高效液相色谱法测定益母颗粒中盐酸水苏碱含量

钟妍

（广西壮族自治区食品药品检验所，广西 南宁 530021）

高效液相色谱法测定益母颗粒中盐酸水苏碱含量

钟妍

（广西壮族自治区食品药品检验所，广西 南宁 530021）

目的 建立测定益母颗粒中盐酸水苏碱含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱采用强阳离子交换（SCX100A）柱（250 mm×4．6 mm，5 m），流动相为 15 mmol／L磷酸二氢钾（含0．04%三乙胺，0．15%磷酸），检测波长为192 nm。结果 盐酸水苏碱进样量在0．258～5．160 g范围内与峰面积线性关系良好(r=0．999 8，n=6)，平均加样回收率为97．45%，RSD=0．81% （n=6)。结论 该法简便、准确、专属性强、重复性良好，可用于益母颗粒的质量控制。

高效液相色谱法；益母颗粒；盐酸水苏碱

益母颗粒由益母草、当归、川芎、木香4味中药材加工提取而 制成，具有活血调经、行气止痛功效，临床用于气滞血瘀、月经不调、痛经、产后瘀血腹痛等症。方中益母草为君药，活血化瘀效佳，因此对益母草药味进行有效的质量控制必不可少。其药品标准目前收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂（第九册）》中，原标准中未建立任何含量测定方法对其进行定量控制。益母草的质量控制手段多采用薄层色谱扫描法[1]和高效液相色谱法测定盐酸水苏碱的含量，其中用高效液相色谱法测定含量分别采用了氨基柱[2]、C18柱[3]和离子交换色谱柱[4-6]作为色谱柱，另外还有采用蒸发光检测器进行分析[7-8]。本试验中采用高效液相色谱法对处方中益母草主要成分的盐酸水苏碱进行定量分析，现报道如下。

1 仪器与试药

美国 Waters 2695-2487型高效液相色谱仪；Milli-Q型纯水发生器；Mikro 22R型高速冷冻离心机；德国 Mettler Toledo AB265-S型电子分析天平。盐酸水苏碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为110712-200508，供含量测定用）；益母颗粒（三金集团桂林三金生物药业有限责任公司）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件及系统适用性试验[9]

色谱柱：Luna SCX 100A柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：15 mmol／L磷酸二氢钾(含0．04%三乙胺和0．15%磷酸)；检测波长：192 nm；流速：1．0 mL／min；柱温：35℃。该色谱条件下，盐酸水苏碱保留时间约为13 min，峰形良好，理论板数达 10 000以上，可满足定量分析要求。色谱图见图1。

1．盐酸水苏碱A．对照品溶液 B．供试品溶液 C．阴性对照品溶液图1 高效液相色谱图

2．2 溶液制备

取五氧化二磷减压干燥12 h的盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每 1 mL含0．10 mg的溶液，即得对照品溶液。取装量差异项下的本品，研细，取约3．5 g，置具塞三角瓶中，精密称定，精密加入 50%乙醇 50 mL，称定质量，加热回流30 min，取出，放冷，再称定质量，用50%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，加在中性氧化铝柱(100～200目，5 g，干法装柱，柱内径1．5 cm)上，用乙醇100 mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣用流动相溶解，转移至10 mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方量比例称取缺益母草的各味药材，按益母颗粒制备工艺制得阴性样品，再按供试品溶液制备方法进行提取，即得阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

阴性干扰试验：取缺益母草阴性对照品溶液，按拟订的色谱条件进样测定。结果色谱图中，在盐酸水苏碱的位置无色谱峰出现，表明阴性样品对测定无干扰。见图1。

线性关系考察：精密称取盐酸水苏碱对照品 10．32 mg，置20 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液0．5，1．0，2．0，3．0，5．0，10．0 mL，置10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得系列对照品溶液。分别精密吸取以上对照品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪进行测定。以对照品进样量为横坐标（X）、被测组分峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得回归方程 Y=2．366 9×105X-1．059 5×104，r=0．999 8(n=6)。结果表明,盐酸水苏碱进样量在 0．258～5．160 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密量取同一份对照品溶液10 μL，按拟订的色谱条件连续进样5次。结果的 RSD=0．67%（n=5），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品，共6份，按供试品溶液制备方法操作，在拟订色谱条件下进样测定，分别计算含量。结果盐酸水苏碱平均含量为每袋 8．30 mg，RSD=1．78%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，24 h时进样测定。结果的 RSD=0．96%（n=6），表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

加样回收试验：称取已知含量的样品（盐酸水苏碱含量为0．59 mg／g）1．75 g，置具塞三角瓶中，精密称定，共6份，分别按样品盐酸水苏碱含量的50%，100%，150%精密加入对照品溶液，按供试品溶液制备方法提取、测定，并计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸水苏碱加样回收试验结果（n=6）

2．4 样品含量测定[10]

取不同批号的样品，按拟订方法测定，计算盐酸水苏碱的含量。结果批号为090401，090402，090403的样品中盐酸水苏碱含量分别为每袋9．20，9．45，9．38 mg。

3 讨论

色谱柱的选择：曾使用 PC HILIC色谱柱、C18柱和氨基柱进行试验。结果PC HILIC亲水性色谱柱和C18柱无法良好地分离被测成分与杂质，氨基柱测得色谱峰峰形不佳。故选择 Luna SCX 100A柱。

流动相的选择：色谱柱为离子柱，流动相的离子浓度对测定影响较大，因此使用磷酸二氢钾缓冲液，平衡离子交换。分别在流动相pH为3．3，2．8，2．4下测定盐酸水苏碱，结果发现pH越大，保留时间越提前，分离度越小，甚至pH为3．3时，被测成分峰与杂质峰合并。因此，通过添加一定比例的磷酸和三乙胺调节流动相pH为2．2。

提取除杂方式的选择：在考察提取方式过程中，曾使用732型阳离子交换树脂柱、大孔树脂D101柱、氧化铝柱进行除杂质。结果以732型阳离子交换树脂柱、氧化铝柱分离除杂效果较好。但732型阳离子交换树脂柱原理与液相所采用色谱柱分离原理相同，且操作步骤烦琐，综合考虑最终选择采用氧化铝柱进行除杂。

[1]梁惠珍，李先荣，王瑞民．薄层扫描法测定复方脑清胶囊中盐酸水苏碱的含量[J]．中国药事，2009，23(6)：575-576．

[2]李政海，苏作林，廖展苇，等．HPLC法测定益母草颗粒（无蔗糖型）中盐酸水苏碱的含量[J]．中国医药导报，2011，26(8)：70-72．

[3]杨晓云， 雪涛，张云丽．益母丸中盐酸水苏碱成分分析方法 [J]．中国现代应用药学杂志，2008，25（1）：69-70．

[4]程立方，崔秀君．产舒康颗粒中盐酸水苏碱的高效液相色谱法定量[J]．中国现代应用药学杂志，2007，24（6）：496-498．

[5]洪 梅，施 法．HPLC法测定加味八珍益母颗粒中盐酸水苏碱的含量[J]．中国药事，2009，23（11）：1 113-1 114．

[6]姜卫东，贺亚玲，何世芬，等．HPLC测定益母草注射液中盐酸水苏碱含量[J]．中国药品标准，2007，8（5）：40-42．

[7]冯 旭，杜成智，梁臣艳，等．HPLC-ELSD测定益母颗粒中盐酸水苏碱的含量[J]．中成药，2008，30（5）：附2-附3．

[8]林冬杰，张会球．HPLC-ELSD法测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量[J]．亚太传统医药，2009，5（2）：45-46．

[9]高晓波，张小勇，黄春清．HPLC测定益母草中盐酸水苏碱含量的色谱条件研究[J]．中医药信息，2009，26（4）：25-27．

[10]童 红，何 斌．高效液相色谱法测定抗宫炎软胶囊中盐酸水苏碱含量[J]．中国药业，2007，16（14）：40-41．

Determination of Stachydrine Hydrochloride Content in Yimu Granules by HPLC

Zhong Yan
(Guangxi Zhuang Autonomous Region Institute for Food and Drug Control,Nanning,Guangxi,China 530021)

Objective To establish a HPLC method for the determination of the stachydrine hydrochloride content in Yimu Granules．M ethods The strong cation exchange(SCX)column(250 mm×4．6 mm,5 μm)was used as the chromatographic column．The mobile phase was 15 mmol／L potassium dihydrogen phosphate (containing 0．04% triethylamine and 0．15% phosphoric acid)．The detection wavelength was 192 nm．Results The sample size of stachydrine hydrochloride within 0．258-5．160 μg showed good linearity(r= 0．999 8,n=6);the average recover rate was 97．45%,RSD=0．81%(n=6)．Conclusion This method is simple,accurate,strongly specific and better repeatable,and can be used for the quality control of Yimu Granules．

HPLC;Yimu Granules;stachydrine hydrochloride

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)05-0032-03

2014-07-12)