薄层色谱法鉴别土霉素的方法改进

顾 云，曹晓云

(天津市药品检验所，天津 300070)



薄层色谱法鉴别土霉素的方法改进

顾 云，曹晓云

(天津市药品检验所，天津 300070)

目的：建立土霉素的薄层鉴别方法。方法：薄层色谱法。薄层板默克硅胶60板F254，用10%的乙二胺四醋酸二钠溶液(10 mol/L的NaOH调pH至7.0)均匀喷在板上，平放晾干，110 ℃干燥1 h后备用。展开剂：以水-甲醇-二氯甲烷(6∶35∶59)溶液。紫外灯(365 nm)下检测。结果：供试品溶液所显主斑点位置及荧光强度均与相应的对照品溶液的主斑点相同，混合溶液显示两个完全分离的斑点。结论：建立的TLC新方法简单、准确、重现性好，建议今后可将该方法推广应用，作为药业四环素类品种的鉴别方法(薄层色谱法)。

薄层色谱法，土霉素，鉴别

土霉素是四环素类的抗菌药，对革兰氏阴性菌和阳性菌均有抑制作用,同时对立克次体、螺旋体及某些原虫等亦具有抑制作用。土霉素组分单一，主成分约占95%以上，在发酵过程中会产生一些共生物杂质，如2-乙酰-2-去酰胺土霉素、4-差向土霉素、四环素等。土霉素在酸性条件下可发生反式消除反应，生成脱水土霉素，进一步降解形成立体异构体α和β阿扑土霉素的混合物。对于土霉素类的鉴别，《中国药典》2010年版二部采用传统的硅藻土手铺板的方法，经试验，发现该方法无法清晰分离斑点，达到完好鉴别。本文通过试验，采用默克硅胶60板F254预制板的新方法进行薄层鉴别，达到专属性强、准确度高、重现性好的目的。

1 仪器与试药

VILBER LOURMAT(CN-6T型)紫外分析仪，恒温干燥箱DN64(日本Uamato)。土霉素样品(河北圣雪大成制药有限公司提供，批号T3-11314417-3、T3-11301416-3、T3-11319424-3)；土霉素对照品(批号130487-200302，中国药品生物制品检定所提供，纯度88.2%)；盐酸四环素对照品(批号130488-200403，中国药品生物制品检定所提供，纯度97.5%)。市售的默克硅胶60板F254；所用试剂均为色谱纯和分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 供试品溶液的制备 取本品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 ml中含1 mg 的溶液，作为供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液的制备 取土霉素对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 ml中含1 mg 的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 混合对照溶液的制备 取土霉素与盐酸四环素对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 ml中各含1 mg 的混合溶液，作为系统分离测试溶液[1]。

2.2 薄层板的制备 默克的硅胶60板F254，用10%乙二胺四醋酸二钠溶液(10 mol/L氢氧化钠溶液调pH至7.0)均匀喷在板上，平放晾干，110 ℃干燥1 h后使用[2]。

2.3 鉴别 参照《中国药典》2010版二部的薄层色谱法(附录 Ⅴ B)试验，吸取“2．1”项下制备的三种溶液各1 μl，分别点于上述薄层板上，以水-甲醇-二氯甲烷(6∶35∶59)溶液作为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视，混合溶液显示两个完全分离的斑点，供试品溶液所显主斑点的位置和荧光强度与对照品溶液的主斑点相同。见图1。

《中国药典》法试验结果

改进方法试验结果

3 讨论

3.1 《中国药典》方法 目前《中国药典》中四环素类品种的薄层色谱法(包括现行《中国药典》2010年版盐酸土霉素的薄层色谱法)，一直延用硅藻土手铺板的方法，尚未更新。经试验得出，该方法存在两点不足：第一，薄层板为手铺板，因硅藻土细度差且松散不易黏合导致手铺板均匀性差而影响分离度。硅藻土本身用前需处理，处理后的硅藻土在制板时的酸碱度、展开剂配比的酸碱度和点样时的温度、湿度等诸多因素都会影响展开的试验结果，造成脱尾或导致系统分离度不好的结果(见图1)。而且铺板费时费力，板的质量无法统一。第二，展开剂为乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮(2∶2∶1)溶液200 ml中加4%乙二胺四醋酸二钠溶液(pH 7.0)5 ml，配制烦琐且展开效果欠佳。因此，《中国药典》的方法操作烦琐，影响因素甚多，难以控制，检测斑点不清晰，系统分离度差、重复性差，难以符合TLC检测的技术要求。

3.2 改进方法 参照《英国药典》2011版土霉素片质量标准项下的薄层色谱法，采用了薄层板和展开剂的制备方法；参照《中国药典》2010年版盐酸土霉素质量标准项下的薄层色谱法，采用了供试品、对照品和系统分离测试溶液的配置方法。建立了新方法。经试验比较，本方法具有两点优势：第一，本方法的薄层板采用默克硅胶60板F254，市场可购，其板的质量符合薄板色谱法检测的技术要求。本方法简便、操作快捷而分离度良好(即可达到系统适用性试验的要求，见图1)。第二，展开剂为水-甲醇-二氯甲烷(6∶35∶59)溶液，其配制较为简单且展开效果良好。试验证明，新方法先进、简便和操作快捷且分离度良好，更适应现在药品检验技术的要求，新方法对于四环素类的鉴别均适用，结果可靠，易于判断。

3.3 薄层板的选择 在相同的实验条件下，选择了常用的不同厂家(进口默克公司、青岛海洋化工厂、天津思利达科技有限公司和烟台市化学工业研究所)不同品种的薄层板(GF254、HF254)，其结果均较为满意，表明改进后方法所用的薄层板的黏合剂对检验结果干扰甚小，薄层板适用范围及实验条件很广，方便检测。试验结果表明，默克或青岛的板效果更好些。结果见图2。

青岛—HF254板 天津思利达—HF254板 烟台—GF254板

1.土霉素样品 2.土霉素对照品 3.土霉素对照品+盐酸四环素对照品 4.盐酸四环素对照品

图2 不同厂家品种薄层板TLC色谱图

3.4 检测波长的选择 试验选择显色荧光斑点更强、灵敏度更高及专属性更好些的紫外光灯(365 nm)下检测。因土霉素的分子结构中有较大的共轭体系效应，能产生较强的荧光，因而微量点样(即为1 μl)具有较强的荧光斑点。而254 nm光源是荧光淬灭，365 nm光源是荧光吸收。

1 中国药典[S]. 二部.2010:635-636

2 英国药典[S].2011：1635-1636，3078-3079

Improvement of TLC identification for oxytetracycline

Gu Yun , Cao Xiaoyun

(Tianjin Institute for Drug Control, Tianjin 300070)

Objective: To establish a TLC method for identification of oxytetracycline. Using GF254as layer plate , spary the plate with 10% EDTA solution (adjust pH to 7.0 with 10 mol/L NaOH solution) , dry for 1 h at 110 ℃ before use. Methods: The solvent system consist of a mixture of water, methanol and dichloromethane (6∶35∶59),under the UV light at 365 nm.Results:The RF value and intensity of the principal spot obtained from the test solution corresponds to that obtained from the Standard solution.The resolution solution should present two spots. Conclution: The TLC method can be used in identification of the drugs of tetracycline.

TLC,oxytetracycline,identification

2014-09-19

R927.11

A

1006-5687(2015)01-0012-03