长寿区孕期人群珠蛋白生成障碍性贫血血液学筛查及基因检测的研究＊

左凌燕，何泽真，车 显，张 敏，文 皓

（重庆市长寿区妇幼保健院产科 401220）

珠蛋白生成障碍性贫血，又称海洋性贫血、地中海贫血，是由于珠蛋白基因的缺陷使珠蛋白肽链合成减少或不能合成，导致红细胞内血红蛋白（Hb）的组成成分发生改变，引起的慢性溶血性贫血。珠蛋白生成障碍性贫血是全球最大的单基因遗传病之一，被世界卫生组织列为危害人类健康的6种常见病之一［1］。在中国，珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率为1.00%～23.00%，广泛分布于我国南方地区，主要型别为α-珠蛋白生成障碍性贫血和β-珠蛋白生成障碍性贫血［2］。广东、广西、海南、四川、重庆等地区为高发区域。重型α-珠蛋白生成障碍性贫血是致死性的出生缺陷，重型β-珠蛋白生成障碍性贫血出生1年内发病，病情呈进行性加重，仅能依靠输血和去铁治疗维持生命，且花费巨大。未经治疗者多于未成年之前夭折。目前临床上仍然缺乏有效治疗手段。因此，通过产前筛查，对高风险的胎儿进行产前诊断，以期淘汰重型珠蛋白生成障碍性贫血患儿是目前国际上公认的预防珠蛋白生成障碍性贫血的最有效的途径。本研究通过Hb成分分析和基因检测的方法筛查长寿区孕期人群珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者，以期对产前诊断和遗传咨询提供依据和指导优生优育，现将结果报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料 收集本院产科2013年1月至2014年10月就诊的1 760名孕妇，进行珠蛋白生成障碍性贫血知识宣传，对其进行Hb成分分析，统计受检者信息及检验结果。对Hb成分分析结果阳性者，签署知情同意书，进一步做珠蛋白生成障碍性贫血基因检测，并对检验结果的基因缺陷型别进行统计。对珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果为阳性者，其配偶加做珠蛋白生成障碍性贫血基因检测。

1.2 方法

1.2.1 Hb成分分析检查［3］（1）对样本采用比色法进行红细胞孵育渗透脆性实验，比值小者，红细胞抵抗力较小，脆性增加。反之抵抗力增大。正常参考范围为：成人65%～100%，结果小于65%为阳性。（2）电阻抗法测定平均红细胞体积（MCV）及红细胞体积分布宽度（RDW），RDW 正常参考范围为小于或等于15.0%，MVC 正常参考范围为80～100fL，不在此范围内即为阳性。（3）比色法测定Hb，女性正常参考范围为110～150g／L，＜110g／L为阳性。（4）采用琼脂糖凝胶电泳法测定Hb（A＋F）、Hb（A2）含量，Hb（A＋F）正常参考范围为成人96.50%～97.50%，Hb（A2）正常参考范围为2.5%～3.5%，不在此范围内为阳性。若碱性电泳显示Hb（A2）下降，主要见于α轻型珠蛋白生成障碍性贫血；若碱性电泳显示Hb（A＋F）下降，则怀疑β轻型珠蛋白生成障碍性贫血，不排除复合α珠蛋白生成障碍性贫血。

1.2.2 珠蛋白生成障碍性贫血基因检测［4］珠蛋白生成障碍性贫血血液学筛查阳性者采用PCR 技术和基因测序技术进行基因检测分析。对基因检测为携带者的孕妇再对其配偶进行基因检测。主要检测我国常见的17种β珠蛋白生成障碍性贫血基因突变和3种常见的α珠蛋白生成障碍性贫血基因缺失及3个最常见α珠蛋白生成障碍性贫血基因突变位点。

1.3 观察指标 （1）在告知孕妇并取得同意的情况下，观察Hb成分分析检查结果，与正常参考值进行比较，统计初次筛查结果为阳性的孕妇信息。（2）基因检测情况：通过PCR 技术与基因测序技术检测我国常见的17种β珠蛋白生成障碍性贫血基因突变和3种常见的α珠蛋白生成障碍性贫血基因缺失及3个最常见α珠蛋白生成障碍性贫血基因突变位点。

1.4 统计学处理 采用SPSS13.0软件进行数据分析，结果的描述主要使用绝对数和构成比（%），为了方便对结果的分析和对比采用图表统计处理。

2 结 果

2.1 Hb成分分析结果 自2013年1月至2014年10月，对在本院就诊的1 760例孕期人群进行Hb成分分析，作为珠蛋白生成障碍性贫血初筛的方法。其中怀疑为α-珠蛋白生成障碍性贫血者27例，阳性率为1.53%，怀疑为β-珠蛋白生成障碍性贫血者25例，阳性率为1.42%，异常Hb带为5例，阳性率0.28%，总计阳性率为3.24%。具体结果如下。

2.1.1 血常规及异常Hb带检查结果 1 760例受检者中，红细胞孵育渗透脆性试验结果阳性为41例，且均为偏低；RDW实验结果阳性为384例；MCV 实验结果阳性为113例，其中大于100为59例，＜80为54例；Hb实验结果阳性为181例；5名检测到异常Hb带但均未检测Hb H 包涵体，图表统计见图1。

2.1.2 Hb碱性电泳结果 1 760例受检者中，Hb成分分析结果正常1 613例，占比91.65%；Hb（A2）碱性电泳实验结果阳性为50例；Hb（A＋F）碱性电泳实验结果阳性为51例。

图1 血常规及异常Hb带检测情况

2.2 珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果 血液筛查为阳性的孕妇对其珠蛋白生成障碍性贫血基因检查，检测为携带者的妇女进一步检查其配偶基因，在2013年1月至2014年10月，共计有465名受检者进行珠蛋白生成障碍性贫血基因检测，其中，男27名，女438名。438名女性中，76名诊断为α珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者，62名诊断为β珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者，女性人群阳性率为31.51%；27名男性中，4名α珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者，5名诊断为β珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者，男性人群阳性率为33.33%。见表1。珠蛋白生成障碍性贫血基因分型检测结果统计见表2。本次研究共检测出3对夫妻为同型珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者，均前往上级医院行产前诊断，最终3例胎儿均明确为珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者。

表1 珠蛋白生成障碍性贫血基因检测情况

表2 珠蛋白生成障碍性贫血基因分型检验缺陷位点情况

3 讨 论

珠蛋白生成障碍性贫血是一种先天的血液疾病，和父母的遗传有关。患者的红细胞较脆弱且容易死亡，其带氧能力不足，超过某种程度无法正常生活；是一种常染色体隐性基因遗传，在四川、重庆、云南等省发病率较高［5-7］，基因携带率为6.00%左右，目前无较好的治疗方法［8］。若夫妻为同型地中海型贫血的带因者，每次怀孕，其子女有1／4的机会为正常，1／2的机会为携带者，另1／4的机会为重型地中海型贫血患者。在珠蛋白生成障碍性贫血的诊断方法中［9-12］，Hb成分分析作为孕期人群大面积筛查的方法［13］，是一种综合性检查方法，根据其检查结果结合镜检血红蛋白H 包涵体，给出综合性的建议与解释，是珠蛋白生成障碍性贫血初步筛查的首选方法。对初筛结果阳性、血常规异常者进行珠蛋白生成障碍性贫血基因检测［14-16］，是珠蛋白生成障碍性贫血检查的金标准，可以直接确诊，避免漏诊、误诊，确定患者的基因型，作为遗传咨询依据，指导产前诊断，同时预测家族成员的珠蛋白生成障碍性贫血发病风险，指导婚育。本研究通过对长寿地区孕期人群珠蛋白生成障碍性贫血中流行病学研究，实施正规的珠蛋白生成障碍性贫血基因检查，得出本地区珠蛋白生成障碍性贫血发病率。采用PCR 和反向斑点杂交、RDB 技术是针对中国人群特点进行珠蛋白生成障碍性贫血确诊的最佳方案。通过对长寿地区珠蛋白生成障碍性贫血临床观察与统计分析，建立一套针对孕妇的常规珠蛋白生成障碍性贫血筛查模式，预防珠蛋白生成障碍性贫血出生缺陷，填补此病在长寿区产前筛查领域研究的空白。

本研究对象1 760例，怀疑为α-珠蛋白生成障碍性贫血者27例，阳性率为1.53%，怀疑为β-珠蛋白生成障碍性贫血者25例，阳性率为1.42%，异常Hb带为5例，阳性率0.28%，总计阳性率为3.42%。为得到1 760例孕妇珠蛋白生成障碍性贫血发病率的准确信息，对检验为阳性的孕妇进行基因检测，对确有携带致病基因的孕妇其配偶再进行基因检测，以指导优生优育，珠蛋白生成障碍性贫血致病基因为常染色体隐性遗传，若孕妇不携带致病基因，除基因突变外不可能生育患儿，若孕妇携带致病基因，则有必要对其配偶进行基因检测，进一步评估生育珠蛋白生成障碍性贫血患儿的可能，若其配偶也为携带者，有1／4的可能生育出患儿，可提供产前诊断和遗传咨询依据，为孕期妇女是否继续妊娠提供决策的依据［17］。

综上所述，珠蛋白生成障碍性贫血在四川、重庆地区的发病率高，目前国内外均无有效的根治性方法，群众对此遗传性疾病还未引起广泛关注，应大力开展珠蛋白生成障碍性贫血知识的普及与宣传工作，在产前检查中常规珠蛋白生成障碍性贫血的筛查，为基因诊断和遗传咨询提供基础，防止重度新生儿珠蛋白生成障碍性贫血的出生，对优生优育和提高人口素质具有重要意义。

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