间歇性变应性鼻炎患者外周血调节性T细胞和白细胞介素17的变化

李保卫，石小伟，吴 玮＊，徐冰心，丁瑞英，范日升

（1.中国人民解放军第306医院耳鼻咽喉头颈外科，北京100101；2.福建医科大学第二附属医院耳鼻咽喉科，

福建 泉州362000；3.中国人民解放军第306医院中心实验室，北京100101；4.中国人民解放军63710部队卫生处，山西 忻州136200）

变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是发生在鼻腔黏膜的变态反应性疾病，对患者生活质量有严重影响。关于AR发病的免疫机制目前尚未完全明确。调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）和辅助性T细胞17（T help cell 17，Th17）是近年发现的新的CD4＋T细胞亚群，前者因细胞表面表达白细胞介素2受体α链（即 CD25），被命名为 Treg［1］。有研究发现，CD4＋CD25＋调节性T细胞可能与哮喘发病相关［2］，但其与AR的关系仍不明确。CD4＋CD25＋调节性T细胞的特异性转录因子是叉头／翼状螺旋转录因子3（forkhead box protein-3，Foxp3）［3］。Th17 以 产 生 的 白 细 胞 介 素 17（interleukin-17，IL-17）为其特征性因子［4］。目前研究表明，Th17细胞亚群可能在炎症、自身免疫性疾病和肿瘤中发挥重要的调节作用［5］。本研究通过观察间歇性变应性鼻炎（intermittent allergic rhinitis，IAR）患者间歇期、发作期前（发作期前2周）、发作期及对照组外周血中Treg和IL-17的变化，探讨二者在IAR发病中的作用。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年3—11月我军某部某基地资料完整的IAR患者19例，男性18例，女性1例，年龄22～48岁，平均（32.5±6.4）岁，均符合 AR诊断标准［6］；另选择同期当地志愿者为对照组共27例，男性20例，女性7例，年龄22～33岁，平均（26.5±3.8）岁。对所有研究对象进行详细的病史采集以及专科查体，并进行皮肤点刺试验，排除哮喘和特异性皮炎等其他变态反应性疾病、鼻息肉等鼻部疾病以及全身其他疾病，且患者2周内未使用皮质激素或抗组胺药。患者及对照组均征得本人同意，并签署知情同意书。

1.2 试剂和仪器 试剂：变应原点刺试剂（阿罗格）；小鼠抗人CD4-FITC单克隆抗体、小鼠抗人CD4-APC单克隆抗体、小鼠抗人CD25-APC单克隆抗体、小鼠抗人IL-17A-PE单克隆抗体（美国BD公司）；小鼠抗人Foxp3-PE单克隆抗体、大鼠抗人IgG2α-PE、固定／破膜浓缩剂、固定／破膜稀释液、破膜稀释用BUFFER（E-Biosciences公司）。仪器：流式细胞仪（美国BD公司）；二氧化碳培养箱（美国Forma scientific公司）；离心机（德国KENDRO公司）；涡旋混匀器（IKA公司）。

1.3 实验方法 分别在间歇期、发作期前及发作期3个阶段于清晨空腹采取静脉血2mL，对照组同样条件下一次性分别各采取静脉血2mL，肝素钠抗凝，放置于4℃环境，4h内检测。检测前先配制稀释破膜液与缓冲液，在流式管中加入100μL外周全血及CD4-FITC 10μL及CD25-APC 2.5μL，室温避光15min后加稀释破膜液1mL／管，混匀后4℃避光30min。离心后弃上清，每管中加入缓冲液1.5mL洗涤，分别加入2.5μL FOXP3-PE、5μL IL-17A-PE标记的抗体后4℃下避光30min。再次洗涤后予PBS稀释，用4%多聚甲醛固定。混匀后4℃避光保存，上流式细胞仪。用BD FACSDiva软件分析数据，结果以CD4＋CD25＋Foxp3＋T淋巴细胞、CD4＋IL-17＋T淋巴细胞在CD4＋T淋巴细胞中的百分比表示。

1.4 统计学方法 应用SPSS13.0统计学软件进行数据分析，计量资料以±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用q检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

IAR患者外周血中Treg和IL-17占外周血中CD4＋T淋巴细胞的比例从间歇期至发作期逐步升高。IAR患者Treg均低于对照组（P＜0.05），间歇期、发作前期、发作期间Treg虽呈增高趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。IL-17在间歇期低于对照组（P＜0.05），在发作期高于对照组（P＜0.05），从间歇期、发作期前至发作期IL-17明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。Treg／Th17从间歇期至发作期下降，间歇期与对照组差异有统计学意义（P＜0.05），但发作期前、发作期与对照组差异均无统计学意义（P＞0.05），Treg／Th17发作期前、发作期与间歇期相比下降明显，差异有统计学意义（P＜0.05），发作期较发作期前亦下降，但差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 变应性鼻炎患者不同时期外周血中的Treg、IL-17比较Table 1 Changes of CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg and IL-17at different periods in peripheral blood of patients with intermittent allergic rhinitis(±s）

表1 变应性鼻炎患者不同时期外周血中的Treg、IL-17比较Table 1 Changes of CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg and IL-17at different periods in peripheral blood of patients with intermittent allergic rhinitis(±s）

＊P＜0.05与对照组比较 ＃P＜0.05与IAR间歇期比较 ☆P＜0.05与IAR发作期前比较（q检验）

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3 讨 论

AR是指特应性个体在接触特异性变应原后发生的主要由IgE介导的组织胺、白三烯等引起的炎性介质的释放，并有多种免疫活性细胞和细胞因子参与的鼻黏膜炎症性疾病。目前的研究认为Thl细胞与Th2细胞的免疫失衡促进AR的发生，向Th2细胞过度分化是导致AR的重要原因［7］。Treg细胞对二者均有抑制作用。Treg来源于CD4＋T细胞，占其比例的5%～10%，并且持续高表达IL-2受体α链（CD25），被称为CD4＋CD25＋T细胞亚群，其数量的减少、表面分子表达的缺陷、抑制功能受损，均可能导致自身免疫性疾病的发生。Th17细胞作为一种新的辅助性T细胞亚群，产生的最重要的效应因子是IL-17，可与人IL-17R结合而发挥效应。目前的文献报道多认为IL-17为前炎症因子，可能对变应性炎症的发病起促进作用［8-10］。当机体处于不同的状态时，Th17细胞与调节性T细胞之间能够相互作用，以维持机体状态的平衡。在AR的发病中，调节性T细胞与Th17细胞的作用及其作用机制仍未完全明确。

目前Treg与AR关系的研究较多。Lee等［11］研究发现AR患者Foxp3mRNA较对照组表达下降。而 Han等［12］研究表明，与对照相比，CD4＋CD25＋调节性T细胞的表达在持续性AR患者体内无变化。另有研究发现，AR患者在经过特异性免疫治疗后体内Foxp3＋调节性T细胞的数量上升［13］。由此可见，Treg在AR中的作用仍不明确。本研究结果显示，IAR患者无论发病与否，体内CD4＋CD25＋Foxp3＋T淋巴细胞水平均较对照组有所下降。表明Treg数量不足，AR的发病可能与Treg数量下降有关。有研究发现，在空气中花粉含量高的季节，过敏性疾病患者体内Treg的抑制活性丧失，促进过敏性疾病的急性发作和发展，而没有花粉的季节里，不论是否患过敏性疾病，体内Treg都能发挥其免疫调节作用，从而抑制Th2细胞因子的产生［10］。而Treg的下调，可能打破Th1／Th2的平衡，表现为Th2功能增强。本研究结果显示，在IAR的不同时期，体内CD4＋CD25＋Foxp3＋T淋巴细胞水平不同，发作期明显升高。这表明AR患者体内的Treg存在缺陷，而且该细胞亚群的缺陷可能是特应性体质的特征，或者与机体的疾病状态或者说过敏症状无关。

目前关于IL-17在AR中的表达尚存在争议。Ciprandi等［14］首先检测了桦树过敏的AR患者血清中IL-17水平较对照组升高，进行舌下含服免疫治疗后，症状最严重的AR患者尚能检测到IL-17。Lu等［15］研究发现，AR患者鼻黏膜和外周血中RORγtmRNA的相对表达量及IL-17水平高于对照组，且与鼻过敏症状评分呈正相关。Qu等［16］研究发现，AR患者的外周血单个核细胞中的Th17比例、RORγtmRNA表达水平较对照组升高，细胞因子IL-17、IL-6及IL-23亦较对照组增加，经1年特异性免疫治疗后上述检测指标有所下降。而Klemens等［17］将AR与病毒性鼻炎对比研究中发现，只有后者鼻腔分泌物中的IL-17表达水平升高。本研究结果显示，IAR患者分别处于间歇期、发作期前及发作期时，IL-17表达呈逐渐增高的趋势。可能特应性个体在与外界变应原接触后体内IL-17的释放增加，IL-17作为前炎症因子，与受体结合后促进相关炎症因子释放，对AR的发病起了促进作用，而在间歇期，缺少变应原刺激，Th17分化减弱，IL-17表达亦下调，患者的过敏症状则明显缓解。

在对Treg／Th17的研究中，张成等［18］发现，与健康对照组相比较，中重度持续性AR患者，Foxp3mRNA以及血浆TGF-beta水平显著降低，维甲酸相关孤儿受体γt及血浆IL-17水平显著升高，这反映了AR患者体内Treg／Th17失衡的存在［19］。本研究结果显示，在IAR患者外周血中，Treg／Th17在间歇期、发作期前、发作期呈现逐渐下降的趋势，这也同样反映出Treg／Th17的不平衡。但考虑到本研究样本例数不多，IAR患者不同阶段外周血中Treg／Th17是否失衡，尚待进一步研究确认。

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