组织中氨苄西林残留量均低于检测限。休药后肌肉中药物残留量最低，肝中的药物残留量最高，肾中残留时间最长；各组织中AMP的残留量与给药剂量呈正相关。参考中国和欧盟规定的氨苄西林在鸡组织中的最高残留限量标准(50 μg·kg-1)，建议黄羽肉鸡按体重以120、240 mg·(kg·d)-1剂量给药，每天1次，连续7 d后，其休药期分别为4和5 d。

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[16] 中华人民共和国农业部.关于发布《兽药残留试验技术规范(试行)》的通知[S]//农牧发[2003]1号.北京：农业部，2003. Ministry of Agriculture of People’s Republic of China.Test specification of veterinary drug residues (for trial implementation)[S].Doccment[2003] No.1 of Department of Animal Production of Ministry of Agriculture of PRC.Beijing,2003.(in Chinese)

[17] 中华人民共和国农业部．《兽药停药期的规定》[S]//农业部第278号公告．北京：农业部，2003． Ministry of Agriculture of People’s Republic of China.Requirements for drug withdrawal period[S]//Announcement No.278 of the Ministry of Agriculture of PRC.Beijing,2003.(in Chinese)

(编辑 白永平)

Ampicillin Residue Depletion in Chicken Tissues

SUN Li-rui1,2，XIE Xing3，XIE Kai-zhou1,2*，ZHANG Xiao-jie1,2，WANG Jian-feng1,2， CUI Lu-lu1,2，LIU Jian-yu1,2，ZHANG Gen-xi1,2，DAI Guo-jun1,2，WANG Jin-yu1,2

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology，YangzhouUniversity，Yangzhou225009，China； 2.KeyLaboratoryforAnimalGenetic，Breeding，ReproductionandMolecularDesignofJiangsuProvince，Yangzhou225009，China；3.CollegeofVeterinaryMedicine，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China)

A study on ampicillin (AMP) residue depletion was conducted in chicken tissues.AMP was extracted from chicken tissues with sodium dihydrogen phosphate solution.After being deproteinizated with acetonitrile and degreased in n-hexane saturated，the analyte was extracted by saturated dichloromethane.The supernatant was reacted with formaldehyde under acidic and boiling conditions.Finally，AMP was determinated by high performance liquid chromatography (HPLC) with fluorescence detector.The excitation wavelength was set at 327 nm and emission wavelength was set at 409 nm.The average recovery in chicken tissue was 75.31%-85.87% with coefficients of variation (CV) lower than 10.20%.The limit of detection (LOD) was 3.5 μg·kg-1(S/N=3) and the limit of quantitation (LOQ) was 10.0 μg·kg-1(S/N=10).After the chickens were orally administered successively AMP of 120 mg·kg-1and 240 mg·kg-1of body weight one time every day for 7 days，the maximum residues of AMP in chicken tissues were detected at 4h after final administration.Concentrations of AMP fell sharply at the 3th withdrawal day，all lower than MRL (50 μg·kg-1) at the 5th withdrawal day，and all lower than LOD (5.0 μg·kg-1) at the 9th withdrawal day.At the same time definition，the concentration of AMP in muscle was lowest，but highest in liver.However，AMP in kidney needed more time for depletion.The residues of AMP in chicken tissues were all positively correlated with AMP orally administered doses.The concentration-time dates were analyzed by WT1.4 software to get the withdrawal time (WT) with 95% upper tolerance limit，the WT advised in normal dose group was 4 d，and in double dose group was 5 d.

ampicillin；HPLC with fluorescence detection；residue depletion；chicken tissues

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.01.017

2014-04-30

国家肉鸡产业技术体系专项(CARS-42-G23)；“十二五”国家科技支撑计划(2014BAD13B02)；江苏高校优势学科建设工程项目；扬州大学“新世纪人才工程”项目

孙礼瑞(1990-)，男，山东青岛人，硕士生，主要从事畜产品品质、安全与环境控制的研究，Tel： 0514-87997205，E-mail:yzslr1222@foxmail.com

*通信作者：谢恺舟，E-mail:yzxkz168@163.com

S859.84

A

0366-6964(2015)01-0130-08