胆胃通颗粒剂提取工艺研究*

★　关志宇　曾文雪　罗晓健　刘亚丽　朱继孝　程虹毓　刘婧　黄潇　(江西中医药大学药学院　南昌 330004)

胆胃通颗粒剂提取工艺研究*

★关志宇*第一作者：关志宇，男，副教授。研究方向：药物新制剂与生物药剂学。E-mail：adlaiguan@126.com。曾文雪罗晓健*通信作者：罗晓健，男，教授，博士生导师。刘亚丽朱继孝程虹毓刘婧黄潇(江西中医药大学药学院南昌 330004)

摘要：目的：优化胆胃通颗粒提取工艺。方法：采用正交设计实验，以柚皮苷提取量、得膏率为评价指标，优选胆胃通颗粒的提取工艺。结果：最佳提取工艺条件为：加水量为10倍量，提取时间60 min，提取次数为2次。结论：该工艺合理可行，适用于胆胃通颗粒有效成分的提取。

关键词：胆胃通颗粒剂；提取工艺；柚皮苷

随着人们饮食的不断变化，胆囊炎、胃炎患者的人数不断增加，已经成为临床常见病和多发病。并且该类疾病不易治愈，多复发，患者较痛苦。胆胃通方为临床经验方，以枳实、醋柴胡、香附子等为主要成分，可用于治疗胃炎、胆囊炎疾病，胆胃兼顾，临床疗效较好。为更好的推广该复方，制备疗效确切的药物新制剂，满足临床需要，本文对其提取工艺进行了探讨，为其进一步研究与生产提供实验依据[1]。

1仪器与材料

1.1仪器高效液相色谱仪(安捷伦1260)；KQ5200-DA型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；RE-SZD旋转蒸发器(上海青浦沪西仪器厂)。

1.2药材与试剂柴胡、枳实、香附子等(江西樟树药材公司，经江西中医学院诸小兰教授鉴定为正品药材)；柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号110722-200309)；乙腈为色谱纯，纯化水(自制)，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1柚皮苷测定方法[2-3]

2.1.1色谱条件色谱柱：phenomenex C18(250mm × 4.60 mm，5 μm)，柱温30 ℃；流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液(21∶79)，检测波长为283 nm，流速为1.0 mL/min，理论塔板数不低于3500，柚皮苷峰的拖尾因子为1.02。

2.1.2溶液的制备

2.1.2.1对照品溶液的制备精密称取柚皮苷对照品适量，置50 mL容量瓶中，加入少量甲醇溶解后定容，摇匀，制得质量浓度为0.20 mg/mL的对照品溶液，备用。

2.1.2.2样品溶液的制备将各条件下胆胃通处方提取液进行干燥，粉碎过60目筛，精密称取粉末适量，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇50 mL，精密称定，超声提取30 min，放冷，再称重，用甲醇补足损失质量，摇匀，过滤。

2.1.2.3阴性样品溶液的制备除枳实外，将胆胃通处方中各药材按照剂量称量，提取，干燥，粉碎过60目筛，精密称取粉末适量，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇50 mL，精密称定，超声提取30 min，放冷，再称重，用甲醇补足损失质量，摇匀，过滤。

2.1.3专属性实验取对照品溶液、样品溶液及阴性样品溶液各10 μL，按照“2.1.1”项色谱条件，分别进样测定，记录色谱图，结果表明其他成分对测定无干扰。

A.柚皮苷对照品；B.样品溶液；C.阴性样品溶液

2.1.4线性范围实验精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制得系列浓度对照品溶液。分别进样10 μL，测定峰面积。以对照品进样质量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，计算回归方程为：Y=1016.2X+3.375，r=0.999 9，结果表明柚皮苷在1.0～1.6 μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。

2.1.5精密度实验分别精密吸取同一批柚皮苷对照品溶液10 μL，按“2.2.1”项下色谱条件进样，平行测定6次，测得平均峰面积RSD为0.45%。

2.1.6稳定性实验取同一供试品溶液(批号：20141101)，分别于0，3，6，12，18 h进样10 μL，测定峰面积RSD为0.91%，表明供试品溶液在18 h内稳定。

2.1.7重复性实验取同一批供试品(批号：20141101)，精密称定6份，按“2.2.2”项制备供试品溶液，分别进样10 μL，测定峰面积并计算样品中柚皮苷的质量浓度RSD为1.10%，表明样品处理方法重复性良好。

2.1.8加样回收率实验精密称定已知含量的供试品(批号：20141101)9份，分别精密加入柚皮苷对照品溶液适量，照“2.2.2”项方法制备供试品溶液，并分别按照50%,100%,150%比例加入对照品溶液，进样10 μL测定峰面积，计算柚皮苷的回收率，结果平均回收率分别为101.2%,101.7%,99.5%，RSD分别为1.26%,1.32%,0.97%。

2.2浸膏得率测定

将正交设计实验每次实验提取液合并，过滤，浓缩至300 mL，精密量取30 mL，置于已干燥恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干，而后于105℃ 干燥3 h，置干燥器中冷却30min至室温，称定质量，计算浸膏得率。计算公式如下：

表1　胆胃通方水提因素水平表

表2　正交设计实验安排与结果

2.3提取工艺研究

2.3.2正交设计实验按照L9(34) 正交设计表设定加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)3因素及其各水平划分，详见表1，正交设计实验安排与结果见表2。

表3　柚皮苷提取量方差分析表

表4　浸膏得率方差分析表

2.3.3正交设计结果分析对指标柚皮苷提取量分别进行直观分析、极差分析和方差分析(SPSS)，各因素影响大小为C>A>B。根据方差分析结果可知，见表3，各因素水平间均具有显著性差异，其中因素A和因素C各水平间具有极显著性差异。但是直观分析表明，因素B的2水平和3水平间差异不大，因此确定最佳提取工艺为A3B2C3，即加水12倍量，提取3次，每次提取60 min。对指标浸膏得率进行分析，各因素影响大小为C>A>B。根据方差分析结果可知，见表4，因素C水平间具有极显著性差异，因素A水平间具有显著性差异，而B因素水平间无显著性差异。根据直观分析结果，因素A的2水平和3水平间差异很小，因素C的2水平和3水平间差异也很小，因此确定最佳提取工艺为A2B3C2，即加水10倍量，提取2次，每次提取75 min。

结合生产实际对能耗、效率和成分、药效的综合考虑确定最佳提取工艺为A2B2C2，即加水10倍量，提取2次，每次提取60 min。

2.3.4验证试验按照最佳提取工艺进行3批验证试验，结果3次试验柚皮苷提取量分别为79.87，80.77，79.26 mg，RSD为0.95%，浸膏得率分别为23.56%，22.91%，23.16%，RSD为1.41%，表明该提取工艺稳定可靠。

3讨论

枳实为胆胃通方中君药，以其所含柚皮苷的提取效果，结合复方浸膏得率作为提取工艺考察指标，能够较为全面地反应有效成分的提取效果，保证药效成分的转移。

本实验在结果分析和水平选用过程中，充分考虑了工艺参数选择对生产成本的影响。溶剂用量、提取次数增加会显著延长浓缩、干燥时间，增加能耗，影响生产效率，因此在水平间无显著性差异时，可选择较低水平。

参考文献

[1]关志宇，罗晓健，黄潇，等. 胆胃通颗粒剂制备工艺研究[J].中成药，2014，36(1)：185-188.

[2]梁远园，冯彪，祝晨蔯，等. HPLC法测定枳实药材中橙皮苷与柚皮苷的含量[J].中药新药与临床药理，2006，17(9)：359-361.

[3]刘岩. HPLC法测定参苏片中柚皮苷的含量[J].长春中医药大学学报，2014，30(3)：417-419.

Extraction Process of Dan Weitong Granules

GUAN Zhi-yu，ZENG Wen-xue，LUO Xiao-jian，LIU Ya-li，ZHU Ji-xiao，CHENG Hong-yu，LIU Jing，HUANG Xiao

JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang33000,China.

Abstract:Objective: To optimize extraction process of DanWeiTong granules. Methods： With the naringin and extract yield were carried out to achieve the best extraction technology of DanWeiTong Granules. Results : The best extraction technology was extract for 2 times, and every time for 60 min with 10 fold water. Conclusion: The optimized process is practicable and stable, applicable to extract for the effective constituent of DanWeiTong granules.

Key words:Dan weitong Granules；Extraction Process；Naringin

收稿日期：(2014-12-01)编辑：曾文雪

中图分类号：TQ461

文献标识码：A

基金项目：*江西省卫生厅中医药科研计划项目(2012A024)。