南海分室科单殖吸虫—中国新记录亚科

杨长平邹小梅张剑英丁雪娟

(1. 华南师范大学生命科学学院, 广东省水产健康安全养殖重点实验室, 广州 510631; 2. 中国科学院南海海洋研究所,热带海洋生物资源与生态重点实验室, 广州 510301)

南海分室科单殖吸虫—中国新记录亚科

杨长平1, 2邹小梅1张剑英1丁雪娟1

(1. 华南师范大学生命科学学院, 广东省水产健康安全养殖重点实验室, 广州 510631; 2. 中国科学院南海海洋研究所,热带海洋生物资源与生态重点实验室, 广州 510301)

研究记述寄生于海南清澜绿短臂鱼 Aprion virescens鳃上的一种分室科单殖吸虫, 短臂鱼蚌盘虫Pseudonitzschia uku Yamaguti, 1965。所获标本的形态、量度与Yamaguti(1965)的原始描述基本一致; 但南海标本的后吸器上具中央锚钩和边缘小钩等几丁质结构, 而 Yamaguti的描述中无此类结构; 原始描述中阴茎表面被向后弯曲的小刺, 而南海标本阴茎表面无刺。故此对蚌盘亚科、蚌盘虫属的特征进行了补充修订。该亚科、属及种均为中国新记录。标本保存于华南师范大学生命科学学院鱼类寄生虫学研究室。

单殖吸虫; 短臂鱼蚌盘虫; 中国新记录; 绿短臂鱼; 南海

分室科(Capsalidae)单殖吸虫隶属于扁形动物门(Platyhelminthes)、单殖吸虫纲(Monogenea)、多钩亚纲(Polyonchoinea)、分室目(Capsalidea)[1]。全球已报道的分室科单殖吸虫共计9亚科47属200余种[2—6],我国报道5亚科13属21种[7—16]。2012年3月在海南清澜港的绿短臂鱼Aprion virescens鳃上采获1种单殖吸虫, 经鉴定为分室科、蚌盘亚科 Pseudonitzschiinae Yamaguti, 1965、蚌盘虫属Pseudonitzschia Yamaguti, 1965的短臂鱼蚌盘虫Pseudonitzschia uku Yamaguti, 1965。该亚科、属、种在我国均未见报道[16]。

1 材料与方法

将宿主鱼带回实验室, 先用肉眼观察其体表、鼻腔、鳃盖、口腔等部位, 后将鳃取下置于培养皿中, 在解剖镜下进行检查。采获的单殖吸虫标本部分用布氏胶直接封片以观察几丁质结构; 部分用95%的酒精保存以进行DNA序列研究; 其余用3%的戊二醛固定, 经钾矾胭脂虫红染色, 梯度酒精脱水, 松油醇透明后用中性树胶封片。附图借助OLYMPUS LB 描绘器进行手绘, 扫描后用Photoshop CS修改。在光学显微镜(Olympus BX51)和激光扫描共聚焦显微镜(Zeiss, LSM710)下对标本进行观察测量, 量度单位以 μm 计(量度取平均数,括号中数字为量度变化范围)。文中术语主要依据Yamaguti[17]。标本保存于华南师范大学生命科学学院鱼类寄生虫学研究室。

模板DNA的制备、28S rDNA部分序列的PCR扩增及PCR产物的纯化等参见丁雪娟和廖翔华[18]。PCR扩增引物参照Mollaret等[19]: 正向C1 (5′-ACC CGCTGAATTTAAGCAT-3′)和反向 D2 (5′-TGGTC CGTGTTTCAAGAC-3′)。反应体系为50 μL: 10×PCR buffer 5.0 μL, 2 mmol/L dNTP 5.0 μL, 25 mmol/L MgCl24.0 μL, 10 μmol/L引物各 2.0 μL, Taq酶(5 U/μL) 0.5 μL, DNA模板液3.0 μL, 灭菌双蒸水28.5 μL。扩增反应步骤: 94℃预解链 5min; 然后94 ℃ 1min, 56 ℃ 1min, 72℃1min作30 个循环; 最后 72℃延伸 5min。PCR产物经电泳分离、回收、纯化后送生工生物工程股份公司进行序列测定。

2 形态学描述

短臂鱼蚌盘虫 Pseudonitzschia uku Yamaguti, 1965, 中国新记录(图1、2)

图1 短臂鱼蚌盘虫Fig. 1 Pseudonitzschia uku Yamaguti, 1965

宿主: 绿短臂鱼Aprion virescens (Valenciennes, 1830)

寄生部位: 鳃

标本采集时间及地点: 2012年3月23日, 海南清澜港 (19°61′ N, 110°72′ E)

形态描述: 虫体长卵形, 背腹扁平, 体长 2033 (1075—2125) μm, 最大体宽592 (500—713) μm (图1A、2A)。后吸器肌质、盘状, 无柄, 常折叠呈蚌形,大小为482 (440—520) μm×464 (400—510) μm; 其边缘具加厚的肌质环、两侧中位处内凹呈缺刻状,外周被薄的边缘瓣膜, 膜宽53 (50—60) μm (图1C、2B); 中央锚钩1对, 倒“Y”形, 基部分叉, 顶端渐细,斜向列于后吸器两侧缺刻与中央之连线处, 长 12.9 (12.8—13.3) μm (图 2C); 边缘小钩 14个, 胚钩型, 长11.5 (10—12.5) μm (图1E、2D)。前吸器1对, 碟状, 大小为300 (270—320) μm×206 (200—210) μm。眼点1对, 位于咽前。咽肌质, 中部无缢缩, 大小为105 (90—120) μm×149 (110— 150) μm。咽后紧接肠叉, 肠支具侧分支, 末端不汇合。

睾丸球形, 28 (27—30)个, 大小为85 (70—130) μm× 87 (80—100) μm, 位于卵巢之后、主肠支之内。输精管自睾丸区向前伸出, 绕过卵黄囊左侧于卵巢之前形成一回旋结构, 后弯曲前行并绕过子宫背部进入雄性交接囊, 于交接囊内旋转后最终形成射精管。雄性交接囊肌质, 近圆柱形, 前端弯曲, 大小为236 (200—260) μm×92 (80—100) μm, 纵列于咽之后, 交接囊基部具 1膨大的肌质球。射精管于阴茎基部与前列腺管结合。阴茎短圆锥形, 向前延伸至生殖腔。阴茎基部具 1棒状的生殖盘, 大小为 105 (90—120) μm×49 (40—60) μm。前列腺囊椭球形, 位于雄性交接囊下方, 大小为 65 (55—80) μm×69 (60—75) μm, 基部具前列腺细胞; 前列腺管自前列腺伸出, 向前延伸进入雄性生殖囊并穿过基部的肌质球, 最后与射精管汇合。公共生殖管圆柱形, 开口于左前吸器下方之体侧边缘, 常被左前吸器覆盖(图1B)。

卵巢近球形, 中位, 约位于虫体前1/3处, 大小为133 (120—150) μm×115 (110—130) μm。卵黄囊长椭圆形, 紧邻于卵巢左上方, 大小为 120 (100—130) μm×62 (50—70) μm。卵黄腺滤泡状, 伴肠支分布。输卵管自卵巢伸出, 与卵黄囊输出管相接后向前延伸至卵模。卵模与梅氏腺细胞发育较好, 位于雄性交接囊与输精管之间。子宫纺锤形, 于阴茎远端水平开口于公共生殖管。阴道远端膨大, 基部与卵黄囊相接, 受精囊未见 。阴道开口于虫体背面、左前吸器下方之咽基部水平(图 1B)。卵四面体型,大小为130 μm×140 μm, 具1根较长的极丝(图1D)。

以上描述根据1个布氏胶封片标本和7个染色标本。

3 讨论

本种最先由 Yamaguti[17]在美国夏威夷海域的绿短臂鱼鳃上发现并描述, 并以其后吸器前后折叠成蚌形、上无几丁质结构等特征而建立蚌盘虫属与蚌盘亚科。该亚科至今仅报道1属1种, 即蚌盘虫属短臂鱼蚌盘虫[5, 17]。蚌盘亚科、蚌盘虫属、短臂鱼蚌盘虫此前在我国未见报道, 均为中国新记录。

图2 短臂鱼蚌盘虫Fig. 2 Pseudonitzschia uku Yamaguti, 1965

本研究标本与Yamaguti[17]的原始描述在形态和量度上基本一致, 但存在差异: 在Yamaguti的描述中, 后吸器上无几丁质结构(Unarmed), 而本研究标本后吸器上具几丁质的中央锚钩和边缘小钩; 原始描述中阴茎表面被向后弯曲的小刺, 而本研究南海标本的阴茎表面未见此结构。我们对南海标本的28S rRNA基因部分序列进行了测定, 所获序列与GenBank中的短臂鱼蚌盘虫序列(No. FJ972013.1)完全重叠, 印证了其为短臂鱼蚌盘虫。Whittington[5]曾推测该种的纤毛蚴具几丁质的中央锚钩和边缘小钩, 成虫后吸器几丁质结构的缺失属次生现象, 是发育过程中其中央锚钩等发生脱落所致(Secondary losses)。我们认为该虫种后吸器中央锚钩和边缘小钩结构微小(12.8—13.3 μm和10—12.5 μm), 加之肌肉质后吸器前后折叠易将其覆盖, 故难以被观察到。

根据南海标本的观察所得, 蚌盘亚科、蚌盘虫属的特征修订如下:

蚌盘亚科特征(Amended subfamilial diagnosis):分室科(Capsalidae sensu Yamaguti, 1963)。后吸器肌质, 无柄, 圆盘状, 常前后折叠呈蚌形, 具缺刻状的肌质外环和薄的边缘瓣膜、1对中央锚钩和14个边缘小钩; 无分隔、腔室或突起。前吸器1对, 碟状。眼点 1对。咽中部不缢缩。肠支具侧分支, 后端不汇合。睾丸多个, 分布于卵巢之后的主肠支之内。雄性交接囊肌质, 位于咽之后, 包括射精管和前列腺管; 阴茎短, 基部较窄, 远端膨大, 具或不具细刺。公共生殖孔开口于虫体腹面、左前吸器的下方。卵巢球形, 位于睾丸之前。卵模较发达。子宫开口于公共生殖管。阴道开口于虫体左侧背面之咽水平。卵黄腺伴肠支分布, 卵黄囊位于卵巢左上方。卵四面体型, 单极丝。寄生于海水硬骨鱼类。

蚌盘虫属特征: 同亚科。

致谢:

华南师范大学生命科学学院 2009级研究生胡盼, 2010级研究生肖海溶、袁凯, 2011级研究生杨芳协助采集标本, 谨致谢意。

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A NEWLY RECORDED SUBFAMILY OF PSEUDONITZSCHIINAE (MONOGENEA: CAPSALIDAE) IN THE SOUTH CHINA SEA

YANG Chang-Ping1, 2, ZOU Xiao-Mei1, ZHANG Jian-Ying1and DING Xue-Juan1
(1. Guangdong Provincial Key Laboratory for Healthy and Safe Aquaculture, College of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631, China; 2. Key Laboratory of Tropical Marine Bio-resources and Ecology, South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510301, China)

A capsalid monogenean, Pseudonitzschia uku Yamaguti, 1965, that belongs to Pseudonitzschia, Pseudonitzschiinae, was discovered on the gills of Aprion virescens in Qinglan Bay of Hainan in China. The morphology and size of the specimens were consistent with the original description, except that there were anchors and marginal hooklets on their haptor, and that the recurved spines over the cirrus were missing. Therefore here we updated the description of the characteristics of the Pseudonitzschiinae subfamily and the Pseudonitzschia genus. The subfamily, genus and species were reported for the first time in China. The specimens were deposited in the Lab of Fish Parasitology of Collage of Life Sciences in the South China Normal University.Amended diagnosis of Pseudonitzschiinae: Capsalidae sensu Yamaguti, 1963. Body elliptical flattened. Haptor disc-shaped, sessile, usually folded antero-posteriorly, armed with one pair of anchors and 14 marginal hooklets; indented muscular margin and delicate marginal membrane present; without septa, loculi or papillae. Anterior attachment organ paired, sucker-shaped. One pair of eye spots. Pharynx without constriction. Intestinal limbs with lateral dendritic diverticula, not united posteriorly. Testes numerous, intercecal. Male copulatory pouch muscular, postpharyngeal, consisted of ejaculatory and prostatic ducts; cirrus short, swelled anterior, armed or unarmed. Common genital pore opening ventrally, posterior to the left anterior attachment organ. Ovary single, spherical, pretesticular; Ootype well developed; uterus opened into the common genital pore; vagina opened dorsally at the level of pharynx. Vitellaria co-extensive with intestinal branches; vitelline reservoir immediately sinistral to ovary. Egg tetrahedral, with single filament. Gill parasites of marine teleosts.

Monogenea; Pseudonitzschia uku; New record in China; Aprion virescens; South China Sea

Q959.15

A

1000-3207(2015)04-0789-05

10.7541/2015.103

2014-10-14;

2015-01-10

国家自然科学基金项目(31093430; 31172051)资助

杨长平(1986—), 男, 江西高安人; 硕士研究生; 主要从事海水鱼类单殖吸虫研究。E-mail: yangbing3524@sina.com

丁雪娟, E-mail: dingxj@scnu.edu.cn