芩双颗粒中甘草酸铵含量测定方法研究

李　锁，苏　明，王光函，邹桂欣，尤献民（.辽宁中医药大学，辽宁　沈阳　00；.大连大学，辽宁　大连　6000；.辽宁省中医研究院，辽宁　沈阳　004）

芩双颗粒中甘草酸铵含量测定方法研究

李锁1，苏明2，王光函3，邹桂欣3，尤献民3
（1.辽宁中医药大学，辽宁沈阳110032；2.大连大学，辽宁大连116000；3.辽宁省中医研究院，辽宁沈阳110034）

摘要：目的：建立芩双颗粒中甘草酸铵含量的测定方法.方法：采用ZORBAX SB-Aq色谱柱(4.6 mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈（B）-0.1%磷酸水溶液（A）梯度洗脱，检测波长为237nm，流速为1.0mL•min-1，柱温为30℃.结果：甘草酸铵在0.240～1.440μg(r=0.9996)范围内线性关系良好.精密度、重现性、稳定性的RSD均小于2%，甘草酸铵的平均加样回收率分别为95.10%.结论：所采用方法可靠、准确、重现性好，可用于该制剂的含量测定及质量控制.

关键词：芩双颗粒；甘草酸铵；含量测定

芩双颗粒是中药复方制剂，是由黄芩、甘草、金银花等9种中药组成，具有清热宣肺、止咳化痰、佐以平喘之功效，主要用于治疗肺热壅肺型咳嗽、喘证.甘草为方中主药，来源于豆科（Leguminosae甘草属（Glycyrrhizin）植物乌拉尔甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）、胀果甘草（Glycyrrhiza inflate Bat.）或光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）的干燥根及根茎，具有补脾益气、祛痰止咳、清热解毒、缓急止痛、调和诸药之功效[1].甘草的主要化学成分包括甘草酸、甘草次酸、甘草黄酮、甘草甜素（亦甘草酸铵）、甘草多糖等等[2-3].现代研究表明，甘草的活性成分甘草酸铵对许多疾病有预防和治疗作用[4]，如具有肾上腺皮质激素样作用而无其副作用，抗炎抗变态明显，并有抗病毒、抗溃疡、免疫调节、保护膜结构和解痉作用[5].本文采用了HPLC法测定了芩双颗粒中甘草酸铵的含量，从而建立该制剂的质量控制标准.采用的该方法能准确测定甘草酸铵的含量，可作为作为中药复方制剂芩双颗粒的质量控制.

1　仪器和试药

Agilent 1100高效液相色谱仪（Chemstation色谱工作站，美国Agilent公司)，SK250LH超声波发生器（上海科导超声仪器有限公司)，芩双颗粒（辽宁省中医研究院自制），甘草酸铵对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110731-201013），乙腈、磷酸均为色谱纯，乙酸乙酯（沈阳禹王化波仪器有限公司），水为娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团公司），其余试剂为分析纯，所购药材经辽宁中医药大学李峰教授鉴定.

2　方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1对照品溶液的制备

精密称取甘草酸铵对照品0.9911g，置50mL容量瓶中，加乙醇制成每1mL含0.811mg的溶液，作为对照品溶液. 2.1.2供试品溶液的制备

取样品约1g（2份)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密量取70%乙醇25mL，称重，超声处理30min，放冷，称重，70%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液即得.

2.1.3阴性对照溶液

按芩双颗粒处方比例称取除甘草的其余药味各一份，按芩双颗粒颗粒的生产工艺分别制成甘草空白样品，按照上述供试品溶液的配制方法制成阴性样品溶液.

2.2色谱条件

采用ZORBAX SB-Aq色谱柱（4.6×250mm，5μm），流动相为乙腈（B）-0.1%磷酸水溶液（A）梯度洗脱，检测波长为237nm，流速为1.0mL•min-1，柱温为30℃.

表1梯度洗脱时间

2.3方法学考察

2.3.1专属性考察

分别精密吸取供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL，在“2.2”项下色谱条件下测定.结果表明：阴性对照溶液在甘草酸铵对照品相应的保留时间处无干扰，该方法专属性良好.色谱图见图1.（甘草酸铵保留时间为29.860min）

图1 A为对照品溶液、B为芩双颗粒供试液、C为阴性供试液

2.3.2线性关系考察

分别精密吸取2.0、4.0、6.0、8.0、10、15及20μL，分别注入高效液相色谱仪，测定；以甘草酸铵峰面积（y）为纵坐标、进样量（x）为横坐标，进行线性回归，得回归方程y=568.4x-6.260（r=0.9996），结果表明，甘草酸铵在0.240～1.44μg范围内，线性关系良好.

2.3.3精密度试验

取芩双颗粒（批号1），研细，精密称取4g，按“2.1.2”项下制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件连续进样6次，测得峰面积.计算，甘草酸铵面积的RSD为1.83%（n=6)，表明精密度良好.

2.3.4重现性试验

取同一批芩双颗粒，研细，精密称取4g，平行6份，按“2.1.2”项下制备供试品溶液并进行测定，计算样品中甘草酸铵含量分别为0.9217mg•g-1，RSD为1.69%.

2.3.5稳定性试验

取上述同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12h进样测定，计算，甘草酸铵RSD为1.9%.结果表明供试品溶液在12小时内稳定.

2.3.6加样回收率试验

精密称定已知含量芩双颗粒颗粒细粉约2g，平行9份，精密加入对照品溶液各1mL，按“2.1.2”项下制备供试液，按“2.2”项下的色谱条件进行测定，计算回收率.结果见表2.

结果表明芩双颗粒中甘草酸铵平均回收率为95.10%，

RSD为2.39%，说明此方法的准确性良好.

表2加样回收率实验结果

2.4样品测定

取不同芩双颗粒细粉约4g，精密称定，平行3份，按“2.1.2”项下制备供试品溶液，在“2.2”项下色谱条件测定，结果见表3.

表3甘草酸铵含量测定结果（n=3，mg•g-1）

3　讨论

3.1流动相的选择

参考《中华人民共和国药典：一部》（2010年版）甘草含量测定项下的流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液，本实验通过调整流动相比例，选用乙腈-0.1%磷酸水为流动相，结果表明甘草酸铵色谱峰与相邻杂质峰分离较好，保留时间适宜，故选用乙腈-0.1%磷酸水作为流动相.

3.2提取方法的选择

研究过程中比较了回流提取和超声提取方法，结果表明两种方法结果差别不大，超声提取法操作更为简便，因此确定使用超声法提取，同时对提取时间进行选择，超声30min可将甘草酸铵充分提取，确定提取时间为30min.

3.3测定结果分析

实验数据表明，采用HPLC法检测检测甘草酸铵含量，回收率、重现性及稳定性良好，结果准确可靠，可用于芩双颗粒的质量控制和分析.

参考文献：

〔1〕李薇，宋新波，张丽娟，等甘草中化学成分研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2012，7(14)：40-43.

〔2〕张利.甘草的药理作用及现代研究进展[J].Clinical Journal of ChineseMedicine，2014，6(10)：148-149.

〔3〕于辉，李春香，宫凌涛，等.甘草的药理作用概述[J].现代生物医学发展，2006，6(4)：77-79.

〔4〕黄惠莲，周燕双，宋丽莉，等.不同提取工艺下甘草提取物中甘草酸铵含量测定研究[J].中国现代医药，2011，33(18)：47-50.

〔5〕余会元.甘利欣治疗病毒性肺炎的治疗观察[J].中西医结合肝病杂志，1994，17(8)：40-41.

基金项目：国家科技重大专项（2010ZX09401-304）

中图分类号：R927.2

文献标识码：A

文章编号：1673-260X（2015）09-0039-02