LC-MS/MS法测定酒中罂粟壳生物碱

景赞 刘超

（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山 614000）

LC-MS/MS法测定酒中罂粟壳生物碱

景赞 刘超

（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山 614000）

本文建立了高效液相-串联质谱法测定蒸馏酒及配制酒中罂粟壳生物碱（吗啡、蒂巴因、罂粟碱、那可丁）的方法。蒸馏酒采取直接进样，配制酒经PCX固相萃取柱净化后分析，以乙腈（含0.1%乙酸）-10mmol/L乙酸铵为流动相梯度洗脱，液相柱为ODSC18柱，质谱选择正离子多反应监测模式，以外标法定量。该方法吗啡、蒂巴因、罂粟碱、那可丁的检出限为20ng/mL、5ng/mL、5ng/mL、5ng/mL，回收率范围91.1%～101.4%，本方法样品处理简便，定性定量准确，适用于酒中罂粟壳生物碱含量的检测。

酒；液质联用；罂粟壳生物碱成分

罂粟壳为植物罂粟干燥成熟的果壳，主要含有罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因等多种生物碱。罂粟壳加工入药，有敛肺、涩肠、止咳、止痛和催眠等功效，可以治久咳、久泻、脱肛、心腹、筋骨等诸痛[1]，在本草纲目中也有记载，是治疗久痢不止的良药，现代医学上，从罂粟壳中提取吗啡用于镇痛，有良好的药用价值[2,3]。但近年来，罂粟壳却被利欲熏心的不法之徒，用来添加在调味料、尤其是火锅底料中，以使消费者“百吃不厌”，但长期食用含有罂粟壳的食品，会让人产生生理依赖性，严重时会危害神经和消化系统[4,5]。

白酒作为大宗消费品，在国内占有很大的市场，但近年来其质量安全状况也不容乐观[6-7]，不法商贩为谋取利益不择手段，酒中也有罂粟壳生物碱的检出，长期低剂量饮用含有罂粟壳成分的酒类会有致瘾性，大剂量服用甚至危及生命。因此，建立一种检测酒中罂粟壳生物碱的方法显得迫在眉睫。目前检测罂粟壳生物碱的方法有分光光度法、气相色谱法、气质联用法、液相色谱法和液质联用法等，而前4种方法前处理复杂，大量消耗乙醚、氯仿，对环境和实验人员都有伤害，对于复杂基质的样品分离结果不甚理想；相比之下，液质联用法前处理方法简便，尤其适用于分离复杂基质样品，无论定性还是定量都更为准确[11-14]，所以本文选择液质联用法检测蒸馏酒及配制酒中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因，而关于检测酒中上述物质的方法还未有报道，本方法填补了此项空白，扩大了食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的检测范围。

近几年食品违法添加非食用物质呈上升态势，食品监管形式依然严峻，面对此种情况，我们更应该加强风险意识和检验技术能力建设，将食品安全事件的发生率降到最低限度，也是建立该方法的意义所在。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

20个样品采购自本市各零售网点及餐饮店，在售或自制的蒸馏酒及配制酒。

吗啡、蒂巴因、罂粟碱、那可丁均购于中国药品生物制品研究所。乙腈、甲酸，色谱纯。乙酸铵，优级纯。

1.2 仪器与设备

高效液相-串联质谱仪，API3200，AB SCIEX公司；

超纯水机，UPT-Ⅱ-10T，四川优普超纯科技有限公司；

SPE固相萃取装置，Agela；

PCX固相萃取柱，500mg/6mL，Agela。

1.3 标准溶液配制

配制吗啡、蒂巴因、罂粟碱、那可丁混合标准溶液，蒂巴因、罂粟碱、那可丁浓度为0、20、40、60、80、100ng/mL；吗啡浓度为0、50、100、200、300、400ng/mL。

1.4 样品前处理

蒸馏酒：经0.22μm有机滤膜过滤后备用。

配制酒：取10mL样品于PCX固相萃取柱（事先用5mL甲醇和5mL纯水活化）中，以小于1mL/min的速度过柱，分别用5mL甲醇和5mL纯水淋洗，弃去所有淋洗液，再用10mL含5%氨水的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，氮气吹至近干后，加入1mL乙腈（含0.1%乙酸）-10mmol/L乙酸铵溶液（体积比1:9）[8,9]，溶解后备用。

1.5 仪器条件设置

1.5.1 液相色谱条件

色谱柱：ODS-C18（2.1mm×150mm，5μm）；柱温：40℃；进样体积：10μL；流速：0.3mL/min；流动相A：乙腈（含0.1%乙酸）、B：10mmol/L乙酸铵溶液[10]。梯度洗脱条件见表1。

表1 梯度洗脱条件Table 1Condition of gradient elution

1.5.2 质谱条件

离子源：正离子模式（ESI+）；离子化方式：电喷雾电离；CUR：30；CAD：3；IS：5500；TEM：400；GS1：50；GS2：50，多反应监测条件见表2。

表2 多反应监测条件Table 2Condition of MRM

2 结果与分析

2.1 标准溶液的线性关系和检出限

以峰面积为纵坐标，以标准溶液浓度为横坐标，计算线性回归方程及相关系数，得到检出限，结果见表3。

表3 线性范围和检出限Table 3Linear range and detection limit of alkaloids of pericarpium papaveris

2.2 加标回收率

在酒样中加入吗啡、蒂巴因、罂粟碱、那可丁标准溶液分别使其最终浓度吗啡为50、150、300ng/mL 3个水平浓度，蒂巴因、罂粟碱、那可丁为20、50、80ng/mL 3个水平浓度，每个浓度设定6个平行，在仪器最优条件下测定，计算回收率和精密度，结果见表4。

表4 加标回收率及其相对标准偏差（n=6）Table 4Recoveries and relative standard deviation of samples（n=6）

2.3 精密度

表5 精密度（n=6）Table 5Precision of samples（n=6）

在空白样品中加入标准溶液，使吗啡最终浓度达到50、150、300ng/mL 3个水平，蒂巴因、罂粟碱、那可丁达到20、50、80ng/mL 3个水平，每个样品进样6次，计算RSD，结果见表5。

2.4 样品检测结果

将样品按照前处理方法净化后上机分析，结果均未检出吗啡、蒂巴因、罂粟碱、那可丁。未检出的原因可能有以下几个方面：本地零售店及各餐饮店进货渠道正规，生产加工过程严格按照食品安全国家标准及食品安全法要求执行，不存在违法添加行为；本次采购样品主要集中在市区，各区县尚未覆盖到，样本数需加大。

3 结论

本文建立了酒中吗啡等四种罂粟壳生物碱的检测方法，该方法具有前处理简单，有机试剂消耗少，缩短检测周期等优点；通过验证方法回收率、精密度等方面，证明该方法准确、可靠；同时也填补了酒中罂粟壳生物碱的检测方法空白，为监督检验工作提供了依据。

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京:科学出版社,1999,32:52-53.

[2]徐敏友,张淼,孙启美.中药罂粟壳古代应用与炮制理论的研究[J].中成药,1998,20(6):26.

[3]王华伟,王文萍,高晶晶.罂粟壳与吗啡镇痛作用对比的实验研究[J].辽宁中医杂志,2008,35(6):941-942.

[4]董小红,刘彤,翟永冠.多地餐饮店揽客"秘方"竟是罂粟壳[N].新华每日电讯,2014-10-31(5).

[5]胡立彪.“人格分裂”的罂粟壳[N].中国质量报,2014-11-4(4).

[6]徐建华.“年份酒”有望说清年份[N].中国质量报2013-07-30(1).

[7]郑校先,冉宇舟,徐建芬，等.白酒“塑化剂”食品安全风波分析及白酒包装材料问题[J].酿酒科技,2013,232(10):62-64.

[8]王力清,郦明浩,李锦清,等.超高效液相色谱——串联质谱法高通量快速测定调料中罂粟壳生物碱含量[J].食品与发酵工业,2012,38(8):168-172.

[9]谷岩,刘广福,张元,等.固相萃取-高效液相色谱法测定汤料中罂粟壳提取物残留量[J].理化检验（化学分册）,2011,47 (12):1411-1413.

[10]张林田,黄少玉,陆奕娜,等.固相萃取/HPLC-MS/MS检测食品中吗啡等五种罂粟壳生物碱残留[J].分析试验室,2014,33 (6):722-725.

[11]张忠会,王惠达,杨威.罂粟壳生物碱的可见分光光度法测定[J].中成药,2002,24(7):537-538.

[12]徐丽红,王建清,陶秋,等.高效液相色谱同时测定3类食品中的5种罂粟壳生物碱[J].分析测试学报,2011,30(12): 1387-1391.

[13]季申,王柯.GC法测定中药罂粟壳中吗啡、可待因和罂粟碱的含量[J].中草药,1998,29(8):526-528.

[14]刘奋,戴京晶,林奕芝,等.GC/MS法测定掺入食品中罂粟壳残留的方法研究[J].中国卫生检验杂志,2003,13(6):714-715.

Investigation of Alkaloids of Pericarpium Papaveris in Wines by LC-MS/MS

JING ZanLIU Chao
(Leshan Center for Food and Drug Control,Leshan 614000,China)

To develop a method for alkaloids of pericarpium papaveris(morphine,thebaine,papaverine and narcotine)in distilled wines and mixed wines by LC-MS/MS.The wines were separated in ODS-C18 column with acetonitrile-ammonium acetate solution after purificatied by PCX solid-phase extraction column.The data was quantified by external standard method under the positive ion mode.The limits of detection for morphine,thebaine,papaverine and narcotine were 20ng/mL, 5ng/mL,5ng/mL and 5ng/mL,the average recoveries between 91.1%～101.4%.This method was accurate and reliable with simple sample prepatation,and could be used for the determination of alkaloids of pericarpium papaveris in wines.

Wines;LC-MS/MS;alkaloids of pericarpium papaveris

book=22,ebook=28

TS207.3

A

1008-1038(2015)12-0022-04

2015-08-12

景赞（1985—），男，助理工程师，研究方向为食品安全及检测