脂肪乳剂用于小鼠急性酒精中毒复苏效果的观察

高万露，汪小海

南京医科大学鼓楼临床医学院麻醉科，南京 210008

脂肪乳剂用于小鼠急性酒精中毒复苏效果的观察

高万露，汪小海*

南京医科大学鼓楼临床医学院麻醉科，南京 210008

目的：研究脂肪乳剂用于小鼠急性酒精中毒的复苏效果。方法：按照随机数字表将54只小鼠随机平均分成3组，采用56°白酒灌胃建立急性酒精中毒小鼠模型，各组均一次性给药。A、B组为脂肪乳低、高剂量组，分别给予20%脂肪乳剂3 mL·kg-1、5 mL·kg-1，行静脉注射；C组为对照组，3 mL·kg-1生理盐水尾静脉注射。观察小鼠醉酒时间及复苏时间。结果：3组小鼠的醉酒时间差异无统计学意义，其复苏时间A组和B组均显著短于C组，而A组和B组复苏时间无明显差异。结论：20%脂肪乳剂可以促进小鼠急性酒精中毒的复苏，缩短其复苏时间。

脂肪乳剂；急性酒精中毒；复苏

急性酒精中毒是指过量饮入酒精或酒类饮料引起的中枢神经系统功能紊乱，表现行为和意识异常，严重者损伤脏器功能，导致呼吸循环衰竭，进而危及生命。对于严重中毒的患者，实施以下急救措施：消化道内酒精的促排、药物治疗、血液净化疗法以及对症治疗等。其中采用纳洛酮静滴配合对症处理是较为常见的治疗措施，但该方法仅限于促醒作用，对酒精的代谢并无确切影响。美他多辛也是目前有效的治疗药物，其可以加速乙醇的消除，促进肝脏功能的恢复，还可以减轻酒精中毒引起的神经精神紊乱[1]。也有报道称蛋白酶体抑制剂ALLN（N-acetyl-leu-leu-norleucinal）通过作用于细胞凋亡通路，减轻饮酒相关的心脏组织损伤[2]。

近年来脂肪乳被发现在药物中毒方面具有较好的复苏效果。Weinberg等[3]采用大鼠模型证实了脂肪乳可以逆转布比卡因诱导的心搏停止。该方法应用于临床获得成功救治局麻药中毒的病例亦有报道[4]。Tebbutt等[5]研究提示，脂肪乳剂可以延长维拉帕米中毒的生存时间；Cave[6]研究指出，脂肪乳剂可以减弱麻醉药硫喷妥钠所致的呼吸抑制。从目前看，这些药物属于脂溶性药物，美国医学毒理学学院对此给出了脂肪乳用于临床上药物中毒复苏的过渡性治疗指南。酒精虽然属于水溶性物质，鉴于脂肪乳对上述药物中毒治疗的特殊复苏作用，推测脂肪乳用于急性酒精中毒可能具有复苏效果。

1 材料与方法

1.1 实验动物

清洁级ICR雄性小鼠54只，5周龄，体重24～28 g，购自扬州大学比较医学中心SCXK（苏）2012-0004，动物合格证号：0031812。

1.2 实验试剂

0.9%氯化钠注射液（Baxter，批号CS1310007）；20%脂肪乳剂（Baxter，批号80HC131）；56°白酒（牛栏山二锅头酒，批号20140417）。

1.3 方法与观察指标

将54只小鼠随机分为3组，A组：脂肪乳剂低剂量组，小鼠醉酒后予3 mL·kg-1体重、20%脂肪乳剂尾静脉注射（1 min内完成，其它两组均相同）；B组：脂肪乳剂高剂量组，小鼠醉酒后予5 mL·kg-1体重、20%脂肪乳剂尾静脉注射；C组：生理盐水对照组，小鼠醉酒后予3 mL·kg-1体重、生理盐水尾静脉注射。各组小鼠均予以15 mL·kg-1白酒灌胃，出现醉酒状态（以翻正反射消失为依据）后小鼠分别按分组情况一次性给药[7]。观察记录小鼠醉酒时间（从灌胃到翻正反射消失的时间）和复苏时间（从翻正反射消失到翻正反射恢复的时间）。排除灌胃后立即死亡及3 h以上仍未出现醉酒状态的小鼠。

翻正反射消失是小鼠酒精中毒时常用的行为学测试方法[8]。小鼠醉酒与否，以翻正反射是否消失为标准，小鼠灌胃后将其背向下，轻放入鼠笼，若小鼠背向下的姿势保持30 s以上，则认为翻正反射消失，即为醉酒。小鼠复苏的标志为翻正反射恢复。

1.4 统计学分析

采用SPSS17．0进行统计分析，定量资料采用均数±标准差（±s）表示，两组定量资料比较采用t检验，多组比较采用单因素方差分析，多组间两两比较采用LSD法。P＜0．05差异有统计学意义。

2 结 果

A组小鼠灌胃后立即死亡1只，3 h内未醉酒2只；B组小鼠灌胃后立即死亡2只，3 h内未出现醉酒状态的2只；C组小鼠灌胃后立即死亡1只，3 h内未醉酒1只。余下45只小鼠用于统计学分析。3组小鼠的体重无明显差异（F=1．42，P=0．25）。小鼠的醉酒时间亦无明显差异（F=0．48，P=0．62）。与对照组比较，脂肪乳剂高、低剂量组治疗性给药均可以明显缩短小鼠复苏时间（P＜0．05）。对照组与脂肪乳剂低剂量组相比，复苏时间延长（105．37±24．59）min（95% CI，55．45～155．28 min）；对照组与脂肪乳剂高剂量组相比，复苏时间延长（67．62±24．59）min（95%CI，17．70～117．53 min）。脂肪乳剂高剂量组和低剂量组的复苏时间无明显差异（P=0．148）。结果见表1、表2。

表1 各组小鼠体重、醉酒时间及复苏时间比较（±s）

表1 各组小鼠体重、醉酒时间及复苏时间比较（±s）

注：A：脂肪乳低剂量组；B脂肪乳高剂量组；C：生理盐水对照组；与C组比较，aP＜0．05

组别n 体重/g 醉酒时间/min 复苏时间/min A组15 26．42±0．67 68．33±54．15 108．92±40．35aB组15 25．92±1．68 70．00±55．59 146．67±60．50aC组15 25．57±1．28 52．21±45．48 214．29±77．73

表2 各组小鼠复苏时间两两比较

3 讨 论

临床上机体摄入酒精后，除了少量未被代谢的乙醇经呼吸道挥发或尿液排出以外，大部分乙醇在肝脏进行氧化代谢，若代谢不足，过量的乙醇可以透过血脑屏障，在脑组织中浓度增加，干扰神经递质和受体的功能，抑制大脑皮质和皮质下中枢，从而出现醉酒状态。研究表明，乙醇可以通过直接作用于细胞膜上的受体和离子通道影响中枢神经系统的功能[8]。本研究对小鼠醉酒后的复苏进行了观察，发现静注脂肪乳剂的两组小鼠的复苏时间均显著短于对照组，该结果提示脂肪乳对小鼠急性酒精中毒具有较好的复苏作用。

目前，关于脂肪乳解救局麻药中毒作用机制的研究较多，Weinbery等[9]使用狗建立布比卡因诱导的心脏停搏模型，脂肪乳组均复苏成功，对照组则复苏失败。他们认为脂肪乳可能的作用机制是将血管内局麻药分割为新的脂质间隔，导致局麻药与作用部位分离，从而减弱其对靶器官的损害。一项对小鼠离体心脏的研究发现，脂肪乳加速布比卡因从心脏组织的移除，促进布比卡因中毒所致心脏停搏的恢复[10]。Stehr等[11]进一步探讨了脂肪乳的作用机制，认为脂肪乳对左旋布比卡因诱导的心脏抑制有增强心脏收缩力的效应，并认为脂肪乳作为“脂质槽”与局麻药结合降低血浆游离药物浓度，减弱其毒性作用。Litz等[12]报道了一例老年男性患者接受1%甲哌卡因30 mL与1%丙胺卡因10 mL进行锁骨下臂丛神经阻滞后出现中枢神经系统和心脏的中毒现象，予以20%脂肪乳200 mL，5 min后中枢神经系统中毒症状消失，15 min后心脏中毒症状消失，接着检测了患者局麻药的血药浓度，发现药物浓度显著下降，其认为脂肪乳对于局麻药引起的中枢神经系统中毒症状有较好地治疗效果。

脂肪乳剂是由大豆油、卵磷脂及甘油组成，其中卵磷脂作为常用的乳化剂，其分子结构中既存在亲水区，也存在疏水区。本研究结果提示，脂肪乳可以缩短急性酒精中毒的复苏时间，而乙醇与局麻药、硫喷妥钠、维拉帕米等脂溶性药物不同，推测脂肪乳对酒精中毒有效可能与卵磷脂的理化性质有关，即卵磷脂的亲水区可以与乙醇结合，从而降低血浆中游离乙醇浓度，减轻其对中枢神经系统的损害，加速乙醇过量中毒的恢复。

本研究采用白酒直接灌胃建立急性酒精中毒模型，由于小鼠呈现酒精中毒时其胃内酒精并未完全吸收，即还处于不断吸收的状态，因此研究小鼠的复苏时间并不能直接反映脂肪乳对小鼠急性酒精中毒的复苏效果，也就是说，如果增加中毒后洗胃措施，则其复苏时间可能会缩短。由于以恢复翻正反射的时间作为复苏效果的评价指标，虽然具有一定的参照价值，但是如果持续监测小鼠的生命体征及重要脏器的功能则更有利于评估小鼠的复苏效果，可能有助于更好地评价脂肪乳的治疗价值。值得注意的是，虽然脂肪乳低剂量组和高剂量组的复苏时间差异无统计学意义，但是低剂量脂肪乳的复苏时间短于高剂量组，可见脂肪乳用于急性酒精中毒复苏的剂量并不是越高越好，其最佳剂量有待研究。2011年美国医学毒理学学院给出脂肪乳用于临床上药物中毒复苏治疗时的过渡性指南，推荐使用方法为20%脂肪乳首剂为1.5 mL·kg-1缓慢推注2～3 min以上，首剂无效者，可以重复注射，继以0.25 mL·kg-1·min-1持续给药，同时监测生命体征，调整给药剂量和时间[13]。在以往研究脂肪乳治疗局麻药中毒的动物实验中，所使用的剂量不同，大多数研究的剂量在5 mL·kg-1以上，本研究选择的脂肪乳剂量相对较小，且未在首剂注射后持续输注给药，如果研究中监测小鼠生命体征并持续给药，其复苏效果可能更佳。

总之，脂肪乳可以促进小鼠急性酒精中毒的复苏，但是合理的剂量和给药策略以及作用机制有待进一步研究，且需要更多动物实验和临床试验证实。

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Lipid Emulsion Rescues Mice from Alcohol Induced Intoxication

GAO Wan-lu,WANG Xiao-hai*
Department of Anesthesiology,Affiliated Drum Tower Hospital of Medical College of Nanjing University, Nanjing 210008,China

Objective:Previous investigators have demonstrated the benefit of lipid emulsion therapy in ameliorating toxicity from local anesthetics.The aim of this study was to study the effect of intralipid treatment in mice model of acute alcoholism.Methods:Fifty-four mice were intragastrically administered with 56%ethanol solution at 15 mL·kg-1body weight.Once the mice were in ebriety,they were treated with a bolus of 3 or 5 mL·kg-1body weight 20%intralipid,or 3 mL·kg-1body weight 0.9%saline(normal saline,NS).Ebriety time and resuscitation time were recorded.Results:There was no significant difference for ebriety time among the three groups.Compared with the NS group,treatment with 20%intralipid sig-nificantly shortened resuscitation time.However,the resuscitation times between the groups with 3 or 5 mL· kg-1body weight 20%intralipid were not significantly different.Conclusion:Intralipid could shorten the resuscitation time of acute alcoholism in the mice model.

Intralipid;Acute alcoholism;Resuscitation

R965

A

1673-7806（2015）03-226-03

高万露，女，硕士生 E-mail:gaowanlu1213@163.com

*通讯作者汪小海，男，主任医师 E-mail:519602322@qq.com

2014-10-22

2014-12-07