HPLC法测定骨康胶囊中含芍药苷的量

曹明珠，凌雪宇，王家栋，冯伟旭

(哈药集团世一堂制药厂，哈尔滨 150078)

HPLC法测定骨康胶囊中含芍药苷的量

曹明珠，凌雪宇，王家栋，冯伟旭

(哈药集团世一堂制药厂，哈尔滨 150078)

建立HPLC法测定骨康胶囊中含芍药苷量的方法.样品经甲醇超声提取后，采用HPLC法测定骨康胶囊中含芍药苷量的方法，使用C18色谱柱，甲醇-水(28∶72)为流动相.检测波长为230 nm，流速为1.0 mL/min.芍药苷线性范围是9.8～99.0 μg/mL，相关系数r=0.999 8，平均回收率99.46%.样品处理方法合理，方法学考察符合定量要求，结果准确，可用于骨康胶囊中含芍药苷的量测定.

骨康胶囊；芍药苷；HPLC法

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪，包括G1379A脱气机，G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1316A可变波长检测器， G2170AA色谱工作站，UV-2450型紫外可见分光光度计(日本岛津).芍药苷对照品(批号：110736-201035)购自中国药品生物制品检定所.甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，试验用水为杭州娃哈哈有限公司生产的娃哈哈纯净水，骨康胶囊(自制).

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱

COSMOSIL 150×4.6 mm，5 μm ODS C18柱；流动相：甲醇-水(28∶72)；检测波长：230 nm；流速：1 mL/min；柱温：40 ℃；理论板数：按芍药苷峰计算应不低于2 000.

2.2 对照品溶液的制备

精密量取经80 ℃干燥至恒重的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含芍药苷25 μg的溶液，即得[4-6].

2.3 供试品溶液的制备

取本品2 g，精密称定，置具塞锥形瓶内，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率100 W，频率 50 kHz，) 40 min，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，蒸干，残渣加50%甲醇5 mL使溶解，加入已处理好的中性氧化铝柱(100～200目，4 g，内径15 mm)上，以50%甲醇洗脱，收集洗脱液置50 mL量瓶中至刻度，摇匀，即得.

早先的动物研究和个案报道中发现早孕期妇女暴露于EFV引起神经管畸形的风险升高，但后来的研究中并未发现这个问题，所以目前认为EFV可以应用于妊娠各个阶段。由于有研究发现早孕期妇女暴露于DTG引起神经管畸形的风险升高，目前不推荐在妊娠8周内使用DTG。所以对那些有怀孕意愿的或者不采取避孕措施的妇女，应选用不含DTG的其他抗病毒治疗方案。NVP不良反应较多，而且只可以用于CD4+T淋巴细胞＜250个/μL的女性。RPV不能用于HIV病毒载量＞100 000拷贝/mL和CD4+T淋巴细胞计数＜200个/μL的患者。

2.4 阴性溶液的制备

骨康胶囊制备工艺，制备缺少白芍(炒)药材的成品，按照供试品制备方法制备阴性液样品.

2.5 测定方法与结果

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性液各10 μL，注入高效液相色谱仪,如法测定. 见图1.

图1 标准品、样品、阴性样品液相图谱

2.6 方法考察

2.6.1标准曲线

精密称取芍药苷对照品9.80 mg，置20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制得标准品贮备液.精密吸取上述标准品贮备液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6 、2.0 mL，分别置10 mL容量瓶中，得质量浓度分别为0.009 8、0.019 6、0.039 2、0.058 8、0.078 4、0.099 0 mg/mL的标准品溶液，分别注入高效液相色谱仪，测定.以进样量对数和峰面积对数进行线性回归绘制标准曲线，结果表明芍药苷在9.8～78.4 μg范围内线性关系良好，标准曲线方程为Y= 82 525.172X+7 160.1886，相关性r=0.999 8.见图2

图2 标准曲线

2.6.2加样回收试验

精密称取芍药苷对照品2.45 mg置20 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，质量浓度为123 μg/mL.取供试品2 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入质量浓度为123 μg/mL的芍药苷对照品溶液5 mL，加甲醇定容至刻度，称定质量，超声40 min，放至室温后补足至质量.过0.45 μm微孔滤膜即得加样回收溶液.进行测定.结果表明本方法回收率良好，RSD值为0.66%.计算结果见表1.

表1 加样回收率实验结果

2.6.3精密度试验

精密称取芍药苷对照品12.80 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，取1 mL，至50 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得.精密吸取对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，连续进样5次，测定.结果见表2.

表2 精密度实验结果

2.6.4重复性试验

对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品13.20 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，取1 mL，至50 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得.

供试品溶液的制备 取本品2 g共 6份，置具塞锥形瓶内，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率100 W，频率 50 kHz，) 40 min，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，蒸干，残渣加50%甲醇5 mL使溶解，加入已处理好的中性氧化铝柱(100～200目，4 g，内径15 mm)上，以50%甲醇洗脱，收集洗脱液置50 mL量瓶中至刻度，摇匀，即得供试品溶液.

精密吸取上述溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪测定.结果见表3.

表3 重复性试验

2.6.5稳定性试验

对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品12.35 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，取1 mL，至50 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得.

取骨康胶囊样品，按供试品溶液的制备方法配制成供试品溶液，分别于第0、1、2、3、6、12小时h，精密吸取供试品溶液10 μL 注入液相色谱仪中，记录色谱图.结果见表4.

表4 稳定性实验结果

2.6.6样品测定

按照按供试品溶液的制备方法配制成供试品溶液，测定三批中试骨康胶囊中含芍药苷的量，根据测定结果确定每粒含芍药苷不低于0.45 mg/粒.试验结果见表5.

表5 三批样品测定结果

3 讨 论

1)处方包括肉桂、白芍(炒)、当归、乳香(制)、附子(制)、制川乌、淫羊藿、党参八味药材，芍药苷为白芍(炒)中主要药效成分.因此建立芍药苷的测定方法，规定其含量限度，作为骨康胶囊成品的质量控制方法.

2)对芍药苷的测定提取方法进行了加热回流和超声提取两种方法，实验结果表明：上述方法基本上均能将芍药苷提取完全，但加热回流提取随着提取时间的延长，芍药苷因受热分解，含量逐渐降低；超声提取法利于芍药苷的稳定，并且更方便省时，提取40 min待测成分已基本提取完全，所以最终提取方法选择超声提取法.

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京: 化学工业出版社, 2010.

[2] 王 巧，郭洪祝，霍长虹，等. 白芍化学成分研究[J]. 中草药， 2007, 38(07): 972-976.[3] 周秋香，李友宾，蒋建勤. 白芍的化学成分研究[J]. 海峡药学， 2009, 21(06): 92-94.

[4] 周 强，栗占国. 白芍总苷的药理作用及其在自身免疫性疾病中的应用[J]. 中国新药与临床杂志，2003.22(11): 687-691.

[5] 谷满仓，钱亚芳，吕圭源. 白芍的化学成分及质量控制方法研究进展[J]. 科技通报， 2006, 22(3): 337-341.

[6] 凌雪宇，刘文亮，郑 玥，等.HPLC法测定参附丹强心颗粒中丹参素钠质量浓度[J].哈尔滨商业大学学报：自然科学版，2014，30(5)：536-538.

Determination of paeoniflorin in Gukang capsules by HPLC

CAO Ming-zhu, LING Xue-yu, WANG Jia-dong, FENG Wei-xu

(Shiyitang Pharmaceutical Factory of Harbin Pharmaceutical Group, Harbin 150078, China; )

To establish an HPLC method for the determination of paeoniflorin in Gukang capsules. The sample was extracted in methanol by ultrasonic. The paeoniflorin content of Gukang capsules was determined on C18chromatographic column using HPLC. Methanol -water (28∶72) was used as the mobile phase using. The detection wavelength was 230 nm. The flow rate was 1.0 mL/min. Paeoniflorin linear range was 9.8 ～99.0 μg/mL, and the correlation coefficient r was 0.999 8. And the average recovery rate was 99.46%. The processing method is reasonable. The methodology conforms to the requirements of the quantitative. This method can be used for the determination of paeoniflor in Gukang capsules.

Gukang capsules; paeoniflorin; HPLC

2014-04-24.

曹明珠(1983-)，女，工程师，研究方向：中药质量标准.

R286

A

1672-0946(2015)05-0533-03