Wnt信号通路成分Wnt-5a和β-连接蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义

杨莉，杨志宏(唐山工人医院分院，河北唐山306000;唐山职业技术学院)

Wnt信号通路成分Wnt-5a和β-连接蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义

杨莉1，杨志宏2
(1唐山工人医院分院，河北唐山306000;2唐山职业技术学院)

摘要:目的探讨Wnt信号通路成分Wnt-5a和β-连接蛋白(β-catenin)在卵巢癌发生、发展中的作用。方法应用免疫组织化学二步法检测60份卵巢癌组织中Wnt-5a和β-catenin表达;分析其表达与卵巢癌临床病理特征、预后的关系以及两者表达的相关性。结果Wnt-5a在卵巢癌组织中阳性表达率为61.7%(37/60)，其阳性表达与卵巢癌患者年龄、肿瘤大小、组织学类型、病理分级无明显相关性(P均＞0.05)，与肿瘤转移相关(P＜0.05)。β-catenin在卵巢癌组织中阳性表达率为71.7%(43/60)，其阳性表达与肿瘤的分期和转移相关(P均＜0.05)。Wnt-5a和β-catenin阳性表达患者生存时间明显低于阴性表达患者(P＜0.05)。Spearman法分析显示两者表达呈正相关(r =0.344，P = 0.011)。在发生转移的患者中Wnt-5a与β-catenin共同阳性表达率高达70%(24/ 34)。结论Wnt-5a和β-catenin通过非经典和经典Wnt通路在卵巢癌发展中发挥重要作用，两者高表达可能协同促进肿瘤转移，提示预后不良。

关键词:卵巢肿瘤; Wnt信号通路; Wnt-5a;β-连接蛋白;免疫组织化学二步法

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，是病死率最高的妇科恶性肿瘤。卵巢癌患者早期一般无明显症状及体征，约75%的患者发现时肿瘤已有远处转移，失去最佳手术治疗时机，晚期患者5年生存率仅为20%～30%。卵巢癌的病因学研究还不十分明确，其中Wnt信号途径的异常激活与肿瘤的发生、发展密切相关，而Wnt信号转导通路的改变在卵巢癌的发生、发展过程中具有重要意义［1，2］。本研究观察了Wnt信号通路中Wnt-5a蛋白和β-连接蛋白(β-catenin)在卵巢癌组织中的表达情况，探讨其在卵巢癌进展中的作用。

1　材料与方法

1.1材料收集2000年1月～2010年12月唐山工人医院经手术切除的卵巢癌组织标本60份。肿瘤直径1～18 cm、平均4.9 cm，其中＜5 cm 31例，≥5 cm 29例; FIGO分期:Ⅰ期19例，Ⅱ期12例，Ⅲ期25例，Ⅳ期4例;组织学类型:浆液性癌44例，黏液性癌6例，子宫内膜样癌10例;远处转移34例。患者年龄30～75岁、中位年龄61岁，术前均未行化疗和放疗。末次随访时间为2014年1月1日，失访6例，存活18例，死亡36例。患者生存时间3～135个月、平均65.42个月。

1.2卵巢癌组织Wnt-5a及β-catenin表达检测

采用免疫组织化学二步法。卵巢癌组织采用福尔马林固定，石蜡包埋，标本进行4 μm连续切片。石蜡切片常规脱蜡至水，枸橼酸盐微波炉热修复抗原，

0.3% H2O2阻断内源性过氧化物酶室温20min。正常山羊血清室温封闭20min后加一抗: Wnt-5a(1∶100，R＆D Biosystems，Minneapolis，MN，USA)，βcatenin(1∶100，鼠抗人蛋白单克隆抗体，北京中杉金桥)。4℃过夜，PBS洗3遍后，加入二抗(多聚物酶标二抗，北京中杉金桥)37℃孵育60min，DAB显色5～10min，苏木素复染、脱水、透明、中性树脂封片。Wnt-5a主要定位于细胞质和细胞核内;β-catenin胞膜阳性为正常表达，胞质或胞核阳性为异位表达(即阳性表达)。结果判定采用半定量积分法。光镜下每张切片中随机选取5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，根据阳性细胞比例及着色程度记分:①阳性细胞比例记分:＜5%为1分，5～10% 为2分，＞10%为3分;②着色程度记分:无着色为0分，浅棕色为1分，棕色为2分，深棕色为3分。根据计分的乘积≥2定义为阳性表达。

1.3相关性分析分析Wnt-5a及β-catenin表达与卵巢癌临床病理特征的关系及Wnt-5a与β-catenin蛋白表达的相关性。分析Wnt-5a及β-catenin蛋白表达与患者预后的关系。

1.4统计学方法采用SPSS15.0统计软件。Wnt-5a和β-catenin表达与卵巢癌组织临床病理学特征之间的关系采用c2检验，Wnt-5a及β-catenin蛋白表达相关性采用Spearman相关分析，生存分析采用Kaplan-Meier法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1卵巢癌组织Wnt-5a及β-catenin表达卵巢癌组织Wnt-5a阳性表达率为61.7%(37/60)，βcatenin阳性表达率为71.7%(43/60)。见插页Ⅱ图7。

2.2 Wnt-5a及β-catenin表达与卵巢癌临床病理特征的关系在卵巢癌组织中，Wnt-5a阳性表达与肿瘤转移相关(P＜0.05)，与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型、病理分级、腹水等无关(P均＞0.05);βcatenin阳性表达与肿瘤转移、FIGO分期相关(P均＜0.05);见表1。

2.3Wnt-5a与β-catenin表达的相关性Wnt-5a 与β-catenin蛋白在卵巢癌中的表达呈正相关(r = 0.344，P =0.011)。

2.4 Wnt-5a及β-catenin表达与患者预后的关系Wnt-5a及β-catenin表达均与患者的预后相关，阳性表达者病死率高于阴性表达者(Wnt-5a: c2=5.324，P =0.021;β-catenin: c2= 4.265，P = 0.039)。见插页Ⅱ图8。

表1　Wnt-5a及β-catenin表达与卵巢癌临床病理特征的关系［例(%)］

3　讨论

Wnt信号可通过β-catenin依赖性通路(经典Wnt信号)和β-catenin非依赖性通路(非经典Wnt信号)转导，Wnt-5a及β-catenin蛋白作为非经典和经典Wnt信号通路中的关键分子，可能在卵巢肿瘤进展中发挥重要作用［3］。

Wnt-5a是非经典Wnt信号通路家族中的重要一员，因其可结合不同的受体，激活或抑制Wnt/βcatenin通路，既可发挥抑癌基因作用，也可以发挥致癌基因作用［4，5］。如在转移性神经母细胞瘤中，Wnt-5a表达较原发性神经母细胞瘤低，发挥抑癌基因作用，而在乳腺癌、黑色素瘤和胃癌等多种癌症中过表达，提示其为促癌因子［6］。Badiglian等［1］研究发现，Wnt-5a蛋白在卵巢癌中表达明显高于良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织，Wnt-5a高表达的卵巢癌患者预后较差、生存时间短，提示Wnt-5a参与了卵巢癌的进展。而Bitler等［7］研究认为，Wnt-5a在卵巢癌组织中表达明显低于正常卵巢组织，提示Wnt-5a可能作为抑癌基因抑制细胞凋亡。本研究相关性分析分析发现，Wnt-5a阳性表达与卵巢癌患者年龄、肿瘤大小、组织学类型、病理分级没有明显相关性，而与肿瘤转移有关。存在转移者Wnt-5a表达较高，且Wnt-5a表达与预后有关。

Wnt/β-catenin通路是高等动物发育过程中关键的信号通路之一，主要参与细胞的增殖、分化、凋亡等，在多种癌症中可发现其不同程度的过表达。

Yao等［8］研究发现，Wnt/β-catenin通路在卵巢发育过程中起到了关键性的作用。β-catenin是一个重要的细胞质蛋白，当促癌信号激活时可以导致胞质β-catenin异位进入胞核，促进与肿瘤有关基因的转录［3］。β-catenin不仅是Wnt信号传导途径中的转录激活因子，而且是细胞间重要的黏附分子，参与细胞间的黏附、生长、增殖和转移等过程。作为Wnt通路中的下游分子，其介导的Wnt信号传导通路的异常激活与肿瘤的发生密切相关，其可能涉及到卵巢癌的发生、发展［9～11］。本研究发现，β-catenin在卵巢癌组织中存在异位表达，提示卵巢癌中存在着Wnt/β-catenin通路的异常激活。卵巢癌如果发生转移，转移部位细胞膜的β-catenin的表达量明显高于原发部位［12，13］。本研究发现，卵巢癌组织β-catenin阳性表达率达85%，可见β-catenin异常表达是促使卵巢癌发生转移的一个重要因素;且其表达还与卵巢癌的分期有关，说明β-catenin作为经典Wnt信号通路的关键组成部分参与了卵巢癌的发生和发展。

Wnt-5a既能活化经典的Wnt信号通路又能活化非经典Wnt信号通路，而且非经典信号通路与经典信号通路相互作用，非经典信号通路的活化又可以阻断经典信号通路，发挥抑癌作用。本研究发现Wnt-5a和β-catenin表达呈正相关，并且均与肿瘤的转移相关，在有转移的患者中共同阳性表达高达70%，提示在卵巢癌患者癌症转移过程中经典Wnt信号通路与非经典Wnt信号通路可能起协同调控作用。而Miller等［14］认为，Wnt-5a不通过募集细胞内β-catenin激活相关转录因子，促进肿瘤细胞增殖和侵袭，两者在卵巢癌中具体的调控机制仍需进一步研究。

综上所述，肿瘤的浸润转移是一个多阶段的复杂过程，首先肿瘤细胞间黏附能力丧失，导致肿瘤细胞脱落，细胞间的黏附作用决定组织形态学发生，并调节细胞的生长、分化及存活等多个过程。Wnt信号传导通路包括经典通路和非经典通路两种，前者主要参与机体的正常生长发育和细胞增殖，一般处于非激活状态，当该信号通路非正常激活或者βcatenin异常表达时，就与多种肿瘤的发生、组织学分级、转移等相关。研究卵巢癌组织中经典与非经典Wnt信号通路的异常改变机制及其信号通路之间的关系，可为卵巢癌的治疗提供新思路。

参考文献:

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收稿日期:( 2014-10-11)

文章编号:1002-266X(2015)36-0061-03

文献标志码:B

中图分类号:R737.31

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.36.024