肾移植术后T淋巴细胞亚群和NK细胞百分比参考范围的研究*

魏 丽,刁宏燕,吴 炜,汪超军，李兰娟

(浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室/



·论 著·

肾移植术后T淋巴细胞亚群和NK细胞百分比参考范围的研究*

魏 丽,刁宏燕,吴 炜,汪超军△，李兰娟

(浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室/

感染性疾病诊治协同创新中心,杭州 310003)

目的 初步建立肾移植患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的百分比参考范围。方法 67例健康对照组、169例肾移植患者于肾移植手术后1周清晨采集外周血，用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群和NK细胞百分比。同时按年龄段划分为3组进行统计：≤30岁(青年组)、31～49岁(中年组)、≥50岁(老年组)。结果 (1)建立了肾移植术后T淋巴细胞亚群和NK 细胞百分比的参考范围：CD3+56.80%～64.54%；CD4+30.82%～36.43%；CD8+23.45%～27.32%；CD3+CD4+/CD3+CD8+1.35～1.68； NK 6.04%～8.35%。(2)肾移植术后不同性别间的T 淋巴细胞亚群和NK细胞差异无统计学意义(P>0.05)。(3)肾移植术后不同年龄间的T 淋巴细胞亚群和NK细胞差异有统计学意义(P<0.05)：与老年组比较，青年组和中年组肾移植术后CD8+细胞百分比明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)，CD3+CD4+/CD3+CD8+明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)。结论 初步建立了肾移植术后的T淋巴细胞亚群和NK 细胞的参考范围，同时发现肾移植术后随年龄增长CD8+细胞百分比降低，而CD3+CD4+/CD3+CD8+升高。

肾移植； 术后； T淋巴细胞亚群； 参考范围

肾移植是治疗中末期肾病的有效手段，而移植后的机体免疫状态对移植肾的功能影响很大，目前尚无有效的评估技术。T淋巴细胞亚群和NK细胞作为临床判断患者状态的一个敏感指标，对临床治疗具有重要意义。肾移植术后的免疫状态与健康人不同，而目前尚无肾移植术后T淋巴细胞亚群和NK细胞的参考标准，本文旨在探讨肾移植患者术后淋巴细胞亚群和NK细胞的参考范围和不同年龄组的细胞免疫状况，以期为临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 全部肾移植病例为2013年1～12月在本院肾内科住院患者，均为首次尸体肾移植受者，共169例，其中男114例，女55例，年龄10～66岁。年龄段划分：≤30岁(青年组)52例、31～49岁(中年组)83例、≥50岁(老年组)34例。所有研究病例均于术后采用骁悉、FK506、强的松三联抗排异治疗，均于接受肾移植术后1周康复出院。健康对照组67例，其中男34例，女33例，均为体检健康的人员，年龄10～68岁。

1.2 方法 肾移植手术后1周清晨采取静脉血2 mL(乙二胺四乙酸抗凝)并立即检测。采用三色流式细胞术对T淋巴细胞亚群和NK细胞进行分析检测[1]。其中，检测T淋巴细胞亚群抗体采用PerCP标记小鼠抗人CD3、FITC标记小鼠抗人CD4、PE标记小鼠抗人CD8单克隆抗体，检测NK细胞(CD3+CD16/56+)抗体采用FITC标记小鼠抗人CD3，PE标记小鼠抗人CD16/56单克隆抗体。T淋巴细胞亚群抗体为美国BD公司产品，NK细胞(CD3+CD16/56+)为美国Beckman Coulter公司产品，仪器为美国Beckman Coulter FC500型流式细胞仪。

1.3 统计学处理 应用统计软件SPSS17.0对数据进行统计分析，经检验淋巴细胞亚群和NK细胞百分比符合正态分布，以均数、95%建立淋巴细胞亚群和NK细胞的正常参考范围，不同性别间淋巴细胞亚群和NK细胞的比较采用独立标本t检验，各年龄组淋巴细胞亚群和NK细胞组间比较采用单因素方差检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同性别肾移植患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞的差别无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同性别肾移植患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞数据的构成 ±s)

2.2 肾移植患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞的正常参考范围，见表2。

2.3 各年龄组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞数据的分布，见表3。由表3可见，与老年组比较，青年组和中年组肾移植术后CD8+细胞百分比明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)，CD3+CD4+/CD3+CD8+明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)；与健康对照组比较，肾移植患者CD3+细胞百分比、CD8+细胞百分比、NK细胞百分比明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)。

表2 肾移植患者T淋巴细胞亚群、NK细胞的正常参考范围

表3 各年龄组外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞数据的比较 ±s)

注：与老年组比较，*P<0.05，**P<0.01；与健康对照组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

3 讨 论

T淋巴细胞是参与细胞免疫和免疫调控的枢纽，T淋巴细胞亚群的动态平衡是维持机体免疫自稳的重要因素[2]。同时T淋巴细胞亚群的变化反映了人体细胞免疫功能的改变，应用流式细胞术能快速、准确地检测淋巴细胞亚群，并及时、准确地判断病情，评价治疗效果[3-5]。NK细胞具有抗肿瘤，抗病毒感染，抗器官移植，参与T淋巴细胞、B淋巴细胞的调节及其免疫调节的功能。NK细胞通过受体作用维持平衡、发挥杀伤效应[6-7]。

同时，人体免疫状态中年龄也是一重要因素[8]，有报道儿童外周血T淋巴细胞高于成人[9]，本文研究亦发现肾移植术后CD3+CD8+细胞百分比随年龄的增长呈下降趋势。青年组、中年组CD3+CD8+细胞百分比明显高于老年组，提示肾移植年轻患者细胞免疫功能活跃，老年患者机体本身免疫低下，细胞免疫反应降低。

本文研究发现，与健康对照组比较，肾移植患者CD3+细胞百分比、CD8+细胞百分比、NK细胞百分比明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)，可见以健康人的标准难以准确评估肾移植患者术后的免疫状态。本文在此基础上建立了肾移植术后的参考范围：CD3+56.80%～64.54%，CD4+30.82%～36.43%，CD8+23.45%～27.32%，CD3+CD4+/CD3+CD8+1.35～1.68，NK 6.04%～8.35%，以期为临床诊断和治疗提供更准确的参考。

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Study on reference values of T-lymphocyte subsets and NK cell percentage after renal transplant operation*

WEILi,DIAOHong-yan,WUWei,WANGChao-jun△,LILan-juan

(StateKeyLaboratoryforDiagnosisandTreatmentofInfectiousDisease,FirstAffiliatedHospital,CollegeofMedicine,ZhejiangUniversity/CollaborativeInnovationCenterforDiagnosisandTreatmentofInfectiousDiseases,Hangzhou,Zhejiang310003,China)

Objective To preliminarily establish the reference values of peripheral blood T-lymphocyte subsets and NK cell percentage in renal transplant patients.Methods Peripheral blood was collected from 67 cases of control and 169 cases of renal transplant in the early morning at postoperative 1 week.T-lymphocyte subsets and NK cell percentage were detected by the flow cytometry.169 patients with renal transplant were divided into three groups according to age section for conducting statistics:≤30 years old(youth group),31-49 years old(middle age group) and ≥50 years old(older age group).Results (1)The reference values of T-lymphocyte subsets and NK cell percentage were established:CD3+:56.80%-64.54%;CD4+:30.82%-36.43%;CD8+:23.45%-27.32%;CD3+CD4+/CD3+CD8+:1.35%-1.68%;NK:6.04%-8.35%.(2) T-lymphocyte subsets and NK cell percentage showed no statistical differences between genders(P>0.05).(3) T-lymphocyte subsets and NK cell percentage showed statistical differences among different ages(P<0.05).Compared with the older age group,the level of CD8+in the youth group and the middle age group was significantly increased,while CD3+CD4+/ CD3+CD8+was significantly decreased(P<0.01).Conclusion The reference values of T lymphocyte subsets and NK cell percentage in renal transplant patients are preliminarily established.Meanwhile it is found that the level of CD8+is decreased with the age increase after renal transplant,while CD3+CD4+/CD3+CD8+is increased.

renal transplantation; postoperation; T-lymphocyte subsets; reference values

浙江省钱江人才计划资助项目(2012R10G2010210)。

魏丽，女，实验员，硕士，主要从事临床流式检测工作。△

，E-mail:wangchaojundf@hotmail.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.006

A

1672-9455(2015)02-0155-02

2014-06-05

2014-11-13)