GC法测定羚黄宝儿丸中麝香酮、冰片、丁香酚的含量

任 睿 陈新国 李 磊 袁少雄 陈娇娇 张园园

(1 广东省药品检验所，广州，510000; 2 北京中医药大学中药学院，北京，100102)

中药研究

GC法测定羚黄宝儿丸中麝香酮、冰片、丁香酚的含量

任 睿1陈新国1李 磊2袁少雄2陈娇娇2张园园2

(1 广东省药品检验所，广州，510000; 2 北京中医药大学中药学院，北京，100102)

目的:建立GC法同时测定羚黄宝儿丸中麝香酮、冰片、丁香酚3种成分的含量。方法:采用直接进样GC法，色谱柱为DB-WAX毛细管柱(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm)，FID检测器，载气为氮气，程序升温，柱流量为1.2 mL/min。结果:3种成分在均呈现良好的线性关系，精密度、重复性RSD均<3%，加样回收率在95%～106%。结论:直接进样GC法方法简便、灵敏、准确、重现性好，适用于羚黄宝儿丸中麝香酮、冰片、丁香酚的含量测定。

羚黄宝儿丸;麝香酮;冰片;丁香酚;含量

羚黄宝儿丸是由麝香、黄连、羚羊角、甘草、冰片、人参、人工牛黄、猪胆膏、丁香九味药物制成，为银白色的包衣微丸;味苦、凉;功能主治为清热熄风，除痰定惊，开窍醒神。用于小儿发热，惊哭夜啼，痰热咳嗽，泄泻，脾胃虚弱及消化不良等症。由于该药组方合理，疗效确切，不良反应小，深受广大患者的欢迎，现已被收载为非处方药物。羚黄宝儿丸的标准收载于《卫生部药品标准》[1]，无含量测定项目。钟氏[2]等建立了HPLC法测定其中盐酸小檗碱的含量，此外未见其他有效成分的含量测定方法用于羚黄宝儿丸的质量控制。麝香是羚黄宝儿丸的主药之一，目前药典规定以麝香酮作为麝香质量控制指标，麝香药材与制剂中麝香酮的含量测定方法主要有气质联用法(GC-MS)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)和薄层扫描法(TLCS)等[3]。研究表明，冰片具有抗菌、抗炎、止痛的功效，目前中成药多使用合成冰片，其除含有龙脑外，还含有异龙脑，目前已建立了GC和GC-MS等检测方法[4-7]。丁香酚是其丁香挥发油中主要成分，其含量测定多采用HPLC法、荧光分析法、毛细管气相色谱法[8-10]等。本研究首次采用GC法对羚黄宝儿丸中麝香酮、冰片、丁香酚的含量进行测定，方法简便、灵敏、准确、重现性好，为羚黄宝儿丸的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 GC-2010气相色谱仪(日本岛津)，包括GC-solution工作站、FID检测器;SPH-200氢气发生器(北京中惠普分析技术研究所);LGA-2000空气发生器(上海安谱科学仪器有限公司);高纯氮气(广州耀升气体有限公司);Academic A10超纯水系统(美国Millipore);CPA2245电子天平(德国Sartorius)。

1.2 试药 冰片对照品(批号110743-200905)、丁香酚对照品(批号110725-200711)、麝香酮对照品(批号110719-200512)购于中国药品生物制品检定所;羚黄宝儿丸(批号:N00001，T06005，T06009)由广州敬修堂(药业)股份有限公司提供;正己烷、无水乙醇为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:DB-WAX毛细管柱(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm);检测器:FID;柱温采用程序升温，初始温度为120 ℃，维持3 min，再以4 ℃/min升温至140 ℃，最后以10 ℃/min升温至210 ℃，维持6 min;进样口温度为210 ℃;检测器温度为250 ℃;载气为氮气;柱流量为1.2 mL/min;分流比为50∶1;进样量1 μL。在此色谱条件下龙脑、异龙脑、丁香酚、麝香酮与其邻近的杂质峰可达到基线分离，分离度均大于3，理论板数均大于80 000。色谱图如图1所示。

图1 对照品(A)及羚黄宝儿丸供试品(B)色谱图

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照溶液的制备 分别精密称取冰片、丁香酚、麝香酮对照品50、20、2 mg至25 mL量瓶中，加无水乙醇溶解并定容，摇匀，制得冰片、丁香酚、麝香酮浓度分别为2.0、0.8、0.08 mg/mL的混合对照品贮备液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取羚黄宝儿丸内容物约1 g至圆底烧瓶中，加入纯净水200 mL，在挥发油测定管中加入适量的纯净水和正己烷7 mL，加热回流3 h，冷却至室温，取正己烷层至10 mL量瓶中并以正己烷定容。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系 取“2.2.1”项下制备的混合对照品溶液，用无水乙醇稀释为6个浓度的系列混合对照品溶液，在“2.1”项下色谱条件下分别进样1 μL，测量峰面积值。以峰面积值Y与对照品浓度X(mg/mL)进行线性回归，结果见表1。

表1 各成分的回归方程与线性范围

2.3.2 精密度试验 取“3.3.1”项下制备的冰片、丁香酚、麝香酮浓度分别为0.5、0.2、0.02 mg/mL的对照品溶液，重复进样6次，记录各成分峰面积，RSD分别为0.85%、1.13%、1.78%。

2.3.3 重复性试验 取同一批羚黄宝儿丸样品(批号:N00001)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，依“2.1”项下色谱条件分别进样。结果冰片、丁香酚、麝香酮的平均含量分别为5.88、2.46、0.32 mg/g，RSD分别为1.59%、1.98%、1.89%，即本方法的重复性较好。

表2 加样回收率测定结果

2.3.4 回收率试验 精密称取已知含量的羚黄宝儿丸样品(批号:N00001)6份，每份0.5 g，分别精密加入已知量的冰片、丁香酚、麝香酮对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液并进样，测定各成分的含量，计算回收率，结果如表2所示。

2.3.5 稳定性试验 取羚黄宝儿丸内容物，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，放置0、2、4、6、8、12、18、24 h后分别进样，测得冰片、丁香酚、麝香酮的平均含量分别为6.67、2.74、0.34 mg/g，RSD分别为2.09%、1.84%、0.84%，结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

2.4 样品含量测定 按“2.2.2”项下方法对3个不同批号的羚黄宝儿丸样品进行处理，分析测定，结果见表3。

表3 样品含量测定结果(n=2)

3 讨论

3.1 提取条件的选择

3.1.1 提取方法的选择 本研究曾采用丙酮为溶剂，超声处理15 min，滤过，滤液作为供试品溶液，由于冰片、丁香酚易挥发，测定结果存在较大偏差，难以控制。根据指标成分具有挥发性的特点，采用挥发油提取器进行提取，重复性好，RSD值符合药典规定。

3.1.2 提取溶剂的选择 根据冰片、丁香酚、麝香酮几乎不溶于水，可溶于乙醇、乙酸乙酯、丙酮、苯、正己烷等有机溶剂中的性质，从上述溶剂中优选提取溶剂。无水乙醇、丙酮在挥发油提取器中与水层无明显分层，乙酸乙酯易乳化变浑浊，因此误差较大。正己烷与水分层清晰。因此综合毒性、准确度等多种因素，选择正己烷为本实验提取溶剂。

3.2 色谱条件的选择

3.2.1 色谱柱的选择 分别考察了极性柱，中性柱，非极性柱，结果表明，极性柱的分离效果较好。

3.2.2 检测温度的选择 根据文献[11-14]，考察了两种梯度升温程序。程序1:初始温度为120 ℃，维持3 min，再以4 ℃/min升温至160 ℃，最后以20 ℃/min升温至210 ℃，维持3 min;进样口温度为210 ℃;检测器温度为250 ℃。程序2:初始温度为120 ℃，维持3 min，再以4 ℃/min升温至140 ℃，最后以10 ℃/min升温至210 ℃，维持6 min;进样口温度为210 ℃;检测器温度为250 ℃。结果表明，程序1各成分出峰时基线不平，而程序2基线相对较平，分离度好。

4 结论

本实验对羚黄宝儿丸进行加热回流提取后，采用GC法测定冰片、丁香酚、麝香酮的含量，方法重复性好、灵敏度高、定量准确、分离度符合要求，可作为羚黄宝儿丸质量控制方法之一，为羚黄宝儿丸的质量控制和进一步开发提供参考依据。

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(2014-04-15收稿 责任编辑：王明)

Determination of Contents of Muscon,Borneol and Eugenol in Linghuangbaoer Pellets by GC Method

Ren Rui1,Chen Xinguo1,Li Lei2,Yuan Shaoxiong2,Chen Jiaojiao2,Zhang Yuanyuan2

(1GuangdongInstituteforDrugControl,Guangzhou510000,China; 2SchoolofChineseMateriaMedica,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)

Objective:To determine the contents of Muscon,Borneo and Eugenol in Linghuangbaoer Pellets by GC method.Methods:The GC system consisted of DB-WAX(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm)capillary column.Programmed temperature was set from 120 ℃ to 210 ℃ and the detector temperature was 250 ℃.The detector was FID using high pure helium as carrier gas with the flow rate of 1.2 mL/min.Results:Borneol,Eugenol and Muscon were separated with a good linearity in the sample size ranges of 0.125～2 mg/mL for Borneol,0.05～0.8 mg/mL for Eugenol,and 0.005～0.08 mg/mL for Muscon.The average recoveries for Borneol,Eugenol and Muscon was 105.51% (RSD=1.44%),95.79% (RSD=0.29%),99.94% (RSD=0.66%),respectively.Conclusion:The GC method is simple,feasible and reproducible.It can be used for the quality control of Linghuangbaoer Pellets.

GC; Linghuangbaoer Pellets; Muscon; Borneol; Eugenol

张园园，女，副教授，中药药物代谢动力学，Tel:(010)84738651，E-mail:choenen@163.com

R284.2

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.03.030