PMA及PNA在预测2型糖尿病并发肾病变中的实用价值*

孟凡萍,郝 坡,王长本,杜红心

(1.重庆三峡中心医院检验科 404000;2.重庆三峡医药高等专科学校医学技术系 404020)



·论 著·

PMA及PNA在预测2型糖尿病并发肾病变中的实用价值*

孟凡萍1,郝 坡2,王长本1,杜红心1

(1.重庆三峡中心医院检验科 404000;2.重庆三峡医药高等专科学校医学技术系 404020)

目的 探讨血小板-中性粒细胞聚集体(PNA)、血小板-单核细胞聚集体(PMA)检测在预测2型糖尿病并发症中的实用价值。方法 应用流式细胞仪检测2型糖尿病并发肾病变患者血浆的PMA、PNA，并以无并发症的2型糖尿病患者和健康人作为对照，比较上述三组PMA、PNA的水平，用ROC曲线评价此试验的临床应用价值。结果 2型糖尿病并发肾病变组PMA、PNA水平显著高于无并发症组，而后者又显著高于健康对照。ROC曲线显示，PMA对2型糖尿病患者并发肾病变诊断临界值灵敏度为96.7%，特异性为100.0%，截断点为40.12%；PNA灵敏度为96.7%，特异性为88.3%，截断点为26.98%，可见PMA优于PNA。曲线下面积分别为0.986和0.963。结论 PMA、PNA可以预测2型糖尿病肾病变，应用流式细胞法检测其灵敏度和特异性均较满意，PMA特异性优于PNA。

2型糖尿病； 血小板-中性粒细胞聚集体； 血小板-单核细胞聚集体； ROC曲线

2型糖尿病(T2DM)及其并发症严重危害人类健康，其血糖的异常同时也参与了血小板和白细胞的功能紊乱。有研究表明，血糖升高患者体内的血小板-白细胞聚集体(PLA)数目有明显的增加，同时还发现，应用胰岛素治疗的2型糖尿病患者，胰岛素并不能明显地抑制活化的血小板膜表面P-选择素(CD62P)的表达，同样也不能抑制纤维蛋白原与单个血小板之间的连接，相反，胰岛素还会增加PLA的形成概率。这就意味着PLA也同晚期糖化终末产物(AGE)一样，将可能成为预测2型糖尿病并发症进程的指标。本研究通过对2型糖尿病患者PLA的检测，评价其在并发症进程中的预警作用，以指导2型糖尿病并发症的诊断和治疗。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年3月至2014年1月所有住院及门诊60例临床确诊的2型糖尿病患者，年龄41～65岁，其中30例确诊已发生肾病变，另外30例无并发症产生。另选择相同年龄段的30例健康体检人群作为健康对照。

1.2 实验仪器和试剂 流式细胞仪及配套的试剂(CD15，CD14，CD45，CD41a)均购自美国BD公司。

1.3 方法 陆续搜集30例临床确诊的2型糖尿病并发肾病变的患者和30例无并发症的2型糖尿病患者，在静息状态下空腹抽血，EDTA抗凝，在流式细胞仪上及时检测。另外30例健康对照者，同样条件抽血、抗凝、检测。用CD45/SSP设门圈出白细胞，再用CD15/CD41a检测血小板-中性粒细胞聚集体(PNA)，用CD14/CD41a检测血小板-单核细胞聚集体(PMA)，3个组比较，并用ROC曲线通过PNA和PMA的特异性、灵敏度及曲线下面积，评价其临床实用价值。

2 结 果

2.1 用流式细胞仪检测PMA和PNA的结果 2型糖尿病并发肾病变组PNA和PMA均高于无并发症组，差异有统计学意义(P<0.05)，2型糖尿病两组的PNA和PMA都高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 血小板-白细胞聚集体检测结果±s，%)

注：与2型糖尿病无并发症组比较，*P<0.01；与健康对照组比较，△P<0.01。

2.2 ROC曲线评价 PMA和PNA对于2型糖尿病有无并发肾病变的结果见图1。由图1可知，PMA对2型糖尿病患者并发肾病变诊断临界值灵敏度为96.7%，特异性为100.0%，截断点为40.12%；PNA灵敏度为96.7%，特异性为88.3%，截断点为26.98%，可见PMA优于PNA。曲线下面积分别为0.986和0.963。见表2。

图1 PMA和PNA评价2型糖尿病并发肾病变的ROC曲线

检验结果变量面积灵敏度特异性渐近95%置信区间下限上限PNA0.9630.9670.8830.9221.000PMA0.9860.9671.0000.0001.000

3 讨 论

在某些病理状态下，血小板和白细胞活化后，其表面的黏附分子表达增加，黏附分子可通过配体间相互结合和(或)纤维蛋白原作为桥接作用形成PLA。

血小板活化后，膜表面的CD62P和糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa的表达增加。CD62P是一种跨膜糖蛋白，主要存在于活化血小板的α颗粒中和内皮细胞的Weibel-Palade小体(WPB)中，伴随着血小板的活化，CD62P迅速定位于活化的血小板膜上。CD62P糖蛋白受体-1(PSGL-1)，也是一种跨膜糖蛋白，其作为CD62P的结合配体，几乎表达于所有白细胞的表面。 体内外实验已经证实，PSGL-1是唯一与CD62P具有高亲和力的配体，且抗PSGL-1单克隆抗体可以完全阻断血流状态下白细胞在表达CD62P的细胞上的滚动以及静止状态下白细胞与表达CD62P的细胞的黏附。活化的血小板可以通过表面的CD62P和白细胞表面的PSGL-1结合形成PLA。此外，血小板表面的GPⅡb/Ⅲa和白细胞表面的黏附受体Mac-1(CD11b/CD18)在纤维蛋白原的桥接作用下形成PLA[1]。

已有临床研究表明，与CD62P相比，PLA尤其是PMA评价血小板活化更加敏感，PMA目前已经成为临床上急性冠状动脉综合征和冠状动脉介入手术抗血小板治疗的新兴研究靶点[2]。在2型糖尿病病程进展中，有研究表明，血糖升高患者体内PLA的数目有明显的增加[3]，且其可促进机体炎症状态的形成[4-8]、组织因子的释放[9-10]，同时还发现，胰岛素治疗的2型糖尿病患者，胰岛素并不能明显地抑制PLA的形成，相反会促进其发展。这就意味着PLA将可能成为预测2型糖尿病并发症进程的指标。

本研究就是对2型糖尿病并发肾病变患者的PNA、PMA水平进行检测，并用ROC曲线评价二者作为预测2型糖尿病并发症指标的临床应用价值。结果显示，2型糖尿病并发肾病变组PNA、PMA水平显著高于无并发症组，而后者又显著高于健康对照组。ROC曲线显示，PMA对2型糖尿病患者并发肾病变诊断临界值为灵敏度96.7%，特异性为100%，截断点为40.12%，PNA灵敏度为96.7%，特异性为88.3%，截断点为26.98%，可见PMA优于PNA。曲线下面积分别为0.986和0.963。统计学表明，PNA、PMA可以预测2型糖尿病并发肾病变，且PMA更满意。

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Practical value of PMA and PNA for predicting complicating nephropathy in type 2 diabetes mellitus*

MENGFan-ping1,HAOPo2,WANGChang-ben1,DuHong-xin1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingThreeGorgesCentralHospital,Chongqing404000,China; 2.DepartmentofMedicalTechnique,ChongqingThreeGorgesMedicalCollege,Chongqing404020,China)

Objective To evaluate the practical value of the platelet-monocyte aggregates(PMA) and platelet-neutrophils aggregates(PNA) detection in predicting the complications of type 2 diabetes mellitus(T2DM).Methods Plasma PMA and PNA were detected in 90 cases of T2DM complicating nephropathy,30 cases of T2DM without complications and 30 healthy persons as the control.The PMA and PNA levels were compared among 3 groups and the clinical application value of this experiment was evaluated by the ROC curves.Results The plasma PMA and PNA levels in the T2DM complicating nephropathy were significantly higher than that in the T2DM without complications group,and which in the latter were significantly higher than those in the healthy controls.The ROC curves indicated that the critical values of PMA for diagnosing T2DM complicating nephropathy were the sensitivity of 96.7%,specificity of 100.0% and cut off point of 40.12%,which of PNA were the sensitivity of 96.7%,specificity of 88.3% and cut off point of 26.98%,showing that PMA was superior to PNA.The area under the curve(AUC) was 0.986 and 0.963 respectively.Conclusion PMA and PNA can be used to predict the complicating renal lesion inT2DM,the sensitivity and specificity by using the flow cytometry for detecting PNA and PMA are more satisfactory,but the specificity of PMA is better than that of PNA.

PMA; PNA; type 2 diabetes mellitus; ROC curves

重庆市卫生局医学科研计划项目(2011-2-414)；重庆市万州区科技计划项目(201203061)。

孟凡萍，女，主管检验师，在读博士，主要从事脂代谢和2型糖尿病并发症方面研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.010

A

1672-9455(2015)02-0164-02

2014-03-27

2014-10-06)