枸地氯雷他定注射液对大鼠过敏性鼻炎的影响

揭 琼，袁 馨，陈美灵，吴玉林

中国药科大学生理教研室，南京 210009

枸地氯雷他定注射液对大鼠过敏性鼻炎的影响

揭 琼，袁 馨，陈美灵，吴玉林*

中国药科大学生理教研室，南京 210009

目的：研究枸地氯雷他定注射液对卵白蛋白（OVA）致大鼠过敏性鼻炎的鼻部症状及鼻腔灌洗液PGD2、LTC4含量和炎症细胞浸润的影响。方法：采用OVA建立大鼠过敏性鼻炎模型，将造模成功的SD雄性大鼠随机分成5组：模型组、枸地氯雷他定注射液（简称枸地）低、中、高剂量组，阳性药马来酸氯苯那敏注射液（扑尔敏）组。另随机取正常大鼠设正常组。造模第22天，模型组和正常组静注生理盐水；枸地低、中、高剂量组分别静注0.3、0.6、1.2 mg·kg-1；扑尔敏组静注0.6 mg·kg-1。各组每天一次用药，连续5天，同时隔天以OVA滴鼻以维持过敏状态。于最后一次给药半小时后OVA滴鼻激发观察30 min内大鼠抓鼻、喷嚏及流涕情况，采取积分法记录上述症状程度；2 h后收集大鼠鼻腔灌洗液（NLF）测定PGD2、LTC4含量及炎症细胞数量。结果与结论：枸地组可显著改善过敏性鼻炎大鼠鼻部症状，且能减少NLF中炎症介质PGD2、LTC4含量及炎症细胞数量，改善过敏性鼻炎大鼠鼻部症状，同时也能抑制白细胞浸润，减轻晚期慢性炎症反应。

大鼠过敏性鼻炎；枸地氯雷他定注射液；鼻腔灌洗液；炎症介质；炎症细胞

近年来，过敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）的发病人数急剧上升。轻症患者可口服第二代或第三代H1抗组胺药物如氯雷他定、阿伐斯汀或地氯雷他定等；急重症或不宜口服的患者可使用马来酸氯苯那敏注射液、盐酸异丙嗪注射液或盐酸苯海拉明等注射液，但以上3种注射液均属于第一代抗组胺药物，具有明显的中枢和胆碱能神经抑制作用，不良反应较多[1]。枸地氯雷他定是新一代非镇静性长效组胺拮抗剂，不良反应少，由第三代抗组胺药地氯雷他定改造而成，用于快速缓解过敏性鼻炎的相关症状，如鼻痒、打喷嚏、流涕和咳嗽等，该药现有片剂和胶囊剂。现探讨新开发的枸地氯雷他定注射液对过敏性鼻炎大鼠的症状改善和炎症细胞浸润的影响。

1 材 料

1.1 药物

枸地氯雷他定注射液（简称枸地，合肥医工医药有限公司，批号201205，规格50 mL∶2.5 g）；马来酸氯苯那敏注射液（扑尔敏，上海禾丰制药有限公司，批号1212018）。

1.2 仪器与试剂

JA3003电子天平（上海精科天平仪器厂）；Infi-nite M200 PRO全波长酶标仪（Tecan公司）。

卵白蛋白（Ovalbumin，简称OVA，Sigma公司，批号SLBD2312V）；Al（OH）3凝胶（Thermo公司，批号OG189802）；大鼠前列腺素D2（PGD2）ELISA试剂盒（批号20140706）、大鼠白三烯C4（LTC4）ELISA试剂盒（批号20140710）均为上海翼飞生物科技有限公司产品；快速瑞氏-姬姆萨复合染液（南京建成科技有限公司，批号20140509）；水合氯醛（分析纯）。

1.3 动物

SPF级雄性SD大鼠80只，体重150～180 g，由上海杰思捷实验动物有限公司提供，动物许可证号：SCXK（沪）2013-0006。

2 方 法

2.1 大鼠过敏性鼻炎造模方法

2.1.1 全身致敏及局部抗原激发 SD雄性大鼠65只，腹腔注射1 mL含有0.6 mg OVA和10 mg Al（OH）3凝胶的生理盐水进行全身致敏，隔天重复操作，共行7次。第15天进行滴鼻，每侧鼻孔各滴入50 μL的2%OVA进行局部抗原攻击，连续7 d[2]。

2.1.2 症状积分评估标准 于最后一次滴鼻激发后观察30 min内大鼠抓鼻、喷嚏及流涕情况，采取积分法记录上述症状程度，评估标准为：①抓鼻：1分，1～5次；2分，6～15次；3分，＞15次。②喷嚏：1分，1～3次；2分，4～10次；3分，＞10次。③流涕：1分，流涕至鼻前孔；2分，流涕出鼻前孔；3分，涕流满面。对上述症状评分累积超过5分的表示造模成功[3]。

2.2 分组给药

取造模成功的大鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，分别为：①模型组：等体积生理盐水；②枸地低、中、高剂量组：0．3、0．6、1．2 mg·kg-1；③扑尔敏组：0．6 mg·kg-1；④正常对照组（随机取10只同一批正常大鼠）：等体积生理盐水。造模第22天各组按剂量静注给药，每天一次，连续5 d，同时隔天以OVA滴鼻以维持过敏状态。于最后一次给药0．5 h后OVA滴鼻激发观察30 min内大鼠抓鼻、喷嚏及流涕情况并进行评分。

激发2 h后，用3%水合氯醛麻醉大鼠并固定，切开颈前皮下组织，暴露颈部气管，在第3～4气管环之间行气管切开，自气管切开处分别向上、向下插入直径约2 mm的头皮针塑料皮管各一根，在第1气管环和第5～6气管环处分别细线结扎固定皮管，上方皮管供大鼠鼻腔灌洗用，下方皮管供大鼠呼吸用。用BT100-2J恒流泵经上方皮管行鼻腔灌洗（灌洗液为HBSS缓冲液：8 g·L-1NaCl，0．4 g·L-1KCl，1 g·L-1葡萄糖，60 mg·L-1KH2PO4，47．5 mg·L-1Na2HPO4，调pH至7．2），恒流泵速度为0．25 mL· min-1，于大鼠鼻孔处收集鼻腔灌洗液（NLF）1 mL[4]。

2.3 指标测定

2.3.1 鼻部症状 于最后一次OVA滴鼻激发后观察30 min内大鼠抓鼻、喷嚏及流涕情况，并对上述症状进行评分，与给药前的症状积分比较。

2.3.2 NLF中PGD2和LTC4含量测定 ELISA法测定NLF中PGD2和LTC4的含量。

2.3.3 NLF中炎症细胞数量 NLF处理后采用血球计数板计算白细胞总数；另取部分悬浮液采用Wright’s-Giemsa法染色进行白细胞分类计数。

2.4 统计方法

采用SPSS17．0统计软件进行分析，各组数据以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析LSD检验法，P＜0．05为差异具有统计学意义。

3 结 果

3.1 枸地注射液对过敏性鼻炎大鼠鼻部症状的影响

如表1所示，造模后，各组造模大鼠鼻部症状均加重，与正常组比较具有极显著性差异 （##P＜0．01）。经枸地治疗后，各治疗组大鼠鼻部症状均减轻，枸地氯雷他定注射液组与模型组比较均具有极显著性差异（**P＜0．01）。

表1 枸地氯雷他定注射液对过敏性鼻炎大鼠鼻部症状的影响（±s，n=10）

表1 枸地氯雷他定注射液对过敏性鼻炎大鼠鼻部症状的影响（±s，n=10）

注：与正常组比较，#P＜0．05，##P＜0．01；与模型组比较，*P＜0．05，**P＜0．01。

组别剂量/mg·kg-1给药前积分给药后积分正常组-4．1±0．6 4．0±0．3模型组-7．9±0．7##7．6±0．6##枸地 高1．2 7．9±0．7##4．3±0．5**枸地 中0．6 7．7±0．8##4．6±0．6**枸地 低0．3 7．7±0．6##4．9±0．6**扑尔敏0．6 8．0±0．5##4．8±0．7**

3.2 枸地注射液对NLF中PGD2、LTC4含量的影响

如表2所示，模型组NLF中PGD2和LTC4含量较正常组显著性增加（#P＜0．05）。与模型组相比，枸地组NLF中PGD2和LTC4含量均显著性减少。

3.3 枸地注射液对NLF中炎症细胞的影响

如表2所示，模型组NLF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数较正常组均极显著性增加（##P＜0．01）。各治疗组NLF中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数较模型组均显著减少。

4 讨 论

AR是机体对某些过敏原敏感性增高且发生在鼻黏膜的一种I型过敏反应性疾病，其发病机制[5]为过敏原刺激机体产生IgE，进而与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的FCεRI受体结合使机体致敏，当过敏原再次进入机体后，肥大细胞和嗜碱性粒细胞释放炎性介质（组胺、PGD2和LTC4等）导致鼻黏膜血管反应、鼻黏膜分泌过多及炎症细胞浸润等一系列的病理生理反应，使AR患者出现反复打喷嚏、鼻痒、流涕和鼻塞等过敏反应症状。研究表明[6]过敏反应有两个明显的阶段：早期反应（EPR）和晚期反应（LPR）。早期反应在机体再次接触过敏原后数分钟内出现，肥大细胞释放的炎性介质包括组胺、类胰蛋白酶、PGD2和LTC4等导致AR患者出现鼻痒、喷嚏和流涕等症状。晚期反应在接触过敏原后2～8 h症状与早期反应类似，但相比更强烈、更持久，病理生理反应主要包括大量细胞因子释放、炎症细胞浸润 （嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和中性粒细胞等），组织炎症加剧，导致AR患者持久鼻塞、精神萎靡和嗜睡等症状[7]。

本试验研究表明，枸地氯雷他定注射液组和阳性药扑尔敏组均能显著性改善过敏性鼻炎大鼠鼻部症状（鼻痒、喷嚏和流涕），且枸地组优于阳性药扑尔敏组。在测定过敏性鼻炎大鼠鼻腔灌洗液PGD2、LTC4含量及炎症细胞实验中，枸地组NLF中PGD2和LTC4含量也均显著性减少，嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数量也均显著性降低，故本品不仅可减少早期炎性介质PGD2和LTC4的释放，而且也能减弱晚期阶段炎症细胞的浸润。

表2 枸地氯雷他定注射液对NLF中PGD2、LTC4含量及炎症细胞的影响（±s，n=10）

表2 枸地氯雷他定注射液对NLF中PGD2、LTC4含量及炎症细胞的影响（±s，n=10）

注：与正常组比较，#P＜0．05，##P＜0．01；与模型组比较，*P＜0．05，**P＜0．01。

组别剂量/ mg·kg-1PGD2/ ng·L-1LTC4/ ng·L-1白细胞数总数/ ×106mL-1嗜酸性粒细胞数/ ×106mL-1淋巴细胞数/ ×106mL-1中性粒细胞数/ ×106mL-1正常组---127．21±9．44 7．20±0．65 4．3±0．25 1．7±0．11 0．9±0．06 0．6±0．07模型组---488．64±15．85#66．32±1．49#47．5±1．29##25．5±0．97##12．1±0．55##9．5±0．39##枸地 高1．2 167．69±8．61#10．09±0．81*11．9±0．82**5．0±0．34**2．4±0．22**2．0±0．25**枸地 中0．6 208．03±11．97#15．73±0．75*17．2±1．25**7．8±0．65**3．7±0．32**3．3±0．23**枸地 低0．3 255．08±9．08#19．57±0．76*29．8±1．50**15．0±0．97**6．6±0．42**6．5±0．48**扑尔敏0．6 257．08±12．87#18．71±1．06*17．8±1．07**8．2±0．73**3．8±0．30**3．5±0．43**

综上所述，可初步得出结论：枸地氯雷他定注射液可改善过敏性鼻炎大鼠早期症状；同时也能通过抑制炎症细胞浸润、减轻晚期的慢性炎症反应。

[1]Church MK,Maurer M．Antihistamines[J]．Chem Im-munol Allerg,2014,100(3):302-10．

[2]Bahekar PC,Shah JH,Ayer UB,et al．Validation of guinea pig model of allergic rhinitis by oral and topical drugs[J]．Int Immunopharmacol,2008,8(11):1540-51．

[3]徐叔云，卞如濂，陈 修．药理实验方法学[M]．第3版．北京：人民卫生出版社，2002：175-82．

[4]Mandhane SN,Shah JH,Bahekar PC,et al．Character-ization of anti-inflammatory properties and evidence for no sedation liability for the novel antihistamine SUN-1334H[J]．Int arch Allergy Immunol,2010,151(1):56-69．

[5]Kay AB．Allergy and allergic diseases．First of two parts[J]．N Engl J Med,2001,344(3):30-7．

[6]Elovsson S,Smailagic A,Erjefalt I,et al．Evaluation of nasal barrier dysfunction at acute-and late-phase re-actions in a guinea pig model of allergic rhinitis[J]．Vascul Pharmacol,2005,43(4):267-76．

[7]Mygind N．Allergic rhinitis[J]．Chem Immunol Allerg, 2014,100(1):62-8．

Effect of Desloratadine Citrate Disodium Injections on Ovalbumin-induced Allergic Rhinitis in Rats

JIE Qiong,YUAN Xin,CHEN Mei-lin,WU Yu-lin*
Department of Physiology,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009

Objective:To study the effect of desloratadine citrate disodium injections (DLC)on ovalbumin-induced allergic rhinitis in rats,including the rhinitis symptoms,PGD2and LTC4levels and inflammatory cell infiltration in nasal lavage fluid (NLF)．Methods:Ovalbumin-induced allergic rhinitis male SD rats were randomly divided in five groups:model group,DLC low,medium and high dose groups, and chlorphenamine maleate injectlon(CHM)group as positive group．In addition,the normal rats were also recorded．From the 22nd day of being modeled,rats of the model and normal groups were given iv saline, the DLC low,medium and high dose groups were given DLC at 0．3,0．6 and 1．2 mg·kg-1,CHM group were given CHM at 0．6 mg·kg-1,all the iv treatments were once a day for five days．Rats were topically sensitized by instilling ovalbumin solution into the bilateral nasal cavities on alternate days．Symptoms of rhinitis were observed continuously for 30 min at the last time for administration and topically sensitization, taking the scoring method to record the symptoms of rhinitis．Two hours after the intranasal challenge,NLF was collected,PGD2and LTC4levels and inflammatory cellular infiltration were evaluated,respectively．Results and Conclusion:DLC significantly attenuated ovalbumin-induced rhinitis symptoms and caused a significant reduction in PGD2and LTC4levels and inflammatory cellular infiltration．

Allergic rhinitis in rats;Desloratadine citrate disodium injection(DLC);Nasal lavage fluid; Inflammatory mediators;Inflammatory cells

R965.1

A

1673-7806（2015）03-235-03

揭琼，女，硕士 E-mail:jieqiongcpu312@163.com

*通讯作者吴玉林，男，副教授 E-mail:wylcpu625@163.com

2014-12-04

2015-01-08