眠安方对小鼠镇静催眠作用的实验研究

李静　杨文明　陈幸生



眠安方对小鼠镇静催眠作用的实验研究

李静杨文明陈幸生

【摘要】目的观察眠安方灌胃给药后对小鼠的镇静催眠作用。方法采用阈上和阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠的方法，观察眠安方不同剂量对小鼠自主活动及睡眠时间等影响。结果眠安方能明显减少小鼠自主活动次数，增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠只数，改善阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间。结论眠安方有明显的镇静催眠作用。

【关键词】眠安方；镇静；催眠

失眠是指患者对睡眠时间和(或)质量不满足，并影响白天社会功能的一种主观体验。轻者入睡困难，或入睡后易被惊醒，醒后不能再入睡；严重者可彻夜不眠,常伴有头痛、头晕、健忘等。2011年美国调查资料显示，成人和青少年中睡眠障碍发病率高达20%左右[1]，而在我国，随着社会发展，生活节奏加快，失眠的发病率呈逐年上升趋势。失眠已成为全球性日益严重的社会和医学问题。治疗失眠的西药易产生耐药性、戒断性、成瘾性等不良反应，发挥中医药特色，寻求安全高效的药物治疗,具有重要的研究价值和现实意义，我们在长期的临床工作中，根据中医传统理论，总结出治疗失眠的中药复方药――眠安方，取得较好的临床疗效。为进一步研究该方的药物效应，我们开展了眠安方对小鼠镇静催眠作用进行实验研究，以期为该方的临床干预提供实验依据。

1材料与方法

1.1实验动物昆明种小鼠，雌雄各半，体重(20±2)g，安徽中医药大学实验动物中心提供。

1.2实验用药眠安方组成：黄连6 g、牡丹皮12 g、山栀子10 g、郁金12 g、酸枣仁30 g、茯神12 g、珍珠母30 g等，由安徽中医学院第一附属医院提供，珍珠母先煎20 min，再与方中其他药物按常规方法(以上方药加5倍于药材的温水，浸泡20 min后，微火煎煮30 min，文火煎20 min，滤出药渣)，将药液浓缩成每毫升含生药0.5 mg和1 mg的药液，灭菌后4 ℃保存备用。地西泮片研碎配成相应浓度的混悬液备用[2]。

1.3仪器设备ZYC-1小鼠自由活动仪，由安徽省濉溪正华教学实验器械厂生产。

1.4分组及给药方法小鼠在实验室内适应4 d后，随机分为正常组、眠安方低剂量组、眠安方中剂量组、眠安方高剂量组、地西泮组共5组，每组12只。正常组予以蒸馏水，眠安方低剂量组予以5 g/kg灌胃给药，眠安方中剂量组予以10 g/kg,眠安方高剂量组予以20 g/kg[3]，地西泮组予以地西泮水溶液(0.2 mg/kg)灌胃给药，连续给药7 d。

1.5小鼠自主活动小鼠分组同上，灌胃药物剂量及体积同上，连续给药7 d。末次给药后1 h，将小鼠放入自主活动仪中，待小鼠适应5 min后，记录2 min内自主活动的次数，连续2次，取平均值进行结果的统计分析。

1.6对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响[4]分组同上，灌胃体积及剂量同上，连续给药7 d。于末次给药1 h后，小鼠腹腔注射戊巴比妥钠20 mg/kg(预实验测得使90%～100%的小鼠翻正反射不消失的最大剂量)，观察30 min内有多少动物翻正反射消失达1 min以上，如超过1 min即为发生睡眠。计算各给药组入睡率。

1.7对阈上剂量戊巴比妥钠睡眠时间的影响分组同上，灌胃体积及剂量同上，连续给药7 d。于末次给药60 min后，小鼠腹腔注射戊巴比妥钠38 mg/kg(预实验测得引起100%小鼠睡眠的最小阈剂量)。观察动物给药后是否会出现活动减少、安静、嗜睡或睡眠，睡眠以翻正反射消失为指标，观察小鼠的入睡潜伏时间(翻正反射消失时间)及睡眠持续时间(翻正反射消失至恢复的时间)[5]。

2结果

2.1眠安方对小鼠自主活动的影响眠安方对小鼠自主活动的影响：眠安方中剂量组、眠安方高剂量组与地西泮组均能降低小鼠2 min内活动次数。眠安方高剂量组与地西泮组比较差异无统计学意义(P>0.05)，表明眠安方高剂量组与地西泮组疗效相当。见表1。

表1　眠安方对小鼠自主活动次数的影响±s)

注：与正常组比较，aP<0.05，bP<0.01；与地西泮组比较，cP>0.05。

2.2眠安方对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响与正常组比较，眠安方中剂量组、眠安方高剂量组、地西泮组均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，表明眠安方中剂量组、眠安方高剂量组、地西泮组均能提高小鼠入睡率。与地西泮组比较，眠安方中剂量组在提高小鼠入睡率与地西泮组差别无统计学意义，而高剂量组作用优于地西泮组(P<0.05)。眠安方对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响，见表2。

表2　眠安方对阈下剂量戊巴比妥钠小鼠入睡的影响

注：与正常组比较，aP<0.05，bP<0.01；与地西泮组比较，cP<0.05。

2.3眠安方对阈上剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响与正常组比较，眠安方中剂量组、眠安方高剂量组、地西泮组均能缩短小鼠入睡潜伏时间，延长睡眠持续时间,并有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，表明眠安方中剂量组、高剂量组、地西泮组均能改善小鼠阈上剂量戊巴比妥钠睡眠时间。地西泮组优于眠安方低、中剂量组，而眠安方高剂量组与地西泮组无差别。见表3。

表3　眠安方对阈上剂量戊巴比妥钠小鼠

注：与地西泮组比较，aP<0.01,bP<0.05；与正常组比较，cP<0.01,dP<0.05。

3结论

《内经》将失眠称为“目不瞑”“不得眠”“不得卧”。中医学认为失眠病机总属营卫失和,阳不入阴；精亏血虚,脏不藏神；病有虚实之分，虚乃五脏精气亏虚,脏不藏神；实为邪气阻滞,阳不入阴；致使阳盛阴衰,阴阳失交,其中虚证为多。并明确指出“阳不入阴”是失眠症的总病机，“气血虚弱”是失眠症发病的内在因素，“邪气侵袭”是导致失眠的外在因素。我们通过大量的临床研究发现，失眠涉及心肝二脏，病机关键在火，为心肝火旺所致，心肝火旺是引起失眠的关键病机，从心肝二脏治疗失眠症，往往能够取得较为满意的临床疗效。眠安方为杨文明教授经验方，是针对失眠心肝火旺病机而设，可起到清肝泻火，宁心安神的作用。在临床应用多年，疗效较好。本方主要由黄连、牡丹皮、山栀子、郁金、酸枣仁、茯神、珍珠母等药组成。方中黄连泄中焦之火，清心经之热，为君药；牡丹皮、山栀为清肝泻火之要药；重用酸枣仁以其性甘平，入心肝二经，养血补肝，宁心安神，与牡丹皮、山栀共为臣药；郁金疏肝解郁；肝病又最易传脾，脾胃不和而卧不安，佐以茯神健脾宁心安神；珍珠母镇惊安神，平肝潜阳。诸药合用，肝火得清，肝郁得解，心神得宁，失眠自愈。我们在临床研究基础上，开展了对该的药效学研究，结果显示，眠安方能显著减少小鼠自主活动次数，增加阈上剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠只数，缩短阈上剂量戊巴比妥钠小鼠入睡潜伏时间，延长睡眠持续时间。表明眠安方具有显著的镇静、催眠作用，为失眠从心肝火旺诊治提供了实验依据。

参考文献

[1]Thomas Roth，Catherine Coulouvrat，Goeran Hajak,et al.Prevalence and perceived health associated with insomnia based on DSM-IV-TR; International Statistical Classification of Diseases and Related Health Problems，Tenth Revision; and Research Diagnostic Criteria/International Classification of Sleep Disorders，Second Edition criteria：results from the America Insomnia Survey[J].Biological Psychiatry,2011，69(6):592-600.

[2]新世纪全国高等中医药院校规划教材.中药药理学[M].上海：上海科技出版社,2008：193-196.

[3]徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社,2001：459-464.

[4]方福德,周吕,丁濂,等.现代医学实验技巧全书(下册)[M].北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1995：158-162.

[5]胡文婷,董梅,李廷利.刺五加水煎液合并DA受体拮抗剂改善小鼠睡眠作用的实验研究[J].中医药学报,2012,40(3)：29-32.

·基础研究·

作者单位：02215哈佛大学医学院，Beth Israel Deaconess Medical Center，交叉医学与生物技术部，美国马萨诸塞州波士顿(马彦、Chung-Kang Peng)；100053北京，中国中医科学院广安门医院耳鼻喉(孙书臣)

Experimental study of Miananfang on sedative and hypnotic effects of mice

LI Jing，YANG Wenming，CHEN Xingsheng.The second affiliated hospital of Anhui University of Traditional Chinese Medicine，hefei 230061，China(LI Jing，CHEN Xingsheng); The first affiliated hospital of Anhui University of Traditional Chinese Medicine，hefei 230031，China(YANG Wenming)

Corresponding author：YANG Wenming，E-mail：yangwenming8810@sina.com

【Abstract】ObjectiveTo observe sedative and hypnotic effects of mice given intragastric administration with Miananfang.MethodsUse threshold and subthreshold dose of pentobarbital sodium to make the mice sleep，observing the effects on autonomic activities and sleeping time of mice with different dose of Miananfang.ResultsMiananfang can decrease the autonomic activities of mice significantly，increase the number of mice which were made to sleep by subthreshold dose of pentobarbital sodium,and improve the sleeping time of mice with threshold dose of pentobarbital sodium.ConclusionMiananfang has a significantly effect of sedation and hypnosis.

【Key Words】Miananfang; Sedative; Hypnotic

通信作者：马彦，E-mail：dr.yan.ma@gmail.com;sunsc@163.com