丹参脂溶性有效成分丹参酮研究进展

李建恒，乔亚君，侯力峰，贺学礼

(1.河北大学药学院，河北保定　071002；2.河北大学生命科学学院，河北保定　071002)

丹参脂溶性有效成分丹参酮研究进展

李建恒1，2，乔亚君1，侯力峰1，贺学礼2

(1.河北大学药学院，河北保定071002；2.河北大学生命科学学院，河北保定071002)

摘要：为了获得高纯度、高品质的丹参酮，使其更好地发挥药理活性，在查阅国内外近10年有关丹参酮研究文献的基础上，对其提取纯化、合成制备、药理作用等研究成果进行系统综述.结果显示，应用现代技术手段提取纯化得到的丹参酮纯度较高、品质较好，且易于操作，条件容易控制，其中非离子表面活性剂辅助提取、超临界CO2萃取、超声提取、超高压辅助提取等是应用前景较广的经济、有效、绿色的提取方法.高效逆流色谱法是效果较好的纯化方法.目前丹参酮类物质的生物合成技术也取得了瞩目的成就.此外丹参药理活性的研究主要集中于抗肿瘤、天然抗氧化、抗菌消炎、治疗心脑血管疾病等方面，且取得了很好的临床效果.这些研究为丹参的全面开发利用提供了参考.

关键词：丹参酮；脂溶性成分；正交设计；药理活性；抗菌

DOI：10.3969/j.issn.1000-1565.2015.02.019

中图分类号：R282

文献标志码：志码：A

文章编号：编号：1000-1565(2015)02-0217-08

收稿日期:2014-03-21

基金项目：河北大学自然科学研究计划项目(3333112)

Abstract:In order to obtain tanshinone of high purity and high quality,and then research it more systematically,on the basic of reviewing the related literature in recent 10 years,the extraction and purification,synthesis and preparation,content determination and pharmacological effects had been researched and summarized.The result showed that tanshinone had a higher purity and better quality with the application of modern technology,in addition,the extraction method was easy to operate and the conditions was easy to control.Among them,non ionic surfactant assisted extraction,supercritical carbon-dioxide extraction,ultrasonic extraction and ultrahigh pressure assisted extraction were economic,effective,green extraction method and had a widely application prospect.High-speed counter-current chromatography was better purification method.Currently tanshinone’s biosynthesis technology also has made remarkable achievements.Many studies of the strong pharmaceutical activities have focused on anti-tumor,antioxidant,anti-inflammatory and treatment of cardiovascular and cerebrovascular diseases and achieved good clinical results.These studies provided reference for comprehensive development and utilization of Salvia miltiorrhiza in the future.

Researches on tanshinone ofSalviamiltiorrhiza’s

fat-soluble active ingredient

LI Jianheng1,2, QIAO Yajun1, HOU Lifeng1, HE Xueli2

(1. College of Pharmacy， Hebei University，Baoding 071002，China;

2. College of Life Sciences，Hebei University，Baoding 071002，China)

第一作者:李建恒(1964-)，男，河北徐水人，河北大学教授，主要从事天然植物有效成分研究.

E-mail:lijianheng@hbu.edu.cn

Key words：tanshinone;fat-soluble components;orthogonal design;pharmacological activity;antibacterial

丹参(SalviamiltiorrhizaBge.)属双子叶唇形科植物，主产于河北、安徽、江苏、四川等地，始载于《神农本草经》，能够起到活血通络、凉血消痈、祛瘀止痛、清心除烦等作用.自20世纪30年代以来，有关学者对丹参的药用成分和临床应用进行了深入研究，并分离得到了许多化学成分.丹参的化学成分分为脂溶性和水溶性两部分，丹参酮(tanshinone,Tsn)是丹参中脂溶性松香烷型二萜类化合物，又称为总丹参酮，是丹参根部的主要提取物，具有广泛的药理作用，受到医药学家的高度关注.

总丹参酮按照结构分类为丹参酮I、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、二氢丹参酮I、羟基丹参酮、隐丹参酮、异丹参酮、丹参酮甲酯等药用成分，它们的相同点是具备邻醌或对醌结构，且能够被还原为二酚类衍生物，氧化后又转化为醌，在此过程中起到传递电子的作用；而且它们的体内代谢产物也能够促进或干扰机体的多种反应，所以具有抗癌、抗菌、抗病毒等临床药理作用.

近年来国内外对丹参的研究已经突破其化学成分的性质及传统药理作用,且丹参酮的临床应用也已经非常广泛，需求量不断增大.所以目前更多的研究旨在探索如何高效获取丹参酮并使其发挥更大的药理作用，在生态学、化学、药学工作者的密切配合和努力下，丹参酮的提取纯化、生物合成、药理作用各个方面的研究都取得了巨大的成就.

1提取纯化

总丹参酮的提取、分离纯化工艺虽然发展较早，但过去主要以有机溶剂提取为主，容易导致溶剂残留量大、环境污染等问题，且提取物纯度较低.因此，探寻一种高效的提取纯化总丹参酮的方法，对促进丹参酮药理作用的研究具有很大的应用价值，现将目前常用的提取方法概括如下.

1.1　提取

1.1.1非离子表面活性剂辅助提取

非离子表面活性剂辅助提取是一种经济、有效、绿色的提取方法.Bi等[1]根据目标化合物的化学结构和稳定性，选择0.8 mol/L聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)作为提取的非离子表面活性剂，料液比1∶70(g∶mL)，提取时间100 min，得到隐丹参酮和丹参酮Ⅰ分别为0.208，0.147 mg/g.然后过滤提取物并采用浊点萃取浓缩.在pH=5.1，NaCl质量分数15%，平衡温度65 ℃，平衡时间10 min条件下，得到表面活性剂中隐丹参酮和丹参酮Ⅰ的质量浓度分别为45.7，40.6 g/mL.此外该方法还可以较好地应用于其他含苯环疏水性化合物的提取.

1.1.2超临界CO2萃取

刘延上[2]以丹参酮ⅡA为指标成分，重点探讨了超临界CO2萃取丹参酮的工艺条件，对影响萃取效果的各种因素进行了全面考察.通过正交实验得到以体积分数为95%乙醇浸润40目(粒度420 μm)丹参1 h，在萃取压力25 MPa、温度45 ℃、CO2流量25 L/h、萃取时间3 h，体积分数为95%的乙醇作夹带剂，料液比3∶1(g∶mL)的条件下，丹参酮ⅡA萃取率达到84.9%，萃取物中丹参酮ⅡA与隐丹参酮质量分数为53.56%.与传统的醇提工艺相比，该方法耗时少、提取率高，而且得到的丹参提取物呈红褐色，品质好，其有效成分的质量分数能达到新药申报规定的要求.本文还应用硅胶柱层析技术对萃取物中丹参酮ⅡA与隐丹参酮进行了分离，选用石油醚-乙酸乙酯作洗脱剂，体积比为7∶2和7∶1，2次洗脱，分离得到了丹参酮ⅡA与隐丹参酮.这一实验结果不仅为丹参酮的工业化提取和含量测定提供了可借鉴的经验，而且为丹参的进一步开发利用及其产业现代化提供了理论依据.

1.1.3湿式超微粉碎提取

贺建东等[3]通过比较静置提取、回流提取与超微粉碎技术对丹参脂溶性成分提取率的影响，发现超微粉碎提取率最高，因此采用3因素3水平正交实验对乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间进行研究，得到最佳工艺：以体积分数为80%乙醇作为提取剂，料液比1∶8(g/mL)，提取10 min.其中提取时间对提取效果的影响最为显著(P<0.05)，乙醇浓度对提取效果没有显著影响(P>0.05)，生产中考虑到成本，一般选用体积分数为70%乙醇提取.

1.1.4超声提取法

贲永光等[4-5]通过多因素正交实验对丹参酮ⅡA的双频复合超声提取工艺进行优选，得到各因素对丹参酮ⅡA提取率影响次序为：乙醇体积分数>物料粒径>固液比>提取时间>提取温度，最佳工艺参数为体积分数95%的乙醇，物料粒径80~100目(粒度150~178 μm)，料液比1∶20 (g∶mL)，提取时间35 min，提取温度55 ℃，在此条件下提取3次，得到丹参酮ⅡA平均质量分数为89.47%.但是此方法过分破坏植物细胞壁，可能导致一些大分子物质析出，增加了纯化的难度.

1.1.5微波提取法

张力[6]利用微波辅助法提取丹参酮ⅡA，并采用高效液相色谱对丹参提取物中丹参酮ⅡA进行分离测定，比较了提取剂体积分数、加热温度和时间、微波功率、液固比等对产率的影响，得到体积分数为80%乙醇，料液比1∶9(g∶mL)，微波功率600 W，加热温度70 ℃，4 min时丹参酮ⅡA产率较高.然后提取物经D3520型大孔吸附树脂纯化，丹参酮ⅡA质量分数提高到53%.实验还将微波辅助提取工艺与传统加热回流提取方法进行了比较，得到微波提取工艺可大幅度缩短提取时间，节省生产成本，降低能源消耗，同时可以提高产率，且该方法的优越性还体现在符合环保的要求.

1.1.6超高压辅助提取

Liu等[7]采用离子液体薄层制备技术的超高压辅助提取丹参中5种丹参酮类物质，并与热回流萃取、超声波提取作了比较，然后通过显微镜观察超高压处理之后的丹参根组织.结果表明：选用0.5 mol/L[C8-MIM][PF6]离子液体的乙醇溶液作为提取剂，压力300 MPa，提取时间2 min，料液比1∶20 (g∶mL)，得到二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA和丹参新酮质量浓度分别为4.06，9.30，20.3，37.4，0.593 mg/g.经HPLC分析采用热回流法萃取丹参酮的产率较低；超声波提取虽然产率较高，但是提取时间长，综合考虑超高压提取技术用时短且在室温下就可以完成，是一种高效的提取方法.扫描电镜显微图显示经高压处理之后，丹参根组织遭到严重破坏，细胞壁破损，这也从根本上解释了该方法提取率较高的原因.且该方法可以较迅速、均匀地作用于提取材料，又不易引起物质发生化学变化，是一种值得推广的高效提取方法.

1.2　纯化

1.2.1高速逆流色谱法

Sun等[8]采用高效逆流色谱法(HSCCC)，以石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比为6∶4∶6.5∶3.5作为2相溶剂系统对丹参酮类提取物进行分离纯化，实验首先使用乙酸乙酯回流萃取丹参酮类物质，然后经高效逆流色谱分离，多分子层螺旋柱(上层)作固定相，2相溶剂(下层)作流动相，进样量5 mL，分离温度25 ℃，对丹参酮类物质进行分离纯化，结果显示从400 mg丹参提取物中得到8.2 mg二氢丹参酮I，5.8 mg 1,2,15,16-四氢丹参酮，26.3 mg隐丹参酮，16.2 mg丹参酮I，25.6 mg甘西鼠尾新酮A，68.8 mg丹参酮ⅡA和9.3 mg次甲丹参醌，质量分数分别为97.6%，95.1%，99.0%，99.1%，93.2%，99.3%，98.7%.与屈燚[9]研究结果一致.表明高效逆流色谱法对于分离组成复杂的样品具有重要意义，尤其适用于天然植物成分的分离.

1.2.2大孔树脂法

高媛等[10]选用D101型大孔树脂作为纯化树脂，采用料液比1∶8(g∶mL)，体积分数为90%乙醇回流提取2次，每次1 h，并探索丹参酮的最佳纯化条件如下：样品质量分数为40%，吸附速度为3 BV/h，开始吸附柱用5 BV水以除去糖类，最后吸附柱用6 BV，体积分数为 90%乙醇，流速为5 BV/ h.结论：通过最佳纯化条件得到的总丹参酮含量较高，而且技术简单，适合现代生产.

2生物合成

随着研究方法和技术的不断提高，丹参中有效成分的分离提取技术得到快速发展，但传统的提取方法所用溶剂量大，提取时间长，有效物质产率较低；此外丹参酮为热敏性和光敏性物质，提取过程中易被破坏，所以如果能通过生物学以及化学手段合成丹参酮，对丹参酮的应用将有深远意义.

2.1　植物体内合成

杨东风[11]的研究阐述了丹参酮类在植物体内合成途径分为细胞质中的甲羟戊酸(mevalonate,MVA)途径以及质体中的2C-甲基-D-赤藓醇-4-磷酸(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate,MEP)途径，二者的不同点是制得异戊烯基焦磷酸酯(isopentenyl diphosphate,IPP)的机理、位置、前体以及产物不同.其中MVA途径选择乙酰辅酶A来做前体合成IPP，进而形成甾体、倍半萜和三萜等.限速酶是3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)，使甲羟戊酸经催化不可逆生成.MEP途径选用5-磷酸脱氧木酮糖和2C-甲基4-磷酸-4D-赤藓糖醇来做前体合成IPP，再经缩合形成单萜、二萜和四萜.限速酶是1-去氧木糖-5-磷酸还原酶(1-deoxy-D-xylulose5-phosphate reductoisomerase,DXR)，经催化使得1-脱氧-木酮糖-5-磷酸(1-deoxy-D-xyulose5-phosphate,DXP)可逆形成MEP，专一抑制剂是磷甘霉素(fosmidomycin,FOS).且该研究深入探讨了总丹参酮的体内合成机制.

2.2　植物体外合成

日前中国中医科学院中药资源中心的黄璐琦等[12]采用合成生物学策略，通过MVA途径人工合成丹参酮.该课题组分析了用来合成次丹参酮二烯的2个酶(SmCPS和SmKSL)，采用的技术方法为功能基因组学技术.同时，构建了合成高产丹参酮前体的酵母工程菌株，然后进行一系列生物修饰，使得次丹参酮二烯的产量达到365 mg/L.在基因表达、体外酶活性筛选指导下，发现丹参酮二烯经(CYP76AH1)基因催化转化生成铁锈醇，丰富了异源合成萜类化合物的认识，奠定了丹参酮下游相关基因发掘、微生物合成丹参酮的基础.李春苗[13]在实验室合成了1-氧次丹参酮，该化合物具有很好地抑制癌细胞的作用.实验主要针对1-氧次丹参酮的全合成进行探索，尝试了3条路线.第1条设计路线最关键的步骤是利用[4+2]反应构建A/B/C 3个环系，在尝试了很多方法后仍未拿到同时含有A/B/C 3个环系的化合物，所以设计了第2条路线.该路线中格氏反应的中间体不宜分离，且重铬酸吡啶鎓(pyridinium dichromate,PDC)氧化转位产率较低，故进行第3条路线，集第1条和第2条路线优点，以简单易得的3-甲基-2-丁酮和丙烯酸叔丁酯为原料首先合成含有角甲基的二酮化合物，再进行Suzuki交叉偶联反应、格氏反应、合环等反应得到目标产物.该路线的优点是在格氏反应后用酸处理就可以得到第2条合成路线PDC氧化转位得到的产物，简化了合成路线并提高了产率.通过生物合成技术得到丹参酮可以避免自然环境的干扰，生产较规范，时间较提取种植的药材短，质量优，产量稳定，但是距离大规模的推广生产仍有一定距离，需要科研工作者的继续努力，此外考虑到生产成本等因素，探寻高效简单的提取方法仍具有重要意义.相信随着研究的不断深入，丹参酮的分离提取以及生产合成技术必将得到进一步完善.

3药理作用

丹参酮的药理作用极其广泛，近些年在抗肿瘤方面的研究不断深入，取得显著成果，此外还具有心脑血管药理作用、天然抗氧化作用及抗菌消炎作用等.

3.1　抗肿瘤作用

近年来弓建华等[14]研究表明，隐丹参酮对肿瘤细胞有细胞毒作用，不仅能阻碍肿瘤细胞增殖，而且可以诱导肿瘤细胞分化和促进肿瘤细胞程序性死亡，从而在一定程度上阻碍肿瘤细胞侵袭和防止其向远处转移.Li等[15]使用改进的MTT法检测丹参酮对K562和Raji细胞的生长抑制作用，并用荧光显微镜和流式细胞仪评估了丹参酮诱导细胞凋亡的能力.然后采用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化.MTT实验结果显示，这些丹参酮以浓度依赖性和时间依赖的方式抑制细胞增殖.流式细胞仪分析表明，这些丹参酮以浓度依赖性的方式诱导K562凋亡，总的来说，二氢丹参酮、丹参酮I、丹参酮ⅡA和隐丹参酮对血液恶性肿瘤细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用.并且大量研究显示，总丹参酮对高转移性肺癌PGCL3细胞以及低转移人肺腺癌PAa细胞、白血病HL-60和K562细胞、人肝癌细胞株HepG2均有诱导其分化、凋亡的作用，所以丹参酮类有望成为高效低毒的新型抗肿瘤药物.

3.1.1对肿瘤细胞的杀伤作用

吴杲等[16]证实菲醌结构在丹参酮类物质中广泛存在，导致其可以产生细胞毒作用，其中DNA分子与菲环结构结合，呋喃环、醌类结构生成自由基阻碍肿瘤细胞DNA的合成.尤其是其A环(芳环)对小鼠淋巴白血病细胞具有细胞毒性，B环的1,2-邻萘醌结构也有较高的细胞毒性.杨丽萍等[17]分别采用不同浓度丹参酮ⅡA对Wistar雄性大鼠灌胃处理，得到含药血清，再用其进行胃癌细胞的培养，倒置显微镜和流式细胞仪观察结果表明，丹参酮ⅡA的含药血清使胃癌细胞在增殖过程中不进入或延迟进入S期(即DNA合成期)，停止于G0-G1期，阻碍DNA合成.

3.1.2对肿瘤细胞的诱导分化作用

丹参酮具有诱导肿瘤细胞分化的作用.郭庆寅等[18]研究了丹参酮ⅡA与全反式维甲酸(all-trans retinoid acid,ATRa)及三氧化二砷(As2O3)诱导NB4细胞分化在细胞形态学、免疫表型和对PML-RARα融合基因及其蛋白影响的比较.结果表明,丹参酮ⅡA能抑制NB4细胞生长，诱导分化，使NB4细胞PML蛋白异常分布重新定位、NBs结构恢复、PML-RARα融合蛋白降解.

3.1.3对肿瘤细胞的诱导凋亡作用

在基因调控下细胞程序化死亡(programmed cell death)的过程称为细胞凋亡(apoptosis)，即在特定生理病理情况下，维持稳定的正常细胞增殖、分化以及凋亡情况，但是癌细胞无限制增殖、分化受阻；诱导凋亡.隐丹参酮通过诱导肿瘤细胞凋亡显示了显著的抗肿瘤作用[19].Chiu等[20]研究表明通过MTT分析测定丹参酮ⅡA在A549细胞的细胞毒性，用流式细胞仪检测丹参酮ⅡA对细胞周期、细胞线粒体膜电位(MMP)、钙和A549细胞释放的活性氧(ROS)的影响.Western印迹法检测p53，Bax，Bcl-2和β-肌动蛋白在A549细胞中的蛋白表达.丹参酮ⅡA对计量和时间的依赖方式明显地抑制了A549细胞的增殖率.流式细胞仪的结果表明，当A549细胞培养在不同质量浓度的丹参酮中(对照组，2.5，5和10 g/L)48 h，亚G1期细胞增加.丹参酮ⅡA诱导活性氧的产生、钙离子和MMP的下降.Western印迹结果表明，在丹参酮ⅡA质量浓度为5 μg/mL中培养6，12和24 h后， p53和Bax蛋白表达增加，但原癌基因bcl-2显著下降.丹参酮ⅡA抑制了肺癌A549细胞的增殖，可能通过降低MMP或者Bax/Bcl-2感应率的升高诱导细胞凋亡.

3.2　对心脑血管的影响

3.2.1抗动脉粥样硬化作用

易成[21]建立家兔动脉粥样硬化模型，比较正常组、AS组及丹参酮ⅡA组动脉粥样硬化斑块形成的变化，比较各组血清脂质水平、斑块面积，免疫组化分析Bcl-2，Bax及MCP-1在粥样硬化斑块中的表达.结果：丹参酮ⅡA组血清TG水平和斑块面积比例低于AS组(P<0.01)；免疫组化显示AS组Bcl-2，Bax及MCP-1阳性细胞表达与丹参酮ⅡA组有显著性差异(P<0.05).结论：丹参酮可抑制动脉粥样硬化斑块的形成.Gao等[22]采用新兴的实验研究和临床实验已经证明，丹参酮能够防止动脉粥样硬化和心肌损伤肥大.对于动脉粥样硬化，丹参酮ⅡA能够抑制低密度脂蛋白氧化，使单核细胞粘附于血管内皮细胞，促进平滑肌细胞迁移和增殖，以及巨噬细胞中胆固醇的积累、促炎性细胞因子的表达和血小板聚集.丹参酮ⅡA具有稳定动脉粥样硬化斑块活性的潜能，其心脏保护作用主要与抗氧化和抗炎作用有关.

3.2.2抗心肌缺血缺氧

丹参酮ⅡA已被证实在心肌梗死(MI)后能够抑制miR-1，同时减少心律失常.Zhang等[23]研究证明，在结扎乳鼠左前降支前(LAD)，将丹参酮ⅡA平均每天给药，结扎之后，再持续给药3个月，并将其心肌细胞持续24 h暴露在O2与N2的混合气体条件下，来模拟体内缺血细胞.用Western Blot检测蛋白质表达，同时通过PCR定量评价 miR-1的水平.结果表明，丹参酮ⅡA能够通过改善心脏功能解除缺血损伤.此外，在缺血缺氧的心肌细胞中，丹参酮ⅡA能够抑制活化的p38 MAPK和心脏的特殊转录因子SRF与Mef2.预处理的p38 MAPK抑制剂SB203580(10 μm)，显著缓解缺氧诱导miR-1的增量，并恢复其下游Cx43蛋白的表达.实验数据表明，丹参酮ⅡA发挥作用保护心肌细胞免受缺血缺氧损伤.这种作用是通过p38 MAPK信号通路抑制miR-1的表达.这可能为缺血性心肌保护提供了新的目标.

3.2.3改善微循环，增加血流量

隐丹参酮能够改善微循环，增加血流量.Francis等[24]研究发现隐丹参酮对大鼠的冠状动脉有舒张作用，在血管平滑肌细胞中Ca2+内流被抑制，并且在介导此作用中发挥了最为关键的作用，质量浓度为30 μg/mL的隐丹参酮拮抗由Ca2+诱导的血管收缩可达59%，从而改善血液流变学.

3.2.4对脑血管的影响

VEGF及其受体(VEGFR)系统在发生脑缺血后可被低氧激活，来加强血管增生和新生血管的形成，促进受累组织供氧量及血流灌注，降低神经元凋亡率，进而缓解脑损伤程度.缺血与再灌注间大脑皮层内激素-1基因的表达被丹参酮部分抑制，这也许是在大脑局部缺血与再灌注之间形成一个保护机制.张文建等[25]通过培养纯化的主要人类大脑微血管内皮细胞(HBMVEC)建立了BBB 模型来研究丹参酮ⅡA对人体血脑屏障 (BBB)的白细胞相关缺氧复氧损伤的体外影响.结果显示，BBB 模型对HRP下丘脑调节性多肽比融合性的HUVECs有较高的TEER 和较低的渗透性.对于HRP BBB的渗透性通过缺氧复氧被加强，同时在复氧前增加活化白细胞上清液也能增强.但是在缺氧前添加丹参酮ⅡA后这样的影响被颠倒.而且，丹参酮ⅡA能够降低血清MMP-9，TNF-α，IL-1α，IL-2，IFN-γ和白细胞活性氧水平.总之丹参酮ⅡA通过减弱白细胞活化和抑制白细胞产品的损伤能够保护BBB免受白细胞相关缺氧复氧损伤.因此丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注损伤可能是一种新的治疗剂.

3.3　抗氧化作用

王昕[26]发现丹参酮ⅡA能够有效抑制细胞内脂质过氧化产物与 DNA 的相互作用.通过消除脂类自由基从而阻断脂质过氧化的链式反应来保护DNA，对DNA加成物的生成有抑制作用，进而降低其细胞毒性.心肌线粒体膜脂质过氧化途径中生成的脂类自由基，可以被丹参酮有效消除，保护了线粒体的呼吸作用.

3.4　抗菌作用

革兰氏阳性细菌能够被隐丹参酮、羟基丹参酮、丹参酸甲酯、二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡB5种丹参酮类成分显著抑制.强喆等[27-28]选用大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌等几种常见致病菌作为实验用菌种，测定总丹参酮包合物对各实验菌株的抑制效果，并采用杯碟法测定体外抑菌活性，琼脂稀释法测定最小抑菌质量浓度(MIC).结果表明，总丹参酮包合物对各实验菌株均有不同程度的抑制效果，其中金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌和停乳链球菌的抑制效果显著，此外实验将丹参总脂溶性成分的提取物制备成包合物水溶液，更大程度上发挥了丹参酮的抑菌活性，为丹参抗菌制剂的进一步开发奠定基础.

3.5　抗炎作用

唐涛等[29]选用在小鼠腹腔内的巨噬细胞系RAW264.7刺激靶细胞，采用不同剂量的丹参酮ⅡA刺激RAW264.7细胞系，于24，48 h后，采用MTT比色和半定量RT-PCR测定经过刺激处理后的细胞.结果显示，产生炎症细胞的增殖明显受到丹参酮ⅡA的抑制，半抑制浓度(IC50)为43.2 μmol/L；半定量RT-PCR检测表明，磷脂酶A2受到丹参酮ⅡA的抑制，进而缓解炎症.同时隐丹参酮也具有抗炎作用.Jiang等[30]研究指出PF2401-SF(丹参标准化质量分数)：丹参酮Ⅰ(11.5%)，丹参酮ⅡA(41.0%)，和隐丹参酮(19.1%)在体内和体外均具有潜在的抗炎作用，并证实PF2401-SF在RAW264.7细胞中对脂多糖(LPS)诱导的一氧化氮(NO)产生及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达显示出消炎效力.此外，还评估PF2401-SF能显著降低右旋糖酐诱导的大鼠急性关节炎的炎症.

4小结与展望

从药用植物中筛选药物是新药开发的主要手段之一.丹参酮是丹参的有效成分之一，除具有传统的活血调经、祛瘀止痛、养心安神功效外，近年来对其抗氧化、抗菌、抗炎、治疗心脑血管疾病、抗肿瘤等药理作用的研究日趋深入，使其拥有非常广阔的应用前景.

目前，中药药材长期粗放式种植导致产量和化学成分逐年下降，质量得不到保证，因此要保证丹参酮的产量须全面考察不同种植条件对丹参药用成分含量及品质的影响，普及中药现代化种植，并且加强对丹参提取纯化，合成制备技术的研发，以期更好地利用丹参的药理作用，建立丹参酮的系统研究.

参考文献:

[1]BI W T,TIAN M L,ROW K H,et al.Extraction and concentration of tanshinones in salviamiltiorrhizaBunge by task-specific non-ionic surfactant assistance[J].Food Chem,2011,126(4):1988.

[2]刘延上.丹参中丹参酮的提取工艺研究[D].成都:西南交通大学,2010.

LIU Yanshang.Studied on the tanshinone extraction from radixsalviaemiltiorrhizae[D].Chengdu:Southwest Jiaotong University, 2010.

[3]贺建东,付廷明,郭立玮.丹参脂溶性成分的湿式超微粉碎提取[J].时珍国医国药,2008,19(11):2690.

HE Jiandong,FU Tingming,GUO Liwei.Extraction of fat-soluble components in salvia by wet ultrafine grinding technology[J].Li Shizhen Medicine and Materia Medica Research,2008,19(11):2690.

[4]贲永光,丘泰球,李坤平,等.正交试验法优选双频复合超声提取丹参的工艺研究[J].中药材,2009,32(5):804.

[5]贲永光,杨鼎隆,钟红茂,等.超声辅助溶剂强化提取中药复方有效成分的影响因素分析[C].细胞、分子生物学、生物物理学和生物工程第一次国际会议,齐齐哈尔：2010.

BI Yongguang,YANG Dinglong,ZHONG Hongmao,et al.Analysis on affecting factors of ultrasound-assisted solvent extraction of compound Chinese traditional medicine[C].First International Conference on Cellular,Molecular Biology,Biophysics and Bioengineering,Qiqihar:2010.

[6]张力.微波辅助提取天然产物有效成分及丹参酮ⅡA分离纯化工艺研究[D].天津:天津大学,2008.

ZHANG Li.Microwave-assisted extraction of useful-components from natural product and research of technics of separation and purification of tanshinoneⅡA[D].Tianjin:Tianjin University,2008.

[7]LIV Feng,WANG D I,LIU Wei,et al.Ionic liquid-based ultrahigh pressure extraction of five tanshinones from salviamiltiorrhizaBunge[J].Sep Puri Technol,2013,110:86.

[8]SUN Ailing,ZHANG Yongqing,LI Aifeng,et al.Extraction and preparative purification of tanshinones fromsalviamiltiorrhizaBunge by high-speed counter-current chromatography[J].Chromatogr B,2011,879(21):1899.

[9]屈燚.高速逆流色谱法(HSCCC)分离丹参酮类化合物的制备研究[D].天津:天津大学,2006.

QU Yi.Salviamiltiorrhizabunge by high-speed counter current chromatography[D].Tianjin:Tianjin University,2006.

[10]高媛,闫艳,陈杜辉,等.丹参中总丹参酮的提取和纯化工艺研究[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(8):34.

GAO Yuan,YAN Yan,CHEN Duhui,et al.Study on extraction and purification process of total tanshinone fromsalviamiltiorrniza[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2011,17(8):34.

[11]杨东风.丹参酮生物合成调控机理及丹参与绒毛鼠尾草cDNA-AFLP分析研究[D].杨凌:西北农林科技大学,2012.

YANG Dongfeng.Regulation mechanism of tanshinone biosynthesis and cDNA-AFLP analysis ofSalviamiltiorrhizaandSalviacastaneaDiels f.tomentosaStib[D].Yangling:Northwest Agriculture and Forestry University,2012.

[12]吴潇湘,中药有效成分可“不种而获”[N].中国中医药报,2013-08-02(1).

[13]李春苗.1-氧次丹参酮的全合成研究[D].合肥:安徽农业大学,2013.

LI Chunmiao.Total synthesis of 1-oxomiltirone[D].Hefei:Anhui Agricultural University,2013.

[14]弓建华,陈春雷.隐丹参酮抗肿瘤作用的研究进展[J].广东医学院学报,2012,30(1):89.

[15]LI Hui,ZHANG Qing,CHU T,et al.Growth-inhibitory and apoptosis-inducing effects of tanshinones on hematological malignancy cells and their structure-activity relationship[J].Anti-Cancer Drug,2012,23(8):846.

[16]吴杲,何招兵,吴汉斌,等.丹参酮的药理作用研究进展[J].现代中西医结合杂志,2005,14(10):1382.

[17]YANG Liping.The research of tanshlnoneⅡAon the role of human gastric cancer cell [J].Med Ind Info,2006,3(11):79.

[18]郭庆寅,伍学强,刘玉峰.丹参酮ⅡA诱导NB4细胞分化与PML-RARα融合蛋白的关系[J].中国癌症杂志,2012,22(1):15.

GUO Qingyin,WU Xueqiang,LIU Yufeng.Relationship between the PML-RARα protein and the differentiation of NB4 cells induced by TanⅡA[J].China Oncology,2012,22(1):15.

[19]葛宇清,程汝滨,陈喆.隐丹参酮诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制研究进展[J].中华中医药学刊,2013,31(12):2631-2632.

GE Yuqing,CHENG Rubin,CHEN Zhen.Research progress on molecular mechanism of tumor cell apoptosis induced by cryptotanshinone[J].Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine,2013,31(12):2631-2632.

[20]CHIU T L,SU C C.TanshinoneⅡ A induces apoptosis in human lung cancer A549 cells through the induction of reactive oxygen species and decreasing the mitochondrial membrane potential[J].Med Ind Info,2010,25(2):231.

[21]易成.丹参酮抗动脉粥样硬化分子机制研究[J].海峡药学,2011,23(6):43.

[22]GAO Si,LIU Zhiping,LI Hong,et al.Cardiovascular actions and therapeutic potential of tanshinoneⅡA[J].Atherosclerosis,2012,220(1):10.

[23]ZHANG Yong,ZHANG Li,CHU Wenfeng,et.al.Tanshinone ⅡAInhibits miR-1 Expression through p38 MAPK Signal Pathway in Post-infarction Rat Cardiomyocytes[J].Cell Physiol Biochem,2010,26(6):991.

[24]FRANCIS F Y LAM,JOHN H K YEUNG,KAM M CHAN,et al. Mechanisms of the dilator action of cryptotanshinone on rat coronary Artery[J].Eur J Pharmacol,2008,578(2):253.

[25]ZHANG Wenjian,FENG Jie,ZHOU Ran,et al.TanshinoneⅡAprotects the human blood-brain barrier model from leukocyte-associated hypoxia-reoxygenation injury[J].Eur J Pharmacol,2010,64(8):146.

[26]王昕.丹参酮药理研究及临床应用进展[J].光明中医,2011,26(7):1514.

[27]强喆,李晓明,郭文柱,等.丹参酮包合物体外抑菌活性研究[J].西北农业学报,2013,22(5):202.

QIANG Zhe,LI Xiaoming,GUO Wenzhu,et al.The antimicrobial activity of total tanshinones-β-cyclodextrin in vitro.[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2013,22(5):202.

[28]强喆.丹参酮包合物制备及体外抑菌活性研究[D].兰州:甘肃农业大学,2013.

QLANG Zhe.Study on the preparation of total tanshinones-β-cyclodextrin and the antimicrobial activity in vitro[D].Lanzhou:Gansu Agricultural University,2013.

[29]唐涛,郭伟强,王珏,等.丹参酮ⅡA在RAW264.7细胞系中的抗炎症作用机制[J].生物技术通讯,2007,18(1):51.

TANG Tao,GUO Weiqiang,WANG Jue,et al.Anti-Inflammatory mechanism of the import ingredient ofsalviamiltiorrizabunge-TanshinoneⅡAin RAW264.7 cell line[J].Letters in biotechnology,2007,18(1):51.

[30]JIANG Wenyi,JEON B H,KIM Y C,et al.PF2401-SF, standardized fraction ofSalviamiltiorrhizashows anti-inflammatory activity in macrophages and acute arthritis in vivo[J].Int Immunopharmacol,2013,16(2):160.

(责任编辑：赵藏赏)