畜禽肉毒梭菌中毒症的诊治

刘伟德

（山东省安丘市畜牧局，山东 安丘 262100）

畜禽肉毒梭菌中毒症的诊治

刘伟德

（山东省安丘市畜牧局，山东 安丘 262100）

畜禽；肉毒梭菌中毒；诊断；防治

肉毒梭菌中毒症简称肉毒中毒，是机体吸收肉毒梭菌毒素后人兽共患的急性中毒病。临诊表现主要为运动神经进行性麻痹和延脑麻痹为特征，确诊需要进行实验室诊断。避免畜禽吃腐败的动物尸体和腐烂草料是预防的重点。早期治疗以抗生素为主，对症治疗可应用大剂量盐类泻剂。

1 流行病学

肉毒梭菌的芽孢广泛分布于自然界，因此人类和动物的感染多来自自然界。人类肉毒中毒基本上都由食物中含有肉毒毒素所致。本病在鸭、鸡、牛、马较为多见，绵羊、山羊次之，猪、犬、猫少见，兔、豚鼠和小鼠都很易感。其发病原因主要是由于畜禽摄食了腐败尸体、腐烂的草料而引起的。

2 临诊症状

本病潜伏期的长短取决于畜禽种类不同和摄入毒素量多少等，一般多为4～20h，长的可达数日。以及个体对毒素的敏感性等，一般为2～4h，长者可达数天或更长。本病的特有症状，基本上皆属于神经麻痹的表现。马、牛、羊等动物主要表现精神沉郁，衔草咀嚼无力，吞咽困难，肠蠕动音减弱，顽固性便秘，步态不稳，肌肉震颤，瞳孔散大，卧地不起，呼吸困难，伸展头颈以助呼吸，最后死于呼吸麻痹。家禽则主要表现为颈部肌肉麻痹，头颈软弱无力，向前低垂，翅膀、腿部肌肉麻痹，翅膀下垂，行动困难，闭目瞌睡，处于昏迷状态。中毒轻的，可以恢复。猪很少发病，主要表现肌肉进行性衰弱和麻痹，神经节细胞变性。

3 实验室检验

肉毒菌的芽孢对外界环境的抵抗力很强，广泛分布于自然界，在土壤、粪便、腐败的动植物尸体，变质的肉品、鱼类、食品和饲料以及动物肠道内容物中常有存在。存在于动物消化道内的肉毒梭菌及其芽孢，一般对动物无害处，因此从标本和病料中分离出肉毒梭菌一般也不能肯定其致病作用，因而无特别重要的诊断价值。临床上发生可疑病例时，通过调查发病原因和发病经过，根据临床症状和病理变化进行分析，可作出初步诊断。如同群动物中有多只动物发生明显运动神经麻痹症状，而体温、反射正常，剖检无特异性，可作为诊断的依据。但本病的确诊，主要依靠在饲料、肠内容物和尸体内检出毒素。

3.1检验方法

（1）被检材料中毒素的提取：常用无菌生理盐水或0.2%明胶缓冲液（pH6.5）提取毒素或作稀释。为完成全部检验程序，经处理得到的标本液最好不少于20mL，为控制杂菌可加青、链霉素。室温超过22℃时，应在冰浴中处理标本，以免毒素活性降低。有形标本研碎、浸提、离心后取上部液备用。水液标本可用如下絮凝法处理：絮凝剂一般用明矾，取水液标本500mL，滤纸过滤后，滤液中加入5%明矾水溶液2.5mL，沿同一方向缓缓搅动几分钟，静置至结絮。用薄脱脂棉层过滤，再用10～15mL稀释液洗下结絮，1000转/min离心1～2min（或待其自然沉降），吸去上清液，留下约2.5～5mL，加入缓冲液溶解备用。

（2）毒素定性检出：目前仍然沿用小鼠（或豚鼠）试验，即生物学法。

A.小鼠（或豚鼠）接种法：小鼠对各型毒素均较敏感，常采用皮下或腹腔注射（腹腔接种更为敏感）。各型肉毒毒素均能分别被各自的相应型抗毒素中和而消除毒性作用，可借此反应进行毒素、抗毒素动物体中和试验，以对毒素进行定性鉴定。兰州生物制品研究所生产有A-F混合型诊断血清，每毫升能中和相应型毒素至少104小鼠致死量。操作：取检样液（可适当稀释）分为三份，一份加等量稀释剂，一份加等量稀释剂后煮沸15min（水浴中），另一份加等量混合型肉毒诊断血清37℃作用45min。三种检样液分别腹腔注射15～20g小鼠2只，每只0.5mL，观察动物反应到第四天。若煮沸与加血清的2组动物健康存活，而未作任何处理的1组动物呈现典型的麻痹症状：先失声（镊子夹尾巴时不能叫），四肢无力，继而腰部凹陷如“蜂腰”，全身瘫软，呼吸困难，一般2日内因呼吸衰竭而死亡（如毒素含量大，可于24h内急性死亡），据此表明标本含有肉毒毒素。

某些肉毒梭菌产生的毒素前体，因毒力弱，毒素检出可能得出阴性结果。对此可用胰酶进行激活处理（检样液与1：250胰蛋白酶的水溶液按9：1混合，调pH6.0～6.2，37℃作用45min），使之活化提高活力。患畜血液或肠道内容物不作此处理，因毒素前体在肠道内已被激活。

B.禽眼接种法：无小鼠时可选用禽类如鸡、鸽、家雀等作眼睑注射，但不同禽类对不同型别的毒素敏感性也有差别。鸡和家雀对A型较敏感，鸽对C型较敏感。致人兽中毒的主要毒素型都可用鸡、鸽、家雀检出。试液分为二份，一份不加热灭活，另一份100℃加热15min灭活。用鸡作试验，分别吸取上述液体，由内眼角的下方注射下眼睑皮下（一侧试验用，另一侧供对照），注射后眼睑隆起，几分钟后接种液被吸收，眼睑复原。如于注射0.5h后试验的眼睑发生麻痹，逐渐闭合，而对照眼睑仍正常。一般毒素含量越多，合眼越快。如毒素超过实验禽体致死量，试验鸡则出现麻痹和呼吸困难等症状，经过几小时到十几小时死亡。本试验也可用2只以上禽只作中和试验。须注意，如注射后20min内死亡，或注射局部出现发炎坏死，即使有合眼症状也不能定为肉毒毒素所引起。

（3）毒素分型鉴定：因抗毒素血清有严格的型特异性，因此预防和治疗都要求作出毒素的型别鉴定。中和试验是证明毒素和鉴定型别最可靠的方法。为获得正确的结果，含毒素的样品、抗毒素血清都应作适当的稀释。毒素可经小鼠腹腔接种后，按死亡时间概略估计毒素的含量。一般0.5～1h内死亡，毒素含量为105小鼠最小致死量；2h左右死亡，为104小鼠最小致死量：3h左右死亡，为103小鼠最小致死量；5h后死亡，毒素含量一般在10个小鼠最小致死量内。中和试验前，将检样清液稀释成10～100个小鼠最小致死量/mL。如用兰州生物制品研究所生产的A、B、C、D、E、F六型分型血清，可将检样液分装8支试管，作如此处理：第一支：加等量明胶缓冲液或生理盐水；第二支：加等量明胶缓冲液或生理盐水后，加热到80℃30min；第三至第八支：分别加等量A、B、C、D、E、F肉毒诊断血清，置37℃处理45min。

各支分别腹腔注射体重15～20g健康小鼠2只，每只0.5mL，观察4d。如第二组和第三至第八组中某组小鼠得到保护，其他各组均在观察期内以肉毒中毒症状死亡，则该中和组的型别即为标本中毒素的型别。为节省诊断血清，也可先用A～F混合型肉毒血清作中和试验，出现阳性结果时再进一步分型。鉴于我国动物肉毒中毒除马外主要为C型，人中毒主要是A、B及E型，可酌情先按常见的型别边行中和试验，必要时再扩大范围。

多年来，为了使肉毒中毒的实验诊断更快速、更简便，克服需要实验动物有时遇到的困难，人们已对数种免疫血清学方法进行过研究。已报告的血细胞凝集抑制试验用于检出肉毒毒素，和敏感的小鼠腹腔接种法的检出量接近，可用以鉴定A、B、C型毒素，但不适于其他型。琼脂扩散试验、免疫荧光和酶联免疫吸附试验（ELISA）也都有报告，可用于肉毒毒素检验的鉴定，但需进一步完善，目前但还不能完全代替生物学法。

（4）肉毒梭菌检出试验

A.增菌产毒培养试验：取标本接种于适宜的培养基（如肝肉汤培养基），30℃者养5d，离心取上清液作肉毒毒素检出试验，方法同前。据此可确认标本中是否含有肉毒梭菌，并确定型别。

B.分离培养和鉴定：特殊需要时，可取上述增菌产毒培养物接种于卵黄琼脂平板，30～35℃厌氧培养2～3d。挑选表面和周围有虹彩样毛泽的菌落（除G型外，各型肉毒梭菌产生的脂酶能分解卵黄中的脂质，因而会出现此色泽），再接种增菌产毒培养基培基，并进行肉毒毒素检出试验，据此可确认分离到的菌落。

3.2 判定标准

（1）初步报告：有下列情况之一者，可初步报告标本中含有肉毒毒素：A.小白鼠腹腔接种时，加热灭活组全部活存，毒素组有典型的肉毒中毒症状，并于20min后到4d内死亡。B.禽眼睑闭合试险时，加热灭活对照组不闭眼，试验毒素组闭眼，或因呼吸困准缓慢死亡。C.增菌产毒培养A验和分离培养物接种动物，结果与上两条之一相符。

（2）确定报告：混合型肉毒诊断血清中和试验即可确定报告检出肉毒毒素，分型中和试验阳性可确定型别。

3.3 注意事项

（1）肉毒毒素对热和碱不稳定：环境温度超过25℃时，应将含毒标本放冰浴叶操作。pH6.0和4℃是保存毒素的稳定条件。

（2）标本的保存：有的标本，特别是粪便，或污染较重的食品、饲料，可能含有致畜禽急死的其他毒性物质，以致得出假阳性结果；或由于畜禽提前死于其他毒性物质而掩盖了中毒症状，以致无法判定结果。为防止这些现象，可对供试液作如下处理：①冻放逾夜，然后融化。②再适当稀释。③加适量的健康牛普通血清（中和检样中的细菌内毒素）。④透析（除掉小分子毒性物质）。⑤供试液用稀盐酸，调pH值3.0～4.0，收集沉淀，用适量磷酸盐缓冲液（pH7.0）溶辞。⑥防止试验动物受其他病原菌的感染。

4 防治措施

首先要避免畜禽吃腐败的动物尸体和腐烂饲料。在经常发生本病的地区，可用同型类毒素进行预防接种。治疗本病，在早期可用多价抗毒素，静脉或肌肉注射，4～6h重复一次，直至病情缓解为止。在毒素型确立后，用同型抗毒素治疗本病。对症治疗可用大剂量盐类泻剂，以促进消化道内毒素的排除。例如，患鸭可饮用5%硫酸镁溶液作缓泻，以促进消化道内毒素的排出。

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[3]徐晶，等.鸭肉毒梭菌中毒的诊治及体会[J].养殖与饲料. 2010（7）44-45.

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．10.014

刘伟德（1974～），山东省安丘人，本科，中级兽医师