渝产续断多糖超声波辅助提取工艺的优化

张丹 陶燕铎 谈利红 余保 颜学伟 曹纬国

摘要： 为建立渝产续断（Dipsacus asperoids）多糖的最佳超声波辅助提取工艺，设计正交试验，以续断多糖的提取率为评价指标，对续断多糖的超声波辅助提取工艺参数进行考察。结果表明，最佳超声波辅助提取工艺为料液比1∶20（g∶mL），提取时间60 min，提取4次，测得续断多糖的平均提取率为7.472%，RSD为2.12%，表明续断多糖超声波辅助提取工艺稳定，质量可控。

关键词： 续断（Dipsacus asperoids）;多糖;正交试验;超声波辅助

中图分类号：S567.23+9;R284.2        文献标识码：A        文章编号：0439-8114（2015）02-0431-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.044

Optimizing Microwave-Ultrasonic Assisted Technology of Extracting Ploysaccharide from Dipsacus asperoids in Chongqing City with Orthogonal Design

ZHANG Dan1，TAO Yan-duo2，TAN Li-hong1，YU Bao1，YAN Xue-wei1，CAO Wei-guo1

（1. TCM College，Chongqing University of Medical Sciences，Chongqing 400016， China;

2. The Northwest Institute of Plateau Biology， Chinese Academy of Sciences， Xining 810000， China）

Abstract： To establish the optimal microwave-ultrasonic assisted technology of extracting polysaccharides from Dipsacus asperoids in Chongqing city， orthogonal experiment was conducted. The extraction percentage of polysaccharides was used as an evaluation index to screen the parameters of the microwave-ultrasonic assisted technology of extracting polysaccharides from Dipsacus L.. The ratio of materials to liquids was 1∶20（g∶mL）， with 4 times of 2 h. The average extraction rate was 7.472%. RSD was 2.12%. The extraction was stable with controllable quality.

Key words： Dipsacus asperoids; polysaccharides; orthogonal experiment; microwave-ultrasonic assisted

续断为川续断科植物川续断（Dipsacus asperoids）的干燥根[1]，又名川断，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏、安胎等功效，主要用于胎漏、胎动不安、滑胎、腰膝酸软、跌打损伤和骨折等症。续断化学成分研究已较为深入，且多集中于其皂苷类成分[2，3]，已有研究表明续断类药材多糖含量较高，重庆作为续断的主产区之一，目前尚未有关于重庆产续断多糖的研究报道。多糖尤其是中药多糖具有增强机体免疫功能及抗肿瘤等药理作用，因此续断药材中含量较高的多糖类成分具有潜在的研究价值。本试验以重庆产续断为原料，采用正交试验法优选续断多糖的超声波辅助提取工艺，为续断多糖的深入研究奠定基础。

1  材料与方法

1.1   材料与仪器

续断药材采自重庆武隆后坪乡，经重庆医科大学王刚副教授鉴定为川续断。

UV-1750型紫外可见分光光度计（岛津仪器有限公司）;HH-6型数显恒温水浴锅（金坛市荣华仪器制造有限公司）;AL204型电子分析天平（瑞士梅特勒托利多集团）;KH5200DA型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司），DGG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）。

葡萄糖标准品（中国药品生物制品检定研究院提供，批号为110833），浓硫酸、正丁醇、氯仿、丙酮、无水乙醇、95%乙醇、石油醚、纯净水等均为分析纯。

1.2  试验方法

1.2.1  标准品溶液的配制  室温下精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品51.8 mg，置50 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀即得。

1.2.2  供试品溶液的制备  称取已烘干的续断药材粉末10 g，置圆底烧瓶中加入80 mL石油醚回流提取脱脂，共计2次，每次2 h。药渣挥去溶剂后，加入80 mL 95%乙醇回流提取2次，每次1.5 h，药渣挥去溶剂后，加水200 mL，100 ℃水浴提取5次，每次2 h，合并提取液，浓缩并定容至1 000 mL，即得供试品溶液。

1.2.3 标准曲线的制备  吸取上述标准品溶液0、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL于50 mL容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，得系列葡萄糖标准品溶液。各吸取0.5 mL置于10 mL具塞试管中，再分别加入5%苯酚1.0 mL，摇匀后迅速加入浓硫酸4.0 mL，摇匀后30 ℃水浴30 min，冰水浴冷却15 min，在489 nm下测定其吸光度，以吸光度A为纵坐标，葡萄糖标准品浓度C为横坐标制作标准曲线[4，5]。

1.2.4  正交试验设计[6，7]  选定影响多糖提取率的料液比（g∶mL，下同）、提取时间以及提取次数作为考察因素，以多糖提取率作为考察指标，选用L9（34）正交表安排试验考察各因素的影响，因素与水平见表1。

2  结果与分析

2.1  最大吸收波长的确定

精密量取供试品溶液与标准品溶液各0.05 mL，置5 mL容量瓶中，分别加1.0 mL去离子水、4%苯酚溶液1.0 mL，摇匀，加入浓硫酸5.0 mL，40 ℃水浴加热15 min，置冰水浴中冷却5 min，以相应的试剂为空白，同时制备供试品与标准品的未显色样品，按照紫外可见分光光度法，在200～800 nm范围内进行光谱扫描，续断多糖与葡萄糖样品显色后均在489 nm处有最大吸收，且对应未显色样品在489 nm处基本没有吸收，结果见图1。因此选择489 nm为测定波长。

2.2  标准曲线的绘制

精密吸取上述标准品溶液0、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL于50 mL容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，得系列葡萄糖标准品溶液。以吸光度A为纵坐标，葡萄糖标准品浓度C为横坐标进行线性回归，得到标准曲线为：A=7.87C+0.004 36，r=0.999 3，结果表明，葡萄糖浓度在0.010 36～0.103 60 mg/mL范围内线性关系良好。

2.3  正交试验结果

以续断多糖的提取率为评价指标，筛选续断多糖的超声波辅助提取工艺，正交试验结果见表2。由表2极差分析可知，各因素的主次顺序为A、C、B，最佳提取工艺为A2C3B3，即用1∶20的料液比提取4次，提取时间为60 min，且续断多糖超声波辅助提取工艺中一定要控制好料液比和提取次数。分别精密称取3份续断药材，每份50 g，依据正交试验优选的最佳工艺条件提取续断多糖，结果测得续断多糖的平均提取率为7.472%，RSD为2.12%，说明该工艺稳定可行。

3  小结与讨论

本研究通过正交试验设计，初步建立了渝产续断多糖的超声波辅助提取工艺为料液比1∶20，提取时间为60 min，提取4次，结果测得续断多糖的平均提取率为7.472%，RSD为2.12%，表明该工艺稳定可行，为渝产续断的进一步开发利用奠定了基础。与已有研究结果[8-10]相比，渝产续断多糖含量高于黔产续断和五鹤续断，说明续断多糖的含量产地差异性较大，重庆为续断主产区，续断质量较优。

苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，颜色持久，在490 nm左右有最大吸收，采用紫外可见分光光度法测定，简单、快速、灵敏、重复性好。

参考文献：

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[2] 刘  永，卫莹芳，闫  婕，等.不同产地续断中总皂苷的含量测定[J].时珍国医国药，2009，20（11）：2767-2768.

[3] 董玉琼，何晓红，钟国跃，等.正交法优选川续断的提取工艺[J].中国中药杂志，2007，32（11）：1107-1109.

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[6] 吴  彦，魏和平.大蓟多糖提取分离及含量测定[J].光谱实验室，2010，27（1）：98-101.

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[8] 翟  琨，向东山，武  芸，等.五鹤续断中多糖提取工艺的研究[J].安徽农业科学，2007，35（31）：9807-9808.

[9] 武  芸，丁  莉.五鹤续断多糖的提取及动态分布规律的研究[J].时珍国医国药，2009，20（6）：1325-1326.

[10] 杨武德，姜  辉，郭露玫.黔产续断总皂甙和多糖含量的测定[J].贵州农业科学，2011，39（5）：73-74.