高白细胞标本对仪器法网织红细胞计数的干扰

李　杰，邢　辉

(1.钟祥市人民医院 检验科，湖北 钟祥431902；2.华中科技大学同济医学院附属协和医院 检验科，湖北 武汉430022)



高白细胞标本对仪器法网织红细胞计数的干扰

李杰1*，邢辉2

(1.钟祥市人民医院 检验科，湖北 钟祥431902；2.华中科技大学同济医学院附属协和医院 检验科，湖北 武汉430022)

摘要：目的观察高白细胞标本对仪器法网织红细胞计数(%)及未成熟网织红细胞组份计数(IRF%)测定的干扰。方法使用血液分析仪对30例高白细胞标本(>300×109/L)进行网织红细胞计数，然后以稀释液对标本进行不同浓度的稀释后再进行网织红细胞计数，同时将不同浓度标本进行手工法网织红细胞计数。结果30例标本中有11例标本仪器网织红细胞计数结果及未成熟网织红细胞组份计数结果与手工法结果相比偏高，在稀释到一定浓度(100×109/L左右或更低)后网织红细胞浓度与未成熟网织红细胞组份比例明显下降，计数结果与手工法结果相符。结论高白细胞血样进行网织红细胞计数时会受到白细胞的干扰，通过对标本进行稀释后再进行测定可得到正确的网织红细胞结果及未成熟网织红细胞组份比例。

(ChinJLabDiagn,2015,19:1114)

网织红细胞计数是临床检验的常规项目之一，其浓度测定对疾病的诊断及治疗效果判断有重要意义，故结果的准确性十分重要。目前网织红细胞计数多使用自动化的血液分析仪进行测定，仪器使用荧光染料对标本进行处理后自动分析，除提供网织红细胞的浓度外还提供其分级参数如高荧光强度网织红细胞、中荧光强度网织红细胞、低荧光强度网织红细胞、未成熟网织红细胞组份等，这些参数已被广泛的应用到各种疾病的诊断和治疗之中[1-4]。但我们在工作中发现高白细胞浓度血样在进行网织红细胞计数时结果会受到白细胞的干扰，通过对标本进行稀释后再测定可得到正确的网织红细胞及组份结果。

1材料与方法

1.1　仪器与试剂

日本SYSMEX公司XE-5000型全自动血液分析仪及配套试剂。网织红细胞染液(贝索公司)，双目显微镜(奥林巴斯公司)。

1.2　标本来源

钟祥市人民医院血液科2013年9月-12月血常规检验高白细胞标本共30例，其白细胞浓度均大于>100×109/L。

1.3　测试方法

仪器每日开机后均使用高、中、低配套质控物进行测试，测试结果合格后再进行标本测试。首先进行原倍标本CBC+DIFF+RET测试，然后用配套稀释液将标本进行不同浓度稀释后再进行CBC+DIFF+RET测试，观察其结果中网织红细胞浓度(%)变化及各组份的变化。同时将各浓度标本按全国临床检验操作规程进行手工法网织红细胞计数[5]。

1.4　统计学方法

2结果

2.1　实验结果

仪器测定30例标本中有11例标本在稀释到一定浓度(100×109/L左右或更低)时网织红细胞浓度明显下降。受干扰的病例稀释前后测试结果见下表1。

从上表可以看出，11例标本网织红细胞及未成熟网织红细胞组份测试结果随标本稀释到一定浓度时(100×109/L左右或更低)明显下降,与稀释前相比差异有统计学意义(P<0.05)。

±SD)

2.2　仪器法散点图分析

从仪器散点图可见，X轴侧向荧光(FSC)红细胞区与血小板区可明显区分，但Y轴前向散射光(SFL)散点与正常图形相比，末端出现许多白色散点与网织红细胞散点混淆。在提示信息中均提示“RET Abn Scg”，提示散点图异常(图1)。异常的散点图及提示信息在标本稀释后测定时不再出现(图2)。

图1白细胞偏高异常网织红细胞散点图图2白细胞偏高标本稀释后正常网织红细胞散点图

2.3　仪器法与手工方法结果相比

除11例标本外，各标本原倍及稀释后标本网织红计数结果两种方法相比差异无统计学意义。11例标本计数结果偏高，两者相比差异有统计学意义(仪器：9.22±5.57%，手工2.13±1.59%，P<0.001)。但当对标本进行稀释后(100×109/L左右或更低)两种结果差异无统计学意义(仪器：1.91±0.97%，手工2.13±1.59%，P>0.05)。

3讨论

XE-5000血液分析仪测定网织红细胞计数采用荧光染色和激光测量的原理，使用聚次甲基染料对细胞RNA进行染色，同时使用噁嗪对细胞DNA进行染色。由于白细胞所含DNA量远远大于网织红细胞所含RNA量，故白细胞荧光强度远大于网织红细胞的荧光范围而网织红细胞的荧光强度又远大于成熟红细胞，仪器可对白细胞，网织红细胞，成熟红细胞进行准确的区分计数。仪器除了能客观地计数网织红细胞外，还能根椐其RNA含量计算网织红细胞的成熟程度并对网织红细胞分群，客观地将网织红细胞分成高荧光强度网织红(HFR)、中荧光强度网织红(MFR)、低荧光强度网织红(LFR)等组份，同时还能提供网织红细胞中血红蛋白含量(Ret-He)等参数。与手工显微镜法网织红细胞测定相比，仪器法具有分析速度快，分析精度高，报告参数多等优点[6，7]，目前得到了广泛的应用。

一般情况下从仪器散点图可以看出，网织红细胞与成熟红细胞由于荧光强度不同，散点图可以明显区分，无异常干扰。但在11例受干扰标本的散点图中可以看到X轴侧向荧光(FSC)红细胞区与血小板区可以区分，但Y轴前向散射光(SFL)散点与正常图形相比，末端出现许多白色散点与网织红细胞散点混淆，网织红细胞散点图末端为高荧光强度网织红细胞，出现这些异常散点导致网织红细胞计数结果偏高且对网织红细胞分群产生影响，导致高荧光强度网织红细胞及网织红细胞总数结果异常偏高。这些异常散点在白细胞数量正常标本及高白细胞标本稀释后测定散点图中未见出现，故异常散点的出现应为标本中高白细胞干扰所致。

从本研究结果中可以发现，部分高白细胞血样仪器法网织红细胞测试结果偏高。由于此类标本均为血液病患者标本，而网织红细胞计数对血液系统疾病患者的诊断及治疗均具有重要意义，保证结果的准确性尤为重要。目前对网织红细胞结果复核一般是当数量大于预定程度或散点图异常时进行镜检[8-10]，本研究中11例标本网织红细胞计数结果均达到镜检标准需人工镜检，但人工镜检耗时较长，分析精度低。因此在临床工作中对白细胞高值标本可使用稀释液对标本进行稀释，在白细胞含量<100×109/L时再进行仪器法网织红细胞测试也可以保证结果的准确性且较手工法测试方便快捷，值得推广。

参考文献：

[1]Yesmin MS,Sultan T,Roy CK,et al.Highly fluorescent reticulocyte count is the early predictor of haematopoietic recovery on remission induction phase[J].Mymensingh Med J,2013,22(1):59.

[2]Urrechaga E,Borque L,Escanero JF.Erythrocyte and reticulocyte indices in the assessment of erythropoiesis activity and iron availability[J].Int J Lab Hematol,2013,35(2):144.

[3]Schoorl M,Schoorl M,Linssen J,et al.Efficacy of advanced discriminating algorithms for screening on iron-deficiency anemia and β-thalassemia trait:a multicenter evaluation[J].Am J Clin Pathol,2012,138(2):300.

[4]Shibayama M,Takami A,Kimura M,et al.Usefulness of reticulocyte hemoglobin equivalent for the safety of pre-operative autologous blood donation[J].Rinsho Byori,2011,59(6):565.

[5]叶应妩，王毓三．全国临床检验操作规程[M]．第3版．南京：东南大学出版社，1991．

[6]甘文，魏明，叶倩．Sysmex XE-2100全自动血球分析仪与手工法计数网织红细胞的比较[J]．实用临床医学，2006，7(7)： 14.

[7]吴小梅，张秋萍．Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪计数网织红细胞与手工法结果的比对分析[J]．国际检验医学杂志，2012，33(16)：2013.

[8]XE-2100血细胞分析复检标准制定协作组.Sysmex XE-2100自动血细胞分析和白细胞分类的复检规则探讨[J]．中华检验医学杂志，2008，31(7)：752.

[9]丛玉隆，王昌富，乐家新．血细胞自动化分析后血涂片复审标准制定的原则与步骤[J]．中华检验医学杂志，2008，31(7)：729.

[10]Barnes PW,McFadden SL,Machin SJ,et al．The international consensus group for hematology review:suggested criteria for action following automated CBC and WBC differential analysis[J].Lab Hematol,2005,11(2):83.

关键词：白细胞；血液分析仪；网织红细胞；未成熟网织红细胞组份

The interference of high leukocyte samples on the reticulocyte count with hematology analyzerLIJie1，XINGHui2.(1.DepartmentofClinicalLaboratory，ThePeople'sHospitalofZhongxiang,Zhongxiang431902,China;2.DepartmentofClinicallaboratory，theUnionHospital,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430022,China)

Abstract:ObjectiveTo observe the interference of high leukocyte samples on the reticulocyte count (%) and immature reticulocyte fraction (IRF%) count with hematology analyzer.Methods30 cases of high leukocyte samples (>300×109/L) were analyzed with hematology analyzer of reticulocyte count,and then to be reanalyzed after these samples were diluted with dilution to different concentrations,and reticulocyte count of different concentrations samples were analyzed by manual methods at the same time.ResultsReticulocyte count (%) and immature reticulocyte count (IRF%) of 11 cases in the 30 cases specimens with hematology analyzer were high than manual method results,when these samples were diluted to different concentrations(100×109/L or lower),the results of the hematology analyzer decreased significantly,and the results were closed to the results of manual method.ConclusionThe reticulocyte count with hematology analyzer can be interfered by white blood cells in high leukocyte samples,and the interference can be get corrected by the dilution of the samples.

Key words:Leukocyte；Blood analyzer；Reticulocyte；Immature reticulocyte fraction

(收稿日期：2014-06-11)

文献标识码：A

中图分类号：R446.11+3

文章编号：1007-4287(2015)07-1114-03

*通讯作者