黔产蓝布正基于总多酚含量的干燥方法研究



技术与方法

黔产蓝布正基于总多酚含量的干燥方法研究

张建永1，杨晓伟1，段灿灿1，聂绪强1，裴 显1，周清娣2

(1.遵义医学院 药学院,贵州 遵义563099；2.悉尼大学 化学学院，NSW2006澳大利亚)

[摘要]目的 黔产蓝布正基于总多酚含量干燥方法的优选。方法 建立紫外分光光度测定蓝布正总多酚含量的方法，比较烘干法、晾干法及阴干法干燥对蓝布正总多酚含量的影响。结果 建立的方法准确、快速、重复性好。第1批蓝布正经烘干法处理的总多酚含量明显高于晾干法(6.53%vs. 5.84%)，与阴干法(6.58%)相当；第2批蓝布正经烘干法处理的总多酚含量也明显高于晾干法(5.76%vs. 5.37%)，与阴干法相当(5.70%)；同时两批烘干法的干燥时间少于晾干法、阴干法(19 hvs. 5 d, 5 d)。结论 烘干法可作为传统方法的替代方法，为蓝布正产地加工提供实验依据。

[关键词]蓝布正；干燥方法；总多酚；含量测定

蓝布正为蔷薇科植物路边青GeumaleppicumJacq.或柔毛路边青GeumjaponicumThunb.var.chineseF.bolle的干燥全草，亦被称为水杨梅，追风七，头晕药等[1]。贵州分布的多为柔毛路边青，据本草记载，蓝布正具益气健脾，补血养阴等功效，用于气血不足，脾虚带下等[2]。现代研究表明蓝布正含有的化学成分为鞣质多酚类、黄酮类、苯丙素类、三萜类化合物、挥发油类、氨基酸类和无机元素等[3-4]，其中多酚类化合物是其重要活性成分。没食子酸是2010版《中国药典》用于蓝布正质量控制的指标成分。目前蓝布正的干燥方式多采用晾干法和阴干法，然而贵州省的亚热带高原季风湿润气候易使药材发霉变质，同时多酚类化合物在湿热和强光环境中易被氧化，具有不稳定性，因此是否可采用其他干燥方法取代之尚不清楚，亦未见基于蓝布正中多酚类成分的含量比较不同干燥方法的实验报道。本文采用烘干、晾干、阴干三种方法对蓝布正进行干燥，通过比较总多酚含量优选蓝布正的干燥方法，为蓝布正的产地加工提供实验参考。

1材料与试剂

1.1仪器101-4型电热鼓风恒温干燥箱，上海市崇明实验仪器厂；DHG-9123A 型电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司；FW177 型中药材粉碎机，天津泰斯特仪器有限公司；TU-1901 型双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；电热恒温水浴锅，中国上海科试实验制造厂；KQ-500DE 型数控超声清洗器，江苏昆山超声仪器厂；80-2B 型离心机，上海安亭科学仪器厂。

1.2试药没食子酸(批号：110831-201204)，中国食品药品检定研究院；蓝布正药材2批次为2013年10～11月份采自贵州省遵义县枫香镇，均经遵义医学院药学院生药学教研室杨建文主任鉴定为柔毛路边青(GeumjaponicumThunb.var.chineseF.bolle)的全草，凭证标本保存于遵义医学院药学院。硫酸亚铁、酒石酸钾钠、十二水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾及乙醇等均为分析纯，国药化学试剂有限公司；水为双蒸水。

2方法

2.1干燥方法

2.1.1 蓝布正药材的预处理将采收来的蓝布正用清水洗净泥土，甩干水分后将其茎剪为5 mm左右，以备干燥用。药材随机用于晾干法、阴干法和烘箱干燥法。

2.1.2自然晾干法 将预处理的蓝布正置于报纸上，放于室外阳光充足处进行晾晒干燥，在晾晒的过程不时翻动，加快干燥速度，干燥后立即放入自封袋内，标号，置于干燥器内保存。

2.1.3自然阴干法将预处理的蓝布正置于报纸上，放于室内阴凉通风处进行阴干干燥，在干燥的过程不时翻动，加快干燥速度，干燥后立即放入自封袋内，标号，置于干燥器内保存。

2.1.4烘箱干燥法 将预处理的蓝布正置于报纸上，放于烘箱内，为防止温度过高影响有效成分分解，控温40～45 ℃，鼓风干燥，在干燥的过程不时翻动，加快干燥速度，干燥后立即放入自封袋内，标号，置于干燥器内保存。

2.1.5干燥终点和水分测定方法干燥终点依据2010版《中国药典》一部中规定的蓝布正含水量应少于11%，测定方法采用药典规定的第一法(烘干法)。

2.2蓝布正中总多酚含量测定方法的建立本文以没食子酸为对照品，参考文献中报道的方法[5]，建立蓝布正总多酚的酒石酸亚铁显色法，以紫外分光光度计测定蓝布正中总多酚的含量，同时进行了方法学验证。

2.2.1反应溶液的配制酒石酸亚铁溶液的配制：精密称取硫酸亚铁约1.0 g，酒石酸钾钠约5.0 g用水溶解并定容至1 L棕色容量瓶中，即得酒石酸亚铁溶液； pH 7.5磷酸盐缓冲溶液配制：精密称取十二水磷酸氢二钠约23.9 g，加水溶解，定容至1 L棕色容量瓶中，计作溶液A； 精密称取经110 ℃烘干2 h磷酸二氢钾约9.1 g，加水溶解定容至1 L棕色容量瓶中，计为溶液B。取溶液A 85 mL与溶液B 15 mL充分混合均匀，调pH 至7.5，即得。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品约50.0 mg，放入50 mL棕色容量瓶中，以蒸馏水溶解并定容，制得没食子酸母液(1 mg / mL)。精密吸取母液1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 mL至10 mL棕色容量瓶中以蒸馏水定容至刻度，摇匀后过0.22 μm微孔滤膜，即得0.10, 0.20, 0.30, 0.40, 0.50, 0.60, 0.70, 0.80 mg /mL的系列标准溶液。

2.2.3供试品溶液的制备取干燥的蓝布正药材，粉碎，过60目筛，每份样品均有少量残渣，为保证不同样品之间的一致性，本研究将残渣和粉末的重量按相同比例精密称取蓝布正约0.1 g，放于25 mL容量瓶中，以25%乙醇定容至刻度，盖上瓶塞，超声提取30 min(频率100 kHz)。 超声完毕取出容量瓶冷却待至室温，以25%乙醇补足损失的重量，摇匀后1200 g /min离心5 min, 取上层澄清液，以0.22 μm的微孔滤膜，即得供试品溶液。

2.2.4标准曲线的绘制分别精密量取2.2.2项下不同浓度的标准溶液2 mL置于8个25 mL容量瓶中，加入4 mL蒸馏水、5 mL酒石酸亚铁溶液，混匀后用pH 7.5的磷酸盐缓冲液定容至刻线。以蒸馏水代替待测液作空白对照，用紫外分光光度计测543 nm波长处的吸光度，以吸光度A为纵坐标，样品浓度C为横坐标绘制标准曲线，计算标准曲线方程Y=16.125X+ 0.018(r=0.9992),结果表明没食子酸对照品溶液在0.008 ～ 0.064 mg / mL的浓度范围内呈良好的线性关系，见图1。

图1　没食子酸的标准曲线

2.2.5精密度试验按2.2.3项下方法制备供试品溶液1份，按2.2.4项下方法显色分析，连续分析测定6次，代入标准曲线方程，计算样品含量，结果RSD为0.19 %，表明本方法精密度良好。

2.2.6重复性试验取同一批次烘干的蓝布正粉末7份，精密称定，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，按2.2.4项下方法显色分析，代入标准曲线方程计算蓝布正中多酚的平均含量为5.65 %，RSD为1.93 %，表明本文所建立的方法重复性良好。

2.2.7稳定性试验取同一批次烘干法干燥的蓝布正粉末1份，精密称定。按2.2.3项下方法制备供试品溶液，在室温下放置，分0、4 、8 h 3个不同时间段考察不同测定时间样品的稳定性。移取每组所提取溶液2 mL, 按2.2.4项下方法显色分析，代入标准曲线方程计算蓝布正中多酚的平均含量为5.65 %, RSD为2.13%, 表明样品溶液在室温放置0～8 h内稳定。

3结果

3.1加样回收率精密称取已知含量的蓝布正粉末约50 mg，加入一定量的对照品，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，按2.2.4项下方法显色分析，计算加样回收率，结果(见表1)。

表1加样回收率试验结果

编号取样量(mg)已知量(mg)加入量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均值(%)RSD(%)150.012.822.815.509795.21250.032.822.815.432192.75350.292.842.895.8585104.43450.002.822.745.315994.94550.172.832.755.374098.37650.182.832.755.567899.4097.524.30

3.2不同干燥方法处理的蓝布正中没食子酸的含量测定分别取2批样品，每批样品中每种干燥方法平行取2份，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，按2.2.4项下方法显色分析，计算不同干燥方法处理的样品含量，结果见表2。比较不同干燥方法的干燥时间及对有效成分的影响。从表2可见，烘干法所用干燥时间最短(19 h)，晾干法与阴干法干燥时间一样，均需5 d。不同干燥方法对于蓝布正中多酚含量的积累不一致，检测二批样品的多酚含量，烘干法均高于晾干法，但与阴干法的含量差异不大。

表2不同干燥方法对蓝布正总多酚含量的影响

干燥方法干燥时间总多酚含量(%)第1批第2批烘干法19h6.535.76晾干法5d5.845.37阴干法5d6.585.70

4讨论

蓝布正是贵州特色民族药，多分布于贵阳、遵义、凯里、都匀、独山、惠水、松桃等地，资源丰富[6]，现代药理研究表明其具较好的心脑血管活性。多酚作为蓝布正中重要的药效组分，具有较高的含量，因此在产地干燥中应注意对多酚类成分的保存，减少加工过程中有效成分的影响。

4.1蓝布正样品预处理及取样方法优化蓝布正为全草入药，干燥后不易加工，因此本实验对蓝布正干燥之前, 对其进行了清洗和修剪, 保证了实验结果的重现性。同时在蓝布正粉碎过筛的过程中，总有一些未通过60目筛的残渣，为了保证结果的一致性，本研究将残渣与过筛的重量均进行称量，获得不同样品的粉末与残渣比，在称量中按相同比例进行称取，可有效保证批次间样品测定结果

的合理和准确，同时也可减少通过增加粉碎时间产生的热量对有效成分的影响。

4.2供试品溶液制备方法的优选在蓝布正样品溶液的制备方法优化中，本研究首先考察了0 %、20 %、25 %、30 % 4个不同质量分数的乙醇对蓝布正中总多酚的提取效果(n = 2)，基于总多酚的含量和重复性最终优化出25%乙醇为蓝布正多酚的提取溶剂；同时本研究考察了超声和回流提取对蓝布正多酚的提取效果，以提取的多酚含量为标准，结果表明回流法提取的总多酚含量虽然高于超声法，但重复性较差，超声法提取的重复性较好，综合考虑选取超声提取法。此外本研究对超声提取时间进行了优化，结果表明超声 30 min处理的蓝布正多酚含量较低，表明提取尚不完全，超声45 min与60 min处理的蓝布正多酚有效成分均可完全溶出，且重复性均较好，二种处理时间无明显差异，为了减少处理时间，提高效率，最终选取超声45 min。

4.3不同干燥方法的效果评价中药材的干燥对于其保存和使用具有重要意义。贵州省天气多雨常阴，采取适宜的干燥方法对于防止蓝布正的吸潮、发霉、变质等尤为重要。本研究通过紫外扫描没食子酸的紫外光谱，确定了543 nm为检测波长, 阴性对照样品无干扰。该方法用于3种干燥方法的评价，结果表明，综合2批次样品，烘干法处理样品的多酚含量高于晾干法，但烘干法与阴干法之间的差异不大，提示室外阳光可能对多酚有一定的破坏。再者，烘干法的干燥时间最短(19 h)，优于晾干法(5 d)与阴干法(5 d)，干燥速度快，便于工业化生产。

综上所述，通过对比3种方法得出烘干法不但可有效保护酚类成分损失，同时又减少了干燥时间，有利于药材的快速干燥和防霉变，因此烘干法可为蓝布正的干燥加工提供实验依据。

[参考文献]

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[3] 刘安, 杨晓虹, 董雷, 等. 草本水杨梅的研究进展[J]. 特产研究, 2012,34(3): 67-72.

[4] 吴颖. 蓝布正的研究进展[J]. 北京电力高等专科学校学报：社会科学版， 2012, 29(8): 196 -197.

[5] 欧阳玉祝，吕程丽，匡友元. 紫外分光光度法测定路边青中多酚含量[J]. 光谱实验室，2010，27(3): 1055-1058.

[6] 何顺志，徐文芬. 贵州中草药资源研究[M]. 贵阳:贵州科技出版社, 2007: 332.

[收稿2015-10-14;修回2015-11-14]

(编辑：王福军)

Effects of different drying methods on the content of total polyphenols components ofGeumJaponicumThunb.var.Chinese F.bolle in Guizhou

ZhangJianyong1,YangXiaowei1,DuanCancan1，NieXuqiang1,PeiXian1,ZhouQingdi2

(1.Deparment of Pharmacy， Zunyi Medical University， Zunyi Guizhou 563099, China; 2. School of Chemistry,The University of Sydney，NSW2006，Australia)

[Abstract]Objective To investigate the effect of different drying methods on the active components ofGeumjaponicumThunb.var.chineseF.bolle (Chinese name lanbuzheng, LBZ) in Guizhou by the determination of total polyphenols.Methods The method for the detection of total polyphenols in LBZ by UV was established, the effects of oven drying, drying in the sun and drying in the shade on the content were examined.Results This method was reliable, quick and had good repeatability. Different contents of total polyphenols were observed by three drying methods, the contents of total polyphenols from oven drying, drying in the sun, drying in the shade were 6.53%, 5.84%, 6.58% for first batch, 5.76% 5.37%, 5.70% for second batch, respectively. The time of oven drying was shorter than drying in the sun or drying in the shade.Conclusion LBZ is suitable for oven drying in the production place.

[Key words]GeumjaponicumThunb.var.chineseF.bolle；drying method; total polyphenols； content determination

[中图法分类号]R282.4

[文献标志码]A

[文章编号]1000-2715(2015)06-0646-03

[基金项目]国家自然科学基金资助项目(NO: 81560736)；教育部春晖计划项目(NO: Z2014096)；贵州省科学技术基金项目(NO: 黔科合J字[2014]2182)。