兔病毒性出血症的流行、诊断及防控

2015-02-25汪亮

畜牧兽医科技信息 2015年10期

关键词：血凝悬液缓冲液

汪亮

（黑龙江省大庆市大同区畜牧兽医水产局，黑龙江大庆 163515）

兔病毒性出血症的流行、诊断及防控

汪亮

（黑龙江省大庆市大同区畜牧兽医水产局，黑龙江大庆 163515）

兔病毒性出血症又名兔瘟，是由兔病毒性出血症病毒所引起的兔的一种急性败血症、高度接触性、致死性、以全身实质器官出血为主要特征的传染病。

1 流行病学

本病的主要传染源是病兔和带毒兔，传播途径主要为病兔或带毒兔与健康兔接触而感染，也可间接传播。本病只发生于家兔，毛用兔的易感性略高于皮用兔，其中长毛兔最易感，哺乳仔兔很少发病死亡。本病发病急，病死率高，常呈爆发性流行，发病率和病死率均高达95%以上。一年四季均可发生，北方以冬春季多发，可能与冬季寒冷、饲料单一有关。

2 临诊症状

潜伏期1～3d。可分3型：

2.1 最急性型多见于非疫区或流行初期，常发生于夜间，无任何前兆或仅表现短暂兴奋，突然倒地，抽搐，尖叫数声而死。

2.2 急性型病兔食欲减少或停止，精神沉郁，被毛粗乱，结膜潮红，体温升高达41℃以上。临死前病兔瘫软，不能站立，但不时挣扎，高声尖叫，抽搐，鼻孔流出泡沫性液体，死后呈角弓反张。

2.3 慢性型多见于老疫区或流行后期。潜伏期和病程较长，精神不振，采食减少，迅速消瘦，衰弱而死。耐过兔生长缓慢，发育较差。

3 病理变化

本病以实质器官淤血、出血为主要特征。气管黏膜充血、出血，有多量带血泡沫淤塞。肺充血、出血，支气管管腔中有带血泡沫阻塞。心肌变性，心内膜及外膜下有点状出血。腹腔积水，呈淡红色乃至血色。肝肿大淤血，肝实质脂肪变性，呈浅棕色或土黄色。脾肿大呈紫黑色。肠系膜淋巴结肿大出血。

4 实验室检验

兔病毒性出血症检疫检验常用方法有间接酶联免疫吸附试验、血凝试验和血凝抑制试验。

4.1 器材准备（1）96孔V型或U型微量板，微型振荡器，50μL移液器。（2）pH7.2、0.01mol/L磷酸盐缓冲液配制。甲液：十二水磷酸氢二钠35.8g，加蒸馏水1000mL。乙液：二水磷酸二氢钠15.6g，加蒸馏水1000mL。使用时取甲液72mL、乙液28mL，加氯化钠8.76g，120℃高压灭菌30min。（3）1%人“O”型血球：加入10～20倍的生理盐水或磷酸盐缓冲液于人“O”型抗凝血中，洗涤3～4次，每次以2000转/分离心15min，吸取上层血浆、白细胞等上清液，制成1%红细胞悬液。（4）被检病料的处理：取病死兔肝脏剪碎，用生理盐水或磷酸盐缓冲液作1：10稀释，研制成悬液待检。

4.2 血凝试验（检测抗原）在血凝板上每排2～11孔各加入磷酸钠缓冲液25μL，然后在第一孔和第二孔各加入病料悬液25μL，用微量稀释器从第二孔依次将病毒作倍比稀释至第十一孔，弃去25μL。第十二孔为正常兔肝悬液对照，每孔加入1%人“O”型红细胞悬液25μL，于微型振荡器摇均，置37℃温箱45min，待对照孔红细胞完全沉淀后，观察血凝图象判定。血凝试验结果判定：以出现“＋＋”凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价。血凝价高于1:2以上时，可判为阳性。多数病兔的肝组织悬液，病毒血凝价在1：80～1：640之间。计算含4个血凝单位的抗原浓度：抗原应稀释倍数=血凝滴度（血凝价）/4。

4.3 血凝抑制试验（检测血清抗体）血凝抑制试验可进一步鉴定病毒或进行免疫监测等。（1）阳性血清：按常法对健康兔用兔瘟疫苗进行免疫。采集血液并分离血清，冰冻保存备用。血凝抑制价应在1:320以上，用前作1：10稀释。（2）阴性血清：血凝抑制价应在1：5以下，用前作1：10稀释。（3）被检血清：试验前作1：5稀释。于微量板的第二孔至第十二孔中加入磷酸盐缓冲液各50μL。然后在第一孔和第二孔各加入1：5稀释的被检血清50μL，用微量稀释器从第二孔依次作倍比稀释至第十孔，最后弃去50μL。第十一孔为阳性血清对照，第十二孔为抗原对照。各孔加入浓度为4个单位的病毒抗原50μL。置室温（18～20℃）作用20min。每孔加入1%入“O”型红细胞悬液50μL，振荡后室温静置30min，观察结果。血凝抑制试验结果判定：血清对照、红细胞对照、阳性血清对照结果应为不凝集红细胞，抗原对照、阴性血清对照应出现凝集现象，本试验成立。以完全抑制红细胞凝集的最大稀释度为该血清的血凝抑制滴度。血凝抑制价在1：10以下的家兔，不能抵御兔出血症病毒的攻击。