子宫腺肌病患者子宫内膜组织HGF、C-Met、MMP-9和TIMP-1表达变化及意义

任红英，黄玉琴，周宇涵，李明群，洛若愚(武汉大学人民医院，武汉430060)

子宫腺肌病患者子宫内膜组织HGF、C-Met、MMP-9和TIMP-1表达变化及意义

任红英，黄玉琴，周宇涵，李明群，洛若愚
(武汉大学人民医院，武汉430060)

摘要:目的探讨肝细胞生长因子(HGF)及其受体原癌基因(C-Met)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)在子宫腺肌病发生、发展中的作用。方法选择子宫腺肌病患者30例(观察组)，因子宫肌瘤行子宫切除术的患者30例(对照组)。采用免疫组化SP法检测观察组在位及异位内膜、对照组内膜组织HGF、C-Met、MMP-9和TIMP-1，HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1之间的关系采用多元统计相关分析。结果观察组异位内膜、在位内膜及对照组内膜组织、HGF、C-Met、MMP-9表达依次升高，TIMP-1依次降低;两两比较，P均＜0.01。观察组异位内膜中HGF、C-Met、MMP-9两两均呈正相关，并均与TIMP-1呈负相关(P均＜0.01)。观察组在位内膜及对照组内膜组织HGF、C-Met、MMP-9两两均呈正相关，C-Met、MMP-9与TIMP-1均呈负相关(P均＜0.01); HGF与TIMP-1无关(P＞0.05)。结论子宫腺肌病患者异位内膜组织HGF、C-Met、MMP-9降低，TIMP-1升高，各指标间均具有相关性，可能与疾病的发生、发展有关。

关键词:子宫腺肌病;肝细胞生长因子;肝细胞生长因子受体原癌基因;基质金属蛋白酶9;金属蛋白酶组织抑制因子1

子宫腺肌病患者子宫内膜腺体和间质侵入子宫肌层，并伴随周围肌层细胞代偿性肥大和增生。多数研究认为，子宫基底层内膜细胞增生并侵入到子宫肌层间质是其发病原因［1］。在这一过程中，细胞因子起到了关键作用，其中肝细胞生长因子(HGF)及其受体原癌基因(C-Met)与细胞侵袭力有关［2，3］。HGF与C-Met蛋白结合后，可启动一系列跨膜信号转导通路，从而发挥多种生物活性，使子宫内膜细胞具有侵袭和转移的特性［4，5］。基质金属蛋白酶9(MMP-9)能降解基底膜主要成分Ⅳ型胶原［6］，金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)可与活化的MMP-9形成复合体而抑制其活性，并且能抑制血管生成素诱导血管内皮细胞出芽［7，8］，但其在子宫腺肌病的发生、发展中的作用鲜见报道。为此我们进行了如下研究。

1　资料与方法

1.1临床资料选择2012年7～12月武汉大学人民医院收治的子宫腺肌病患者30例(观察组)，取其在位及异位内膜组织标本。患者年龄35～50岁，平均44.2岁，均行子宫次全切除术或子宫全切术。选择因子宫肌瘤行子宫切除术的患者30例(对照组)，取其内膜组织标本。患者年龄35～50岁，平均44.1岁，均为未绝经妇女。两组术前3个月内未行激素治疗，无其他肿瘤疾病史。两组年龄具有可比性。

1.2子宫内膜组织HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表达检测采用免疫组化SP法。将两组标本脱蜡后行微波炉抗原修复，HGF抗体及C-Met抗体以1∶200稀释，MMP-9抗体及TIMP-1抗体以1∶100稀释。4℃孵育过夜，以PBS代替一抗作为阴性对照，严格按照试剂盒说明书操作。阳性判定标准: HGF、C-Met主要表达于子宫内膜间质细胞与上皮细胞的细胞质和细胞膜，MMP-9、TIMP-1主要表达于子宫内膜腺上皮的细胞质，少量表达于间质细胞的细胞质;细胞染色呈黄色为阳性表达，棕黄色为强阳性表达。每张切片在光镜下随机取6个不同视野，以切片染色的背景作对照，经HPIAS1000病理图文分析系统(同济医学院千屏影像公司)分析，测定阳性信号的平均灰度值。分析HGF、C-Met、MMP-9与TIMP-1的关系。

1.3统计学方法采用SPSS17.0统计软件。计量资料以珋x±s表示，组间比较采用单因素方差分析; HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1之间的关系采用多元统计相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组内膜组织HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表达比较见表1。

表1　两组内膜组织HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表达比较(灰度值，)

表1　两组内膜组织HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表达比较(灰度值，)

注:与对照组比较，*P＜0.01;与观察组在位内膜比较，#P＜0.01。

组别　n HGF　C-Met　MMP-9　TIMP-1观察组30异位内膜　110.65±17.86* #　114.43±15.93* #　112.08±17.14* #　175.37±9.77* #在位内膜　124.32±18.75*　125.97±17.72*　130.48±17.77*　140.42±14.04*对照组　30　136.97±16.14　146.41±15.77　142.73±14.86　129.76±13.17

2.2两组HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1的关系观察组异位内膜组织中，HGF与C-Met、MMP-9均呈正相关(r分别为0.937、0.886，P均＜0.01)，C-Met 与MMP-9呈正相关(r = 0.807，P＜0.01)，HGF、CMet、MMP-9与TIMP-1均呈负相关(r分别为－0.777、－0.724、－0.905，P均＜0.01)。观察组在位内膜组织中，HGF与C-Met、MMP-9均呈正相关(r分别为0.921、0.865，P均＜0.01)，C-Met与MMP-9呈正相关(r = 0.787，P＜0.01)，C-Met、MMP-9与TIMP-1均呈负相关(r分别为－0.718、－0.908，P均＜0.01)，HGF与TIMP-1无关(P＞0.05)。对照组HGF与C-Met、MMP-9均呈正相关(r分别为0.908、0.892，P均＜0.01)，C-Met与MMP-9呈正相关(r = 0.806，P＜0.01)，C-Met、MMP-9与TIMP-1均呈负相关(r分别为－0.588、－0.802，P均＜0.01)，HGF与TIMP-1无关(P＞0.05)。

3　讨论

研究发现，子宫腺肌病患者异位内膜组织含有丰富的MMP-9，可能与破坏子宫基层细胞外基质(ECM)、侵袭病变周围组织有关［9］。HGF对血管内皮细胞有强烈的促有丝分裂作用，并可通过与血管内皮细胞膜上受体C-Met结合，促进细胞分裂增殖，调节细胞骨架蛋白重排及诱导MMP分泌。组织中的HGF、C-Met可能通过打破MMP-9、TIMP-1平衡、降解ECM，而促进血管内皮细胞增生及血管管腔的形成［10］。同时，HGF、C-Met可以使细胞对Fas-Fasl配体系统的敏感性降低，抑制异位子宫内膜细胞凋亡，使异位子宫内膜更容易侵袭、种植和生长［11］。

本研究结果表明，观察组异位内膜、在位内膜及对照组HGF、C-Met、MMP-9表达均依次升高，TIMP-1依次降低，与以往研究结果一致［4］。表明随着在位内膜和异位内膜MMP-9表达增加，破坏了与TIMP-1之间的平衡，TIMP-1对MMP-9的抑制作用减弱甚至失效。相关分析表明，观察组异位内膜HGF、C-Met、MMP-9两两均呈正相关，并均与TIMP-1呈负相关。推测在病理条件下子宫内微环境发生改变，HGF、CMet分泌增加促使子宫腺肌病患者在位内膜转化为具有更强种植侵袭能力的异位内膜;同时打破了MMP-9、TIMP-1平衡，使异位内膜中TIMP-1的抑制作用减弱，活化的MMP-9水解破坏基底膜，使细胞迁移侵袭入间质，最终形成新生血管，从而促进异位内膜侵袭周围组织在子宫肌层中生长。

综上所述，子宫腺肌病患者异位内膜HGF、CMet、MMP-9降低，TIMP-1升高，各指标间均具有相关性，可能与子宫腺肌病的发生发展有关。今后我们将根据本研究结果进行动物及临床相关研究，以期为子宫腺肌病的治疗提供依据。

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收稿日期:( 2015-02-05)

文章编号:1002-266X(2015)36-0057-02

文献标志码:B

中图分类号:R711.7

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.36.022