种植体周围炎龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35的表达及临床意义

尹光山,王明德

(1.临朐县人民医院口腔颌面外科,山东 临朐 262600； 2.潍坊市人民医院口腔颌面外科,山东 潍坊 261041)

种植体周围炎龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35的表达及临床意义

尹光山1※,王明德2

(1.临朐县人民医院口腔颌面外科,山东 临朐 262600； 2.潍坊市人民医院口腔颌面外科,山东 潍坊 261041)

摘要：目的探讨白细胞介素(IL)2、IL-17、IL-35在种植体周围炎龈沟液中的表达及意义。方法选择2011年1月至2013年12月临朐县人民医院收治的40例种植体周围炎患者(A组)为研究对象。选择健康种植体患者40例为B组。选择健康人群50例为健康对照组。统计3组探诊深度、龈沟出血指数(SBI)、受试者龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35水平，并对龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35水平与性别、年龄、探诊深度、SBI进行相关性分析。结果A组探诊深度、SBI、龈沟液量显著高于B组和对照组[(4.49±0.71) mm比(2.59±0.62) mm，(2.54±0.59) mm；(3.45±0.89)比(0.69±0.22)，(0.64±0.27)；(1.96±0.82) μL比(0.89±0.25) μL，(0.69±0.21) μL](P<0.01)；B组和对照组探诊深度、SBI、龈沟液量比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组IL-17水平高于B组和对照组[(10.61±1.02) ng/L比(7.58±0.98) ng/L、(5.49±0.91) ng/L](P<0.05)，B组IL-17水平高于对照组(P<0.05)；A组IL-2、IL-35水平低于B组和对照组[(3.19±0.49) ng/L比(3.69±0.68) ng/L，(3.91±0.72) ng/L；(62.78±4.29) ng/L比(75.82±4.63) ng/L，(82.49±4.81) ng/L](P<0.01)，B组IL-2、IL-35水平低于对照组(P<0.05)。IL-17与年龄、探诊深度、SBI呈正相关(r=0.710,0.629,0.749,P<0.05)，IL-2、IL-35与年龄、探诊深度、SBI呈负相关(r=-0.698，-0.381，-0.761；r=-0.715，-0.387，-0.752，P<0.05)。结论IL-17在种植体周围炎患者龈沟液中呈高表达，IL-2、IL-35在种植体周围炎患者龈沟液中呈低表达；龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35的特异性表达与种植体周围炎密切相关。

关键词：种植体周围炎；龈沟液；细胞因子；炎症反应；免疫功能

function

种植体周围炎是种植体周围组织的炎症反应，可导致患者支持骨丧失，甚至引起种植体脱落，可严重影响患者的口腔健康[1]，对该病尽早诊治对病情的控制和改善具有重要意义[2]。口腔炎性疾病时患者体内细胞因子可出现异常表达，表明机体存在一定的炎症反应和免疫紊乱[3]。本研究通过检查种植体周围炎患者龈沟液中白细胞介素(interleukin,IL)2、IL-17、IL-35的水平，旨在探讨IL-2、IL-17、IL-35在种植体周围炎龈沟液中的表达及意义。

1资料与方法

1.1一般资料选择2011年1月至2013年12月临朐县人民医院收治的40例种植体周围炎患者(A组)为研究对象，符合种植体周围炎的诊断标准[3]，患者男18例、女22例，年龄20～70岁，平均(39±4)岁；≥60岁组15例，<60岁组25例。选择同期被本院收治的健康种植体患者40例为B组，男17例、女23例，年龄21～65岁，平均(40±4)岁。选择同期在本院门诊体检的健康人群50例为健康对照组，男22例、女28例，年龄19～65岁，平均(37±3)岁。3组在性别、年龄等方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究均获受试者知情并签署知情同意书。

1.2纳入与排除标准纳入标准：符合种植体周围炎的诊断标准；无全身系统疾病；近半年内未接受牙周治疗、未服用抗生素；无其他原发脑部器质性病变；知情同意[3]。排除标准：有种植体周及牙周组织疾病治疗史者；有精神疾病史；有酒精药物滥用史；近半年内服用免疫抑制剂、避孕药者；孕妇；吸烟者；未完成随访者[3]。

1.3研究方法

1.3.1龈沟液的采集将Whatman 3号滤纸裁成宽2 mm×20 mm大小的纸条，置于干净容器中备用。采集龈沟液：用无菌干棉球擦干牙面，隔湿，去除较大的菌斑，轻吹牙龈，将制备好的滤纸条插入种植体颊侧近远中、舌(腭)侧近远中龈沟中，1 min后取出，用游标卡尺测量并记录浸湿长度，剪去干燥部分，置于装有0.9%NaCl注射液的Eppendorf管中，每管含1个样本的4条滤纸，离心半径8 cm，10 000 r/min，4 ℃离心10 min，取上清液，-70 ℃冷冻保存。

1.3.2龈沟液定量将健康者血清0.1~ 2.0 μL分为20组(以0.01 μL递增)，用 5 μL进样器取各组标准量血清滴于相同的Whatman 3号滤纸条，每组3条滤纸，游标卡尺测量滤纸浸湿长度。根据健康者血清量与滤纸浸湿面积的标准曲线计算龈沟液量。

1.3.3标本检测室温下解冻标本20 min，离心半径8 cm，1000 r/min离心10 min，取上清液，采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法检测所有受试者龈沟液中IL-17、IL-35水平，采用CBA法检测龈沟液中IL-2质量浓度，试剂盒购自于上海华大科技有限公司。严格按照说明书操作[1]。

1.4观察指标统计3组探诊深度、龈沟出血指数(sulcus bleeding inde，SBI)、受试者龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35质量浓度、性别、年龄、探诊深度、SBI。

2结果

2.1三组患者探诊深度、龈沟液、SBI比较三组间探诊深度、龈沟液、SBI差异有统计学意义(P<0.01)；A组探诊深度、龈沟液、SBI均高于B组和对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；但B组和对照组探诊深度、龈沟液、SBI比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　三组探诊深度、龈沟液、SBI比较　　(±s)

SBI：龈沟出血指数； A组：种植体周围炎患者；B组：健康种植体患者；对照组：健康人群；与B组比较，aP<0.01；与对照组比较，bP<0.01

2.2三组患者龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35水平比较三组间IL-2、IL-17、IL-35水平差异比较差异有统计学意义(P<0.05)；A组IL-17水平高于B组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，B组IL-17水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；A组IL-2、IL-35水平低于B组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，B组IL-2、IL-35水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3不同性别种植体周围炎患者龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35水平比较不同性别种植体周围炎患者龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表2　三组龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35水平比较 　(±s，ng/L)

A组：种植体周围炎患者；B组：健康种植体患者；对照组：健康人群； 与B组比较，aP<0.05；与对照组比较，bP<0.05；IL：白细胞介素

表3　不同性别种植体周围炎患者龈沟液中IL-2、IL-17、

IL：白细胞介素

2.4不同年龄段种植体周围炎患者龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35 水平比较不同年龄段种植体周围炎患者龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35水平比较差异有统计学意义，≥60岁组IL-17 水平高于<60岁组，差异有统计学意义(P<0.01)；≥60岁组IL-2、IL-35水平低于<60岁组，差异有统计学意义(P<0.01)，见表4。

表4　不同年龄段种植体周围炎患者龈沟液中IL-2、

IL：白细胞介素

2.5龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35与性别、年龄、探诊深度、SBI的相关性分析 IL-17与年龄、探诊深度、SBI呈正相关(P<0.05)，IL-2、IL-35与年龄、探诊深度、SBI呈负相关(P<0.05)，见表5。

表5　龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35与性别、年龄、

IL：白细胞介素；SBI：龈沟出血指数

3讨论

IL-17为目前研究较多的细胞因子之一，在炎症反应过程中扮演着重要角色[4]。IL-17具有很强的生物学作用，在促进炎症的发生和进展中起重要作用[5]。IL-17作为促进炎症进展的重要细胞因子，与口腔炎性疾病的发病密切相关，在口腔炎性疾病的发病过程中亦起重要作用[5]。本研究检测种植体周围炎患者龈沟液中IL-17水平，结果显示，种植体周围炎患者龈沟液中IL-17的检测水平明显高于健康种植体者和健康人群，与Costa等[4]的文献报道基本一致。健康人群龈沟液中无明显炎症反应，因此龈沟液中IL-17可正常表达；本研究中健康种植体患者IL-17检测水平高于健康人群，表明其亦存在一定的炎症反应，但相较种植体周围炎患者，健康种植体患者炎症反应较弱，因此其龈沟液中IL-17质量浓度检测结果介于健康人群与种植体周围炎患者之间[4]，表明IL-17与种植体周围炎的发生密切相关。

IL-2是一种T细胞生长因子，具有免疫调节功能，主要由CD4+T细胞分泌，IL-2在免疫调节过程中可通过诱导B细胞、巨噬细胞的表达发挥调节作用[6-7]。本研究结果显示，种植体周围炎患者龈沟液中IL-2水平低于健康种植体患者和健康者，表明IL-2参与了种植体周围炎的发病。本研究中种植体周围炎患者龈沟液中IL-2呈现低表达，可能与下述因素有关：种植体周围炎患者Th淋巴细胞功能受损，IL-2表达受到抑制，免疫调节功能减弱，机体免疫水平下降[7]，因此IL-2在种植体周围炎患者龈沟液中其表达呈现下降趋势。

IL-35为IL家族新成员之一，自2007年被证实在免疫、炎症性疾病病情的调控中起重要作用后，一直为学术界研究热点[8]。IL-35具有很强的生物学作用，在抑制炎症的发生和进展中具有重要作用[8]。本研究检测种植体周围炎患者龈沟液 IL-35水平，结果显示，种植体周围炎患者龈沟液中IL-35 检测水平明显低于健康种植体患者和健康人群。健康人群和健康种植体患者龈沟液中无炎症反应或炎症水平较弱，因此龈沟液中IL-35可正常表达或表达水平介于健康人群与种植体周围炎之间；而种植体周围炎患者存在免疫紊乱和炎症反应，机体免疫功能受损，因此IL-35可出现低表达[9-14]；表明IL-35与种植体周围炎的发生同样密切相关。

本研究中不同性别的种植体周围炎患者之间龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35的检测水平差异并无统计学意义，但不同年龄段的种植体周围炎患者龈沟液中上述指标检测水平差异有统计学意义，相关性结果表明种植体周围炎中IL-2、IL-17、IL-35等指标的表达与性别无相关性，但与年龄有关。60岁以上的种植体周围炎患者龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35的表达存在异常，分析可能与下述因素有关：老年人群本身免疫功能已经开始减退，相较60岁以下人群，发生炎症反应时老年患者免疫紊乱和炎症程度较重，因此龈沟液中上述指标检测结果存在明显异常[15]。本研究相关性分析结果显示，IL-17与探诊深度、SBI呈正相关，IL-2、IL-35与探诊深度、SBI呈负相关，表明上述指标之间存在较为复杂的相关性，在种植体周围炎中IL-2、IL-17、IL-35等指标可能并不单独起作用[15]。种植体周围炎患者龈沟液中IL-17检测水平越高，IL-2、IL-35检测水平越低，即IL-17呈高表达，IL-2、IL-35低表达，表明机体所产生的炎症反应越剧烈，免疫紊乱越严重，表现为种植体周的探诊深度和SBI越显著[15]。

国内有关龈沟液中IL-2、IL-35的表达与种植体周围炎之间的研究较少。IL-17在种植体周围炎患者龈沟液中呈高表达， IL-2、IL-35在种植体周围炎患者龈沟液中呈低表达；龈沟液中IL-2、IL-17、IL-35的特异性表达与种植体周围炎密切相关。

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IL-2,IL-17,IL-35 Expression in Peri-implant Gingival Crevicular Fluid and the Clinical SignificanceYINGuang-shan1,WANGMing-de2. (1.DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery,LinquPeople′sHospital,Linqu262600,China; 2.DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery,WeifangPeople′sHospital,Weifang261041,China)

Abstract:ObjectiveTo study interleukin(IL) 2,IL-17,IL-35 expression in peri-implantitis gingival crevicular fluid (GCF) and the clinical significance.MethodsA total of 40 patients with implant surrounding inflammation (group A) from Linqu People′s Hospital were chosen as the research objects between Jan.2011 and Dec.2013,while another 40 patients with healthy implant were chosen as group B,and 50 healthy people were chosen as healthy control group.The probing depth(PD),gingival sulcus bleeding index (SBI),the IL-2,IL-17,IL-35 mass concentration in the GCF of the three groups were recorded,and the correlation between IL-2,IL-17 in GCF,IL-35 mass concentration with gender,age,PD and SBI was analyzed.ResultsThe PD,SBI,GCF of group A were significantly higher than group B and control group[(4.49±0.71) mm vs (2.59±0.62) mm，(2.54±0.59) mm；(3.45±0.89) vs (0.69±0.22)，(0.64±0.27)；(1.96±0.82) μL vs (0.89±0.25) μL，(0.69±0.21) μL](P<0.01);there were no statistically significant differences between group B and control group (P>0.05).IL-7 of group A was higher than group B[(10.61±1.02) ng/L vs (7.58±0.98) ng/L,(5.49±0.91) ng/L](P<0.05),group B higher than the control group(P<0.05); IL-2,IL-35 level of group A were lower than group B and control group[(3.19±0.49) ng/L vs (3.69±0.68) ng/L，(3.91±0.72) ng/L；(62.78±4.29) ng/L vs (75.82±4.63) ng/L，(82.49±4.81) ng/L](P<0.01),group B lower than the control group (P<0.05).IL-17 was positively correlated with age,PD and SBI(r=0.710,0.629,0.749,P<0.05),and IL-2,IL-35 were negatively correlated with the age,DP,SBI (r=-0.698，-0.381，-0.761；r=-0.715，-0.387，-0.752,P<0.05).ConclusionIL-17 shows high expression in GCF in peri-implantitis,IL-2,IL-35 show low expression in GCF in peri-implantitis;the specific expressions of IL-35,IL-2,IL-17 in GCF are closely related to peri-implantitis.

Key words:Peri-implantitis; Gingival crevicular fluid; Cytokines; Inflammatory reaction; Immune

收稿日期：2015-01-04修回日期：2015-07-28编辑：相丹峰

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.21.054

中图分类号：R780.2

文献标识码：A

文章编号：1006-2084(2015)21-3993-03