脂联素基因多态性与妊娠期糖耐量受损相关性研究

栾媛媛,郭晓辉，杨俊红

(1.唐山市妇幼保健院 妇产科,河北 唐山063000；2.唐山市第二医院)



脂联素基因多态性与妊娠期糖耐量受损相关性研究

栾媛媛1,郭晓辉2，杨俊红1

(1.唐山市妇幼保健院 妇产科,河北 唐山063000；2.唐山市第二医院)

摘要：目的探讨脂联素基因多态性与妊娠期糖耐量受损相关性。方法选取2013年2月-2014年2月我院收治的妊娠期糖尿病患者共60例，以及选取同期我院体检糖耐量正常的孕妇共60例，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析脂联素基因多态性位点(+276G/T、+45T/G、-3971A/G)。结果脂联素基因、276、+45位点的等位基因频率经过Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验指出各基因频率已达遗传平衡(P>0.05)。两组的脂联素基因+276G/T等位基因、基因型频率分布对比，均不存在显著性差异(P>0.05)。受损组患者的G等位基因频率明显低于正常组(P<0.05)。两组的脂联素基因+45T/G基因型频率分布对比，均不存在显著性差异(P>0.05)。两组的脂联素基因-3971的G、A等位基因、基因型频率分布对比，均存在显著性差异(P<0.05)。结论本文推测脂联素基因多态性+45T/G可能是妊娠糖尿病发病的易感位点之一，-3971位点A等位基因可能为妊娠糖尿病的一个危险原因，因此监测孕妇此位点能预测妊娠期糖尿病的发生，从而及早积极处理多种危险因素，从而有助于早期预防妊娠期糖尿病，降低远期并发症发生及对于胎儿不佳的影响。

(ChinJLabDiagn,2015,19:1093)

妊娠期糖尿病(GDM)为妊娠期一种常见的并发症，大概占妊娠孕妇的4%。妊娠期糖尿病给孕妇和胎儿带来严重的影响，对孕妇和婴儿的危害均极大。近年资料显示，血清脂联素水平的减少和胰岛素抵抗(IR)与妊娠期糖尿病发生存在着密切的关联[1,2]。本文选取2013年2月-2014年2月我院收治的妊娠期糖尿病患者共60例，探讨脂联素基因多态性与妊娠期糖耐量受损相关性，现报道如下。

1资料与方法

1.1　临床资料

选取2013年2月-2014年2月我院收治的GDM患者共60例，年龄21-43岁，平均年龄(30.1±2.5)岁，分娩孕周25-29周，平均孕周(27.6±1.9)周。选取同期我院体检糖耐量正常的孕妇共60例，年龄22-42岁，平均年龄(29.7±2.3)岁，分娩孕周24-28周，平均孕周(27.2±2.0)周。纳入标准：均为单胎初产妇；不存在原发性高血压等心血管病、糖尿病、肝肾病等病史；未采用任何的激素类药物或者降糖药物。两组患者在年龄、分娩孕周等方面比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2　方法

两组于产前首次检查的时候空腹下对体质量、身高、血压进行测量，到孕24-28周行50 g葡萄糖负荷试验，1 h之后抽取其静脉血液，若血糖不低于7.8 mmoL/L则7 d后给予100 g葡萄糖耐量试验，分别在空腹和服糖后1、2、3 h抽取静脉血4次，血清用来对血糖、血真胰岛素进行检测，而血细胞用来提取基因组DNA。运用己糖激酶法来测定血糖，而以酶联免疫吸附法来测定真胰岛素。

采用血液基因组DNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)提取基因组DNA。模板为基因组DNA，于反应体系50 μl进行聚合酶链反应。上、下游引物分别为5′GATGGACGGAGTCCTTTGTAGGTC3′、5′CCAAATCACTTCAGGTTGCTTATG3′；F：aatcagagtccgcttggt，R：aacttcctcactgcttgtca，由英骏生物技术有限公司(上海)合成。聚合酶链反应条件是：95℃预变性4 min，95℃变性45 s，55℃退火30 s，72℃延伸60 s，33次循环，72℃末端延伸10 min。由北京华大中生科技发展有限公司对聚合酶链反应的产物进行DNA测序，测序的结果经两名专业人员进行阅读并基因型确定。

1.3　统计学分析

2结果

2.1　+276G/T基因与糖耐量受损相关性

两组的脂联素基因+276G/T基因与糖耐量受损相关性见表1。结果显示，两组的脂联素基因+276G/T等位基因频率分布对比，均不存在显著性差异(P>0.05)。两组的脂联素基因+276G/T基因型频率分布对比，亦均不存在显著性差异(P>0.05)。经过Hardy-Weinberg平衡检验，脂联素基因+276G/T基因的等位基因频率显示各基因频率已达遗传平衡(P>0.05)。

表1　两组的脂联素基因+276G/T基因与糖耐量受损相关性(n，%)

2.2　+45T/G基因与糖耐量受损相关性

两组的脂联素基因+45T/G基因与糖耐量受损相关性见表2。结果显示，两组的脂联素基因+45的G等位基因频率分布对比，存在显著性差异(P<0.05)，受损组患者的G等位基因频率明显低于正常组T等位基因频率明显高于正常值。两组的脂联素基因+45T/G基因型频率分布对比，均不存在显著性差异(P>0.05)。经过Hardy-Weinberg平衡检验，脂联素基因+45T/G基因的等位基因频率显示各基因频率已达遗传平衡(P>0.05)。

表2　两组的脂联素基因+45T/G基因与糖耐量受损相关性(n，%)

注：与正常组比较，*P<0.05

2.3　-3971A/G基因与糖耐量受损相关性

两组的脂联素基因-397A/G基因与糖耐量受损相关性见表3。结果显示，两组的脂联素基因-3971的G、A等位基因频率分布对比，均存在显著性差异(P<0.05)，受损组患者的G等位基因频率明显低于正常组，而A等位基因频率明显高于正常组。两组的脂联素基因的基因型频率分布对比，均存在显著性差异(P<0.05)。经过Hardy-Weinberg平衡检验，脂联素基因-3971A/G基因的等位基因频率显示各基因频率已达遗传平衡(P>0.05)。

表3　两组的脂联素基因-3971A/G基因与糖耐量受损相关性(n，%)

注：与正常组比较，*P<0.05

3讨论

妊娠期糖尿病的发病率呈日益上升的趋势而引起了广泛的关注，GDM严重地危及到产妇和婴儿的健康，且跟许多如子痫前期、新生儿低血糖、巨大儿等不良的妊娠结局有着密切的关系。GDM的发病机制与病因较复杂，普遍被认为与胰岛素分泌缺陷及胰岛素抵抗等有关，跟2型糖尿病的病理生理机制与遗传易感性相似。资料表明GDM在妊娠期妇女的发生率大概是1%-4%，且日益增加，越来越受到了国内外妇产科学者的关注[3]。脂联素为目前发现的一种特异性蛋白，其由脂肪细胞产生，在脂、糖类代谢以及胰岛素抵抗方面发挥着关键的作用，与GDM有着一定关联[4,5]。

人体血浆脂联素含量大约占血浆总蛋白量0.01%，是5-30 μg/mL。脂联素是一种胰岛素超敏化激素，为人类脂质代谢、血糖稳态调控网络中的一个关键调节因子，能够显著提高胰岛素糖元异生，加强骨骼肌细胞的糖吸收与脂肪酸氧化，拮抗肝脏糖形成，影响着糖类和脂肪的代谢，可以直接地对糖代谢以及胰岛素的敏感性进行调节，与2型糖尿病、胰岛素抵抗、肥胖等有着密切的关系[6]。脂联素基因存在2个内含子以及3个外显子，全基因组扫描表明脂联素基因定位于染色体 3q27，这个区域存在代谢综合征以及2型糖尿病的易感位点。

脂联素的水平跟妊娠糖尿病间有着一定关系，研究发现GDM跟脂肪组织内脂联素表达降低，胰岛素抵抗水平增加有关[7]。有资料指出，脂联素基因多态性跟妊娠糖尿病亦有着相关性。Low等[8]研究了妊娠马来西亚妇女70例，发现脂联素基因SNP+45T/G跟妊娠糖尿病的发生与脂联素减少关系显著。陈震宇等[9]发现脂联素基因 -11426A/G位点多态性可能跟妊娠糖尿病的发病相关，妊娠糖尿病孕妇的G等位基因分布频率上升，而A/G突变可能由于抑制血清脂联素水平影响妊娠糖尿病出现。此外，国外学者通过对比79例妊娠糖尿病病人跟169例健康妊娠孕妇，发现脂联素基因+45T/G、-11377C/G可能跟妊娠糖尿病的发病有相关性[10]。

本研究结果显示，脂联素基因+276、+45位点的等位基因频率经过Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验指出各基因频率已达遗传平衡(P>0.05)，说明本院受试者的脂联素基因+276、+45位点存在T/G单核苷酸多态性。糖耐量受损组与正常组的+276G/T等位基因和基因型频率对比，不存在显著性差异(P>0.05)，说明脂联素基因单核苷酸多态性+276G/T跟妊娠糖尿病不存在显著的相关性。糖耐量受损组与正常组的+45T/G基因型频率对比，不存在显著性差异(P>0.05)，但是糖耐量受损组患者的G等位基因频率明显比正常组高(P<0.05)，说明G等位基因可能是危险因素，跟妊娠糖尿病相关。此外，本研究结果显示脂联素基因3971A/G与本院妊娠糖尿病有关，其中A等位基因可能为妊娠糖尿病的一个危险原因。综上所述，本文推测脂联素基因多态性+45T/G可能是妊娠糖尿病发病的易感位点之一，-3971位点A等位基因可能为妊娠糖尿病的一个危险原因，因此监测孕妇此位点能预测妊娠期糖尿病的发生，从而及早积极处理多种危险因素，从而有助于早期预防妊娠期糖尿病，降低远期并发症发生及对于胎儿不佳的影响。

参考文献：

[1]秦卫胜,杨文东.脂肪细胞因子与妊娠期糖尿病相关性研究[J].中华临床医师杂志,2012,6(5):162.

[2]Li S,Shin HJ,Ding EL,et al.Adiponectin levels and Risk of type2 diabetes:a systematic review and meta-analysis[J].The Journal of The American Medical Association,2009,302:179.

[3]Lambrinoudaki I,SA,Creatsas G.Genetics in gestational diabetes mellitus:association with incidence,severity,pregnancy outcome and response to treatment[J].Curr Diabetes Rev,2010,6(6):393.

[4]陈雪香,魏碧蓉.脂联素基因多态性与妊娠糖尿病关系研究进展[J].中国优生与遗传杂志,2013,21(7):3.

[5]林显丽,张瑛.杨莹.中国汉族人群2型糖尿病与脂联素基因SNP-11377位点相关性的 Meta分析[J].中国糖尿病杂志,2012,20(8):561.

[6]范玉平,郑艳莉.糖代谢异常孕妇血清脂联素、C反应蛋白水平与围产儿结局的关系[J].标记免疫分析与临床,2010,17(5):302.

[7]罗毅平,赵一俏,薛耀明.脂联素基因表达与妊娠糖尿病关系[J].中国公共卫生,2010,9(9):1103.

[8]Low CF,Chong PP,Idris F,et al.Adiponectin SNP45TGis associated with gestational diabetes mellitus[J].Archives of Gynecology and Obstetrics,2011,283:1255.

[9]陈震宇,杜鹃.脂联素基因多态性与妊娠期糖尿病的相关性研[J].现代妇产科进展,2011,20(9):718.

[10]Gueuvoghlanian-Silva BY,Torloni MR,Mattar R,et al.Profile of inflammatory mediators in gestational diabetesmellitus:phenotype and genotype[J].American Journal of Reproductive Immunology,2012,67(3):241.

关键词：脂联素基因多态性；妊娠期；糖耐量受损；相关性

Study on the correlation between the amount of damage of adiponectin gene polymorphism with gestational impaired glucose toleranceLUANYuan-yuan，GUOXiao-hui，YANGJun-hong.(DepartmentofObstetricsandGynecology，MaternalandChildHealthHospitalofTangshan,Tangshan063000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the association of adiponectin gene polymorphism with gestational impaired glucose tolerance correlation.Methods60 Patients with gestational diabetes from 2013 February -2014 February in our hospital,and 60 Patients in our hospital physical examination of pregnant women with normal glucose tolerance,using polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis of adiponectin gene polymorphism loci Technology (+276G/T,+45T/G,-3971A/G).ResultsAdiponectin gene +276,+45 locus allele frequencies after Hardy-Weinberg law of genetic equilibrium test and points out that each gene frequency has reached genetic equilibrium (P>0.05).The two group of adiponectin gene +276G/T allele,genotype frequency distribution of contrast,there was no significant difference (P>0.05).The damaged group of patients with the G allele frequency was significantly lower than that of normal group (P<0.05).Adiponectin gene +45T/G genotype frequency distributions were compared between the two groups,there was no significant difference (P>0.05).Adiponectin gene -3971 of the two groups of G,A allele and genotype frequency distribution of contrast,there was significant difference (P<0.05).ConclusionThe speculative +45T/G adiponectin gene polymorphisms may be susceptible to pregnancy diabetes loci of -3971,A allele gene may be a risk of gestational diabetes causes,so this site monitoring of pregnant women can predict the incidence of diabetes in pregnancy,thus early active treatment of multiple risk factors,which contribute to the beneficial to early prevention gestational diabetes mellitus,reduce complication and effect on fetal bad.

Key words:adiponectin gene polymorphisms; pregnancy; impaired glucose tolerance; correlation

(收稿日期：2014-06-21)

文献标识码：A

中图分类号：R587.1

文章编号：1007-4287(2015)07-1093-04