大豆异黄酮对蛋鸡免疫性能的影响

大豆异黄酮（Soy isoflavones，ISO）主要存在于豆科植物中，其中在大豆中含量最高，其主要成分是黄豆苷元、染料木素和大豆黄素。ISO 在动物生产中，对动物生长性能、免疫性能、生殖性能都有一定的影响[1-4]，是一种新型的饲料添加剂。ISO 作为植物雌激素精确地对免疫系统的影响还不是很清楚。先前对染料木素的研究比较多，但是ISO 除了染料木素还包含了许多生物活性物质[5]，鉴于染料木素对动物免疫性能的影响未必能代表大豆中所有复杂成分的作用，因此需要对ISO 进行更多的研究，以便对其调节细胞免疫和体液免疫有更全面的了解。本试验主要研究大豆异黄酮对蛋鸡免疫器官指数、细胞免疫和体液免疫的影响，为深入探讨大豆异黄酮对蛋鸡免疫性能的作用机制提供依据，且为其作为饲料添加剂在动物生产中应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料 大豆异黄酮提取物，购自湖南九汇有限公司；海蓝褐蛋鸡，购自郑州牧专孵化场；一抗：IgG、IgM，购自北京博奥森生物技术开发有限公司；鼠抗鸡PE-CD4+、PE-CD8+、FITC-CD3+单克隆抗体，购自Southern Biotech 公司。

1.2 方法 选取60 只1 日龄健康的蛋鸡，随机平均分为2 组：试验组（T 组）日粮中添加大豆异黄酮提取物20 mg/kg，对照组（C 组）饲喂基础日粮，分别于7、14、21、28、35 日龄随机抽取T 组和C 组蛋鸡各5只，称重后分别心脏采血，把血液分装于两支EP 管中，一支抗凝血制备淋巴细胞悬液，用流式细胞术测定其中CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴细胞亚群百分率，一支离心分离血清冷冻保存，用间接ELISA 法测定其中IgG、IgM含量。分别取气管液、肠液、胆汁冷冻保存，用间接ELISA 法测定其中IgG、IgM 含量；分别取胸腺、脾脏、腔上囊称重，脾脏研磨制成淋巴细胞悬液，用流式细胞术测定其CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴细胞亚群百分率。

2 结果

2.1 大豆异黄酮对蛋鸡免疫器官指数的影响 与对照组相比，从7～35 日龄，试验组的腔上囊指数、胸腺指数、脾脏指数均有不同程度的增加，但无统计学差异性。表明大豆异黄酮可以促进免疫器官发育，这对于蛋鸡机体免疫功能有积极意义。

2.2 大豆异黄酮对蛋鸡细胞免疫的影响 蛋鸡添加大豆异黄酮后7～35 d，试验组外周血、脾脏T 淋巴细胞亚群CD3+、CD4+百分率和CD4+/CD8+的比值高于对照组，差异均不显著。外周血T 淋巴细胞亚群CD8+百分率的变化除在14 d 高于对照组外，在7、21、28、35 d 比对照组有所下降，但差异不显著；脾脏T 淋巴细胞亚群CD8+百分率的变化除在7、14、21 d 高于对照组外，在28 d、35 d 比对照组有所下降，但差异不显著（见表1）。

表1 外周血和脾脏CD3+，CD4+，CD8+T淋巴细胞亚群百分率和CD4+/CD8+比值的测定/% （n=5）

2.3 大豆异黄酮对蛋鸡体液免疫的影响 蛋鸡日粮中添加大豆异黄酮后7～35 d，气管液中IgG含量高于对照组，以28 d 差异显著（P＜0.05）；肠液中IgG 含量明显高于对照组，14 d、28 d 差异显著（P＜0.05），血清和胆汁中免疫球蛋白IgG，相对含量高于对照组，但无统计学差异显著性（见表2）。

蛋鸡日粮中添加大豆异黄酮后7～35 d，气管液中IgM 含量明显高于对照组，并且在7、14、28、35 d 差异显著（P＜0.05），肠液和胆汁中IgM 含量明显高于对照组，都在7 d 差异显著（P＜0.05）。血清中IgM 相对含量高于对照组，但无统计学差异显著性（见表2）。

3 讨论

一般认为在一定范围之内，免疫器官重量下降为免疫抑制所致，而免疫器官重量增加则为免疫功能增强的表现[6]，免疫器官重量与指数一定程度上可以反映免疫器官内淋巴细胞与巨噬细胞等免疫活性细胞的数量，可作为辅助性免疫检测手段，了解体内淋巴细胞总体抗体水平。本试验结果表明，与对照组相比，从7～35 日龄，试验组的腔上囊指数、胸腺指数、脾脏指数均有不同程度的增加，但无统计学差异性。表明大豆异黄酮能够促进免疫器官发育，这对于蛋鸡机体免疫功能有积极意义。这与高峰等[7]研究结果是一致的，高峰等研究表明，大豆黄酮显著提高雏鸡免疫器官胸腺和腔上囊的相对质量。

细胞免疫主要是指T 淋巴细胞及淋巴因子介导的免疫应答，其主要效应细胞是T 细胞、自然杀伤性细胞（即NK 细胞）及K 细胞。从7～35 d，试验组外周血中CD3+、CD4+T 淋巴细胞亚群百分率和CD4+/CD8+的比值高于对照组，差异不显著；CD8+T 淋巴细胞亚群百分率除在14d 高于对照组外，在7、21、28、35 d 比对照组有所下降，但差异不显著。从7～35 d，试验组脾脏CD3+、CD4+T淋巴细胞亚群百分率和CD4+/CD8+的比值高于对照组，差异不显著；CD8+T 淋巴细胞亚群百分率除在7、14、21 d 高于对照组外，在28 d、35 d 比对照组有所下降，但差异不显著。本试验表明，大豆异黄酮调节动物的细胞免疫性能是可行的。但ISO 对免疫是有益的还是有害的可能与动物种类、性别、剂量、年龄以及所要观察的对象有关。

表2 蛋鸡血清、气管液、肠液、胆汁中IgG和IgM相对含量的测定 （OD at 450 nm）（n=5）

国内外文献证明，大豆异黄酮有增强哺乳类动物和家禽免疫的作用，但对于禽特异性免疫的影响还缺乏系统的研究。禽局部黏膜是病原入侵的主要门户，局部黏膜的免疫状态影响着禽抵抗病原的能力，本试验对服用大豆异黄酮的蛋鸡的局部体液-气管液、胆汁和肠液的IgM、IgG含量进行动态检测，为大豆异黄酮的临床应用及进一步阐明其免疫作用机理提供理论依据。试验结果表明，与对照组相比，从7～35 日龄，试验组蛋鸡气管液、胆汁、肠液的IgG、IgM 含量都有提高。气管液中IgG 含量在28 日龄差异显著（P＜0.05），IgM 含量在7、14、28、35 日龄差异显著（P＜0.05）；肠液中IgG含量在14、28 日龄差异显著（P＜0.05），IgM 含量在7 日龄差异显著（P＜0.05）。表明在黏膜免疫系统中，试验组体液免疫功能略有所提高。

[1] 王国杰，韩正康，陈杰，等.大豆黄酮对肉鸡生长的影响及其作用机制的研究[J].广东畜牧兽医科技，1994，19（3）：17-18.

[2] 郭晓红，赵恒寿.大豆黄酮对肉仔鸡生长相关激素水平与免疫机能的影响[J].动物营养学报，2005，17（2）：63-64．

[3] Cassidy A.Potential risks and benefits of phytoestrogen-rich diets[J].Vitamin and Nutrition Research，2003，73：120-126.

[4] 黄金明，刘兆彬，张利军.大豆黄酮对急性应激条件下公鸡睾丸发育、精液品质和血清甲状腺素水平的影响[J].中国畜牧杂志，2006，42（5）：23-25．

[5] Erdman J W，Badger T M，Lampe J W，et al.Not all soy products are created equal：caution needed in interpretation of research results[J].Journal of Nutrition，2004，134（5）：1229S-1233S.

[6] Stutz M W，Johnson S L，Judith F R.Effects of diet，bacitracin，and body weight restrictions on the intestine of broiler chicks[J].Poultry science，1983，62（8）：1626-1632.

[7] 高峰，周光宏，韩正康.大豆黄酮对雏公鸡生产性能和机体免疫的影响[J].中国家禽，2000，22（10）：8-9.