支原体感染与输卵管妊娠的相关性分析

郭宏亮，黄荣芳，方丽萍

（昆明市妇幼保健院 妇科，云南 昆明 650031）

沙眼衣原体（CT），解脲支原体（UU），人型解脲支原体（Mh） 感染与输卵管妊娠的相关性也是近年来的研究热点。受精卵在子宫体腔以外着床称为异位妊娠，其发病率约为2%。输卵管妊娠是育龄女性异位妊娠中最常见的一种，约占95%。因输卵管不利于胎盘着床和胚胎发育，输卵管妊娠发生破裂和出血的风险极大，是导致孕早期妇女死亡的重要原因。病原微生物引起的输卵管炎症是输卵管妊娠的主要病因。以往认为引起输卵管炎的病原体主要是细菌、淋病奈瑟菌等，随着医学的进步及检验手段的提高，对输卵管炎的病因有了新的研究，有报道[1]指出沙眼衣原体和支原体也是引起输卵管妊娠的重要病原体。我们通过对输卵管妊娠患者及孕早期女性宫颈分泌物CT，UU，Mh的检测探讨CT，UU，Mh与输卵管妊娠的关系。

有学者的研究发现在宫内膜中能检测到CT，UU，Mh[2]，在输卵管组织同样也能检出CT，UU，Mh[3,4]，那么盆腔液中是否也能检测到CT，UU，Mh，这是一个有待研究的问题。目前国内检测并研究盆腔液CT，UU，Mh感染的课题相对较少。我们通过检测宫颈分泌物和盆腔液中的CT，UU，Mh，探讨盆腔液中CT，UU，Mh感染的情况。

资料与方法 一、研究对象 所有研究对象均选取自2013年7月-2014年3月在昆明市妇幼保健院妇科门诊、妇科住院部和生殖医学科就诊的患者，均需满足的纳入标准：有性生活史，在2周内未使用过任何抗生素，取样3d内没有阴道冲洗，没有阴道用药及性生活，排除经期的女性。

选取妇科住院部收治的输卵管妊娠患者81例作为研究组，选取同时期妇科门诊孕早期要求终止妊娠并排外既往有异位妊娠史的患者102例作为对照组；取宫颈分泌物行支原体培养、沙眼衣原体检测。

二、标本采集 （一） 宫颈分泌物：用无菌窥阴器扩张阴道，注意窥阴器上不能涂润滑剂及消毒剂，以防干扰测定结果。用消毒棉签擦拭宫颈口多余的分泌物，然后用灭菌棉拭子插入宫颈口内（2～4） cm处缓慢旋转（2～3） 圈，停留（10～30） s后取出，取出时注意不要碰到阴道壁，放于无菌试管内送检支原体和沙眼衣原体。

（二） 盆腔液：在术中用相同规格的无菌拭子在道格拉斯陷窝擦拭取盆腔液，无菌拭子放于无菌试管内送检支原体和沙眼衣原体。

（三） 阴道分泌物：用2支无菌棉签取阴道侧壁上1/3分泌物后送检。

三、UU和Mh检测及药敏试验 （一） 试剂UU和Mh检测采用液体培养法。试剂盒是由珠海迪尔生物工程有限公司生产的UU/Mh分离培养药敏试剂盒。试剂盒主要由支原体培养基和检测卡组成。培养基中含有尿素、马血清、酵母提取液、酚红指示剂、混合抗生素、生长因子等物质，稀释液中有支原体基础肉汤和精氨酸，当UU和Mh生长时，尿素和精氨酸分解生成的碱性物质引起PH值上升，培养基由黄色变成红色。培养基中加有抑菌剂，可抑制生殖道中的细菌和真菌的生长。本试剂盒可同时检测UU和Mh。

（二） 方法 从冰箱取出所需数量干燥培养基，用无菌吸头吸取培养基100μl加入检测卡C-空白孔。将采集的标本拭子插入培养瓶，在靠近液面上方的瓶壁挤压旋转拭子数次，充分混匀，使拭子中的样本渗入，弃拭子。充分混匀接种标本的培养基，取100μl加入检测卡除C-空白孔的各空中。各孔滴加2滴无菌矿物油，盖上检测卡的盖子，置于35℃～37℃的恒温箱培养，在24h和48h分别观察结果。操作过程中注意无菌原则，避免污染。

（三） 结果判读 阴阳性结果判定标准：黄色或橙黄色→阴性；清晰透明红色→阳性；浑浊红色→污染。C-空白孔应为阴性，若为阳性表示有污染，本次试验无效。分离鉴定孔阴性（48h），可报告无UU和Mh生长。UU分离鉴定孔阳性，则报告检测出解脲支原体。Mh分离鉴定孔阳性，则报告检测出人型支原体。

四、沙眼衣原体检测 （一） 检测方法 采用Unipath有限公司生产的沙眼衣原体检测试剂盒（免疫层析法） 检测沙眼衣原体抗原，向提取试管中加入提取液（含低于0.1%叠氮钠的提取试剂）至0.6ml，将宫颈分泌物棉拭标本浸没在提取液中并搅动至少5秒，将提取试管于80℃加热（10～12） min，即可提取沙眼衣原体抗原，将标本提取液在室温下18℃～30℃冷却至少5min，将滴管附件盖在提取试管上，向检测块的标本窗滴上5滴提取液，15min后读取检测结果。

（二） 结果判读 结果窗内无线条出现为沙眼衣原体抗原阴性，结果窗内有一条线出现为沙眼衣原体抗原阳性。若质控线（C） 不出现红线，则结果无效。

五、阴道分泌物检测 阴道分泌物镜检：将阴道分泌物均匀涂于载玻片上，用油镜观察线索细胞、假丝酵母菌的芽孢、菌丝。然后将棉签放入无菌试管中，滴上生理盐水稀释后，涂于载玻片上，直接在光镜下检查滴虫。需氧菌阴道炎及细菌性阴道病测定：采用北京中生金域诊断技术有限公司生产的需氧菌阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒。外阴阴道假丝酵母菌病：显微镜下见到假丝酵母菌的孢子或菌丝。

滴虫性阴道炎:显微镜下悬滴法检查见到滴虫。需氧菌阴道炎：当过氧化氢（H2O）2，白细胞酯酶（LE） 阳性，同时β-葡萄糖醛酸苷酶（GUS），凝固酶（GADP） 一项阳性或两项均为阳性者。细菌性阴道病：当过氧化氢（H2O）2，白细胞酯酶（LE） 阳性，同时伴线索细胞阳性和（或）唾液酸苷酶（SNA） 阳性者。

六、统计学方法 将研究对象的临床资料、沙眼衣原体检测结果、阴道分泌物检测结果、解脲支原体和人型支原体的检测录入EXCEL数据库，采用SPSS17.0统计软件进行统计分析。率的比较采用χ2检验、四格表确切概率法，P值＜0.05为差异有统计学意义，P值＞0.05为差异无统计学意义。

结 果 研究组与对照组宫颈分泌物沙眼衣原体、支原体检出情况。

研究组与对照组宫颈分泌物均未检测出沙眼衣原体。

研究组81例中宫颈分泌物培养出支原体51例，阳性率为62.96%，对照组102例宫颈分泌物培养出支原体48例，阳性率为47.06%，研究组阳性率明显高于对照组，P＜0.05，差异有统计学意义，见表1。

手术患者宫颈分泌物和盆腔液沙眼衣原体、支原体检出情况：305例手术患者的宫颈分泌物及盆腔液未检测出沙眼衣原体。305例手术患者中宫颈分泌物培养出支原体的有152例，阳性率为49.84%；盆腔液培养出支原体的有0例，阳性率为0；宫颈分泌物阳性率明显高于盆腔液，P＜0.05，差异有统计学意义，见表2。

结 论 在本实验研究范围内：宫颈支原体感染是导致不孕、输卵管妊娠的原因之一；支原体可能合并其他病原微生物共同致病。

讨 论 UU和Mh与输卵管妊娠关系的讨论：输卵管妊娠是妇产科常见的急腹症，是孕产妇死亡的原因之一，严重威胁女性的生殖健康。病原微生物引起的输卵管炎症是输卵管妊娠的主要病因。以往认为引起输卵管炎的病原体主要是细菌、淋病奈瑟菌等，随着医学的进步及检验手段的提高，对输卵管炎的病因有了新的研究，有报道[1]指出UU和Mh也是引起输卵管妊娠的一种重要病原体。

国内贺子秋[5]调查1985年～1986年，1995年～1996年2个时间段输卵管妊娠发病率呈上升趋势，支原体的感染亦呈上升趋势，认为二者有关。黄新可等[6]的研究报道：输卵管妊娠患者宫颈分泌物培养支原体阳性率显著高于对照组；2次以上输卵管妊娠患者宫颈分泌物培养支原体阳性率高于初次输卵管患者。认为支原体感染与输卵管妊娠之间密切相关。张帝开等[7]对大白兔的输卵管感染支原体后进行病理分析，发现输卵管黏膜层上皮细胞出现轻度肿胀，黏膜下层炎性细胞浸润，电镜下可见支原体粘附于输卵管黏膜上皮细胞上。同时，输卵管表面的纤毛出现粘连、倒状，微绒毛稀少、甚至脱落，提示支原体到达输卵管可致输卵管黏膜上皮的损伤。有学者对胚胎附着的输卵管组织进行了支原体的检测，结果发现发生输卵管妊娠的输卵管组织支原体的检出率明显高于对照组，认为支原体感染与输卵管妊娠相关[4]。

表2 宫颈分泌物和盆腔液支原体检出情况

本研究中研究组宫颈分泌物支原体阳性率达62.96%，明显高于正常早孕人群的阳性率47.17%，有统计学差异（P＜0.05）。输卵管妊娠患者宫颈分泌物支原体的阳性率与郭慧梅[8]等报道的一致，提示支原体感染与输卵管妊娠有关。支原体能吸附于宿主细胞表面，吸取脂质和胆固醇，破坏宿主细胞膜；溶解磷脂，使宿主细胞膜遭受损伤，影响膜的生物合成和免疫功能；产生毒性代谢产物，对宿主细胞有急性毒性作用；刺激机体产生特异的细胞免疫和体液免疫，最终引起输卵管的形态结构和生理功能的改变[9]。

［1］童燕群．解脲支原体和沙眼衣原体感染与输卵管妊娠的[J]．现代预防医学，2011，38(16)：3194-3195．

［2］张岱，魏宏，廖秦平．女性生殖道支原体及其他病原体在急性盆腔炎中的检出率[J]．中国妇幼保健，2010，25(3)：366-369．

［3］刘志红，邓玉清，王玉洁，等．解脲支原体和沙眼衣原体感染与输卵管妊娠的关系[J]．中国医师杂志，2004，6(10)：1416-1417．

［4］郝艳华，程明刚，邓志敏，等．解脲支原体与输卵管妊娠关系的研究[J]．中原医刊,2005,32(14):20-21.

［5］贺子秋，张慧娟，戴钟英，等．输卵管传性播疾病病原体感染与输卵管妊娠关系的研究[J]．实用妇产科杂志，1999，15（5）：254-255.

［6］黄新可，张羡，罗新，等．女性下生殖道沙眼衣原体及解脲支原体感染与输卵管妊娠的相关性[J]．中国实用妇科与产科杂志，2012，28（8）：628-630.

［7］张帝开，贾继辉，邝健全，等．解脲支原体对输卵管黏膜上皮细胞致病性研究[J]．中国微生态学杂志，2009，15（6）：317-319.

［8］郭慧梅，田莹．输卵管妊娠与生殖道支原体感染关系的临床分析[J]．河北医学，2008，14(2)：151-153．

［9］曲艳，于涛，夏丽颖，等．解脲支原体和沙眼衣原体感染致不孕症机制研究[J]．中华医学研究杂志，2007，7（10）：881-882.