3种细胞因子在膀胱尿路上皮癌的表达及其临床意义*

张宗显，王沈阳，刘 翠，郭永顺，高同斌，王颖慧

(1.潍坊医学院外科学教研室，山东潍坊261053；2.山东省潍坊市人民医院 261000；3.山东省泗水县柘沟中心卫生院 273200)



·论 著·

3种细胞因子在膀胱尿路上皮癌的表达及其临床意义*

张宗显1，王沈阳2△，刘 翠3，郭永顺2，高同斌2，王颖慧2

(1.潍坊医学院外科学教研室，山东潍坊261053；2.山东省潍坊市人民医院 261000；3.山东省泗水县柘沟中心卫生院 273200)

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、CD74、血管内皮生长因子(VEGF)在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组织化学方法对80例膀胱尿路上皮癌患者癌组织和15例膀胱正常组织中MIF、CD74和VEGF的蛋白表达水平进行检测，并分析其与临床病理特征和预后的关系。结果 MIF、CD74和VEGF在膀胱尿路上皮癌组织中高表达，在正常膀胱黏膜组织中无或弱表达，差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤细胞胞质内MIF、CD74和VEGF的表达与组织学分类、病理分级、临床分期均呈正相关(P<0.05 )。而且相关性分析发现，MIF与CD74在膀胱尿路上皮癌组织中的表达呈正相关(r=0.839，P<0.05)，且MIF与VEGF在膀胱尿路上皮癌组织中的表达亦呈正相关(r=0.753，P<0.05)。结论 MIF可能通过与CD74相互作用，上调VEGF表达促进肿瘤微血管生成，促进膀胱尿路上皮癌的发生发展,使其有望成为膀胱尿路上皮癌治疗的有效靶分子。

膀胱肿瘤； 尿路上皮癌； 巨噬细胞移动抑制因子； CD74； 血管内皮生长因子

膀胱尿路上皮癌是最常见的泌尿系统肿瘤且易复发及转移。虽然有关该病的诊断治疗近年取得了较大进展，但其具体发生机制目前并未完全明确。前期研究表明，导致肿瘤发生发展的病理基础是细胞因子的异常表达[1]，因此进一步研究膀胱尿路上皮癌发生发展过程中的相关基因，对确定特异性肿瘤标志物、早期诊断、了解预后因素、确定生物治疗靶标有重要意义。为了探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、CD74、血管内皮生长因子(VEGF)与膀胱尿路上皮癌的关系及临床意义，本研究采用免疫组织化学方法检测MIF、CD74 和VEGF蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中的表达，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 80份标本均取自潍坊市人民医院泌尿外科2012年10月至2014年4月行手术切除并经病理证实的膀胱尿路上皮癌组织。80份膀胱尿路上皮癌组织按世界卫生组织病理(1998)分级标准进行组织学分级：Ⅰ级23例，Ⅱ级27例，Ⅲ级30例。其中男56例，女24例，所有患者术前均未接受化疗、放疗或免疫治疗，所取标本患者年龄29～89岁，平均64岁。15份作对比的膀胱正常组织为前列腺TURP手术中所取。

1.2 材料 MIF(FL-115)兔抗人多克隆抗体、鼠抗人CD74单克隆抗体及DAB显色液购自Santa Cruz生物技术有限公司。VEGF(NAB-O243)鼠抗人单克隆抗体、S-P试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 实验方法 10%甲醛固定组织，常规石蜡包埋组织，连续切片4 μm厚，每例各备4张，分别作HE染色和免疫组化染色，采用SP免疫组织化学三步法，具体操作按说明书进行，试剂盒内已知阳性片作为阳性对照。

1.4 结果判断标准 免疫组织化学染色定量和定性分析应用尼康高级研究型显微镜(Nikon80i，Japan)盲法进行。在高倍镜下(×400)计数1 000个细胞，分别由两位经验丰富的病理科医师采用双盲法根据切片中细胞质或细胞膜中出现棕黄色颗粒为阳性判定标准，染色结果以阳性细胞数所占百分比和阳性细胞着色强度作为判断依据，独立观察后一起作出判断。标本无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞比例计分：阳性细胞数少于 25%为1分，25%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。将染色强度评分和阳性细胞百分比例评分两项指标相乘大于或等于4分为阳性表达，小于4分为阴性表达。

1.5 统计学处理 所有资料采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。计数资料比较采用χ2检验或Fisher确切概率法进行组间比较分析。相关性分析采用Spearman等级相关性分析。以α=0.05为检验水准，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 MIF、CD74、VEGF的蛋白表达与组织学分类、病理分级、临床分期的关系 在膀胱尿路上皮癌组织中MIF、CD74、VEGF三者的阳性表达明显高于膀胱正常组织，差异有统计学意义(P<0.05 )。并且在膀胱尿路上皮癌组织中三者的蛋白表达与病理分级、组织学分类、临床分期有关，表明MIF、CD74、VEGF在膀胱尿路上皮癌中的表达随着肿瘤的恶性程度增高而增强(图1及图2)，在浸润型肿瘤中表达明显高于非浸润型，差异均有统计学意义 (P<0.05)。见表1。

图1 高分化膀胱尿路上皮癌组织中MIF

临床特征nMIFCD74VEGF组织学分类正常患者151(6.67)2(13.33)2(13.33)肿瘤患者8064(80.00)66(82.50)68(85.00)病理分级高分化5036(72.00)37(74.00)38(76.00)

续表1 膀胱尿路上皮癌组织中MIF、CD74、VEGF 蛋白表达与临床特征的关系[n(%)]

注：低分化(Ⅲ期)，高分化(Ⅰ期+Ⅱ期)；浸润型(Ⅱ期+Ⅲ期+Ⅳ期)，非浸润型(Tis期+Ⅰ期 )。

图2 低分化膀胱尿路上皮癌组织中

2.2 MIF、CD74、VEGF蛋白在膀胱尿路上皮癌中表达的相关性 经Spearman非参数相关检验，结果MIF与CD74在膀胱尿路上皮癌组织中的表达呈正相关(r=0.839，P<0.05)；MIF与VEGF的表达呈正相关(r=0.753，P<0.05)。见表2、3。

表2 80例膀胱尿路上皮癌组织切片免疫组化中 MIF和CD74表达相关性

注：+表示阳性，-表示阴性。

表3 80例膀胱尿路上皮癌组织切片免疫组化中 MIF和VEGF表达相关性

注：+表示阳性，-表示阴性。

3 讨 论

MIF 是1966年Bloom等[2]首次发现由活化T淋巴细胞分泌的可抑制单核巨噬细胞移动的细胞因子。MIF在恶性肿瘤中的作用越来越受到人们重视。研究报道MIF在肝癌、 肺癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、膀胱癌及食管癌等肿瘤细胞中过度表达，提示MIF参与了多种肿瘤的发生发展过程[3-7]。CD74存在于某些上皮细胞表面，是MIF的高亲和力受体，有研究发现MIF与CD74在癌组织中共表达，两者结合可促进细胞的增殖并可调节促血管新生的趋化因子分泌，而VEGF是目前活性和专属性最强的血管生成因子,在正常组织和肿瘤组织中都发挥着强大的促血管生成作用。血管生成是恶性肿瘤发生发展及转移的关键之一,并且VEGF几乎都参与恶性肿瘤的发生发展过程[8]。在膀胱尿路上皮癌中MIF可能通过作用于其细胞表面受体CD74，使其分泌VEGF，为肿瘤的生长、侵袭、转移奠定营养基础。

本研究结果显示，在膀胱尿路上皮癌组织中MIF、CD74、VEGF蛋白均呈现高表达，与膀胱正常组织相比，差异均有统计学意义(P<0.05)，表明MIF、CD74、VEGF可能在膀胱尿路上皮癌的发生发展过程中发挥重要作用。MIF在膀胱尿路上皮癌低分化肿瘤中表达明显高于高分化肿瘤，其表达量与膀胱尿路上皮癌恶性度呈正相关，说明其促进肿瘤细胞的侵袭和转移。虽然MIF促进膀胱尿路上皮癌发生和转移的作用机制仍不完全清楚，但推测可能与其受体CD74结合形成复合物有关[9]。作为组织相容性抗原重要分子伴侣CD74，不仅在抗原递呈细胞表达[10]，还在上皮细胞如膀胱上皮细胞中高表达，并与肿瘤的发生有关。一般认为CD74 作为MIF 的受体，二者的结合能够激活促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路，刺激细胞增殖。本研究结果也提示MIF和CD74在膀胱尿路上皮癌组织中的表达呈正相关，提示与CD74分子结合可能是MIF在膀胱尿路上皮癌中发挥作用所必需的一个步骤，从而使肿瘤细胞无限制地增长、增殖。

肿瘤细胞可自分泌或旁分泌VEGF，促进血管的构建，为肿瘤的生长、浸润和转移奠定基础，从而促使癌细胞迅速增长[11-12]。VEGF具有较强的血管渗透作用，可引起血浆蛋白及纤维蛋白外渗，随着血管内皮细胞的迁移和增殖，最终形成新的基质和血管。本研究结果表明MIF和 VEGF在膀胱尿路上皮癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织，且呈正相关关系，提示MIF可能通过上调VEGF表达，刺激肿瘤新生血管形成，为肿瘤细胞生长提供了丰富的血液，从而促进膀胱尿路上皮癌的浸润和转移。

本研究表明MIF、CD74、VEGF三者在膀胱尿路上皮癌组织中表达增高，且呈正相关协同一致性，MIF可能通过上调CD74及VEGF的表达促进膀胱尿路上皮癌的进展，但其确切机制有待进一步研究。深入探究这些基因可为膀胱尿路上皮癌的诊断、治疗方案的选择及预后判断提供重要的实验依据。

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The expression and clinical significance of cytokines in urothelial cell carcinoma of bladder*

ZHANGZong-xian1，WANGShen-yang2△，LIUCui3，GUOYong-shun2,GAOTong-bin2,WANGYing-hui2

(1.Teaching-researchOfficeofSurgery,WeifangMedicalUniversity，Weifang,Shandong261053，China；2.People′sHospitalofWeifang,Weifang,Shandong261000，China；3.ZhegouTownHospitalofSishuiCounty,Weifang,Shandong273200，China)

Objective To investigate the expressions and clinical significance of macrophage migration inhibitory factor (MIF),CD74 and vascular endothelial growth factor (VEGF) in the urothelial cell carcinoma of bladder.Methods The expressions of MIF,CD74 and VEGF in 80 samples of urothelial cell carcinoma bladder tissues and 15 samples of normal bladder tissues were detected by immunohistochemistry method,and the relationships between these indicators with clinicopathological features and prognosis were analyzed.Results The expressions of MIF,CD74 and VEGF in the bladder urothelial cell carcinoma tissues elevated significantly compared with those of the normal bladder tissues,the differences were significant (P<0.05).The expressions of MIF,CD74 and VEGF in the tumor cell plasma were positively related with the histological classification,pathological grade and clinical stages (P<0.05).The correlation analysis showed that the expression of MIF was positively related with CD74 and VEGF in the bladder urothelial cell carcinoma tissues (r=0.839;r=0.753,P<0.05).Conclusion MIF might interact with CD74 to upregulate the expression of VEGF,promote the angiogenesis and involved in the tumor development and progression,MIF might be an effective molecular target in the treatment of urothelial cell carcinoma of the urinary bladder.

urothelial cell carcinoma； bladder neoplasms； macrophage migration inhibitory factor； CD74； vascular endothelial growth factor

山东省潍坊市科学技术发展计划资助项目(第20121159号)。

张宗显，男，在读研究生，主要从事泌尿外科的临床研究。△

,E-mail：1035187938@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.04.010

A

1672-9455(2015)04-0457-03

2014-07-29

2014-10-28)