胃癌组织Tiam1表达及其与临床病理特征和生存的关系

王娟霞 周永宁 邹绍静 任涛文 张志镒

·论著·

胃癌组织Tiam1表达及其与临床病理特征和生存的关系

王娟霞 周永宁 邹绍静 任涛文 张志镒

目的 探讨胃癌组织Tiam1在胃癌的发生、发展过程中的作用。方法 运用免疫组化法结合组织芯片技术联合检测189例胃癌、54例癌旁、30例正常组织及59例对应的淋巴结中的Tiam1蛋白表达情况。结果 Tiam1蛋白在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜的表达阳性率分别为85.7%、74.1%和16.7%, 比较差异有统计学意义(χ2=67.448, P＜0.001)。Tiam1蛋白表达与淋巴结转移、分化程度及浸润深度密切相关(P＜0.05)。胃癌原发灶Tiam1蛋白表达阳性率(85.0%)高于相对应的淋巴结转移灶(65.0%) (χ2=4.267, P＜0.05)。Tiam1蛋白表达阳性具有显著的生存危险, 是独立的生存期预测因子。结论 Tiam1蛋白表达与临床病理特征密切相关, 其表达方式与患者的生存期密切相关, 可作为独立的生存期预测因子。

胃癌组织；Tiam1蛋白；免疫组化；临床病理特征；生存期

Tiam1可以在PH功能区参与下诱导细胞膜皱褶, 细胞膜皱褶是肿瘤细胞运动和转移的一个指标［1,2］。本研究检测189例胃癌、54例癌旁、30例正常组织及59例对应的淋巴结中Tiam1蛋白的表达情况, 以研究其表达与胃癌的相关性。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 癌组织189例, 相对应淋巴结为59例(其中有转移灶40例), 癌旁54例［取材距癌组织边缘≥6 cm,经苏木精-伊红染色(HE染色)证实均无癌细胞］。所有标本均为武威市肿瘤医院1999～2004年保存完好胃癌术后的石蜡标本。Tiam1蛋白一抗购自美国Santa Cruz公司 , 免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。取30例胃癌的阴性切断(胃正常黏膜)与胃癌组织作对照。男145例,女44例。年龄30～73岁, 中位年龄55岁。根据WHO分类法, 低分化型100例, 高中分化型89例；T1(局限于黏膜层)7例, T2(侵及肌层)39例, T3(侵及浆膜层)86例, T4(侵及浆膜外)57例；有淋巴结转移116例, 无淋巴结转移73例。依据Lauren分型, 肠型97例, 弥漫型85例, 混合型7例。肿瘤直径≥5 cm者119例, 肿瘤直径＜5 cm者70例。

1.2 方法 所选蜡块制成4 μm厚切片, 免疫组化染色按试剂盒步骤操作。用已知表达抗体的组织做阳性对照, 用磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)代替一抗作为阴性对照。免疫组化染色阳性表达主要位于细胞浆或细胞膜, 呈淡黄色或棕黄色或棕褐色颗粒。按半定量评分方法如下：根据肿瘤细胞的染色范围, 阳性细胞数＜5%、5%～25%、26%～50%、＞50%分别标记为0、1、2、3分；对每张切片阳性细胞的染色强度按无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别标记为0、1、2、3分, 根据两项评分之和判断结果, ≥3分者为阳性, ＜3分者为阴性。

1.3 统计学方法 采用SPSS15.0 统计学软件整理分析数据。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。采用Kaplan-Meier曲线分析单因素生存分析, 生存期预测相关性采用COX回归分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Tiam1表达 Tiam1在胃癌组、癌旁组及正常对照组的表达阳性率分别为85.7%(162/189)、74.1%(40/54)和16.7% (5/30)。可见, Tiam1蛋白主要在细胞浆表达, 少有胞膜表达, 呈棕黄色或棕褐色染色颗粒。胃癌组Tiam1表达阳性率与癌旁组和对照组相比差异均有统计学意义(χ2=4.057、68.172, P＜0.05)。癌旁组和对照组相比, 差异有统计学意义(χ2=25.554, P＜0.001)。

2.2 Tiam1表达与临床病理特征 胃癌中Tiam1的表达与淋巴结转移、浸润深度以及分化程度关系紧密(P＜0.05), 而与年龄、肿瘤大小、Borrman分型和Lauren分型无显著相关性。见表1。

2.3 淋巴结转移灶Tiam1表.19例未转移淋巴结(59例淋巴结)Tiam1的表达阳性率为15.8%(3/19), 40例淋巴结转移灶Tiam1的表达阳性率为65.0%(26/40)。与之相对应的40例原发灶胃癌组织Tiam1的表达阳性率为85.0%(34/40), 两者比较差异有统计学意义(χ2=4.267, P＜0.05)。

2.4 Tiam1与生存期 Kaplan-Meier生存曲线分析显示.101例随访胃癌手术患者的半数生存期为28个月.3年与5年的平均生存率分别为46.3%和39.6%。Tiam1表达阳性者的半数生存期是20.000(个月), 胃癌患者中Tiam1表达阴性者生存优势明显强于表达阳性者(χ2=8.659, P=0.003)。见图1。COX多因素回归分析显示Tiam1蛋白表达阳性具有显著的生存危险, 是独立的生存期预测因子。

3 讨论

本研究发现, 在胃癌组织、癌旁组织及正常对照中Tiam1均有表达, 研究结果与续薇等［3］一致。在胃癌组织中, Tiam1的表达阳性率(85.7%)明显高于其在癌旁组织(74.1%)和正常对照组(16.7%)的表达(P均＜0.05)；癌旁组织和正常对照组的Tiam1表达相比, 差异有统计学意义(P＜0.001)。因此Tiam1很有可能是胃癌的早期分子事件, 其表达在胃癌的发生、发展以及恶性转化中起促进作用。

在结肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、喉癌等多种恶性肿瘤组织中, Tiam1呈阳性表达, 并与其分化程度、侵袭转移密切相关［4-7］。本研究发现Tiam1蛋白阳性表达率随胃癌组织分化程度的降低、浸润深度的增加及伴有淋巴结转移的发生呈逐渐增强趋势, 差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。因为Tiam1是Rac1的特异性鸟苷酸转换因子(GEF), 能够促进二磷酸鸟苷(GDP)的释放以及三磷酸鸟苷(GTP)的结合,进而激活Rac1, 再经激酶等信号分子转导, 激活下游分子,实现调节细胞骨架结构重组, 影响细胞的形体极化过程, 促进细胞运动和迁移, 并进一步诱导肿瘤细胞的侵袭转移, 参与基因表达调控、细胞增殖与凋亡等。

本试验发现胃癌原发灶与其对应的淋巴结转移灶的Tiam1表达差异有统计学意义(P＜0.05)。恶性肿瘤虽然是从发生恶性转化的细胞单克隆性增值而来, 但在生长过程中,经过多次分裂繁殖产生的子代细胞可出现不同的基因改变或其他大分子的改变, 考虑与肿瘤的异质性有关, 其生长速度、侵袭能力、对生长信号的反应等方面有差异。从Kaplan-Meier生存曲线中, 可以发现Tiam1表达与患者的生存期密切相关, Tiam1表达阳性患者具有显著生存危险。COX多因素回归分析表明, Tiam1表达可作为胃癌独立的预后预测因子, 其与患者的生存期紧密相关, 有助于预期胃癌患者的预后。但有关Tiam1蛋白表达与其他基因间可能存在的调控影响及机制尚须进一步研究。

［1］ Mertens AE, Roovers RC, Collard JG. Regulation of Tiam1-Rac signaling. FEBS Lett.2003, 546(1):11-16.

［2］ Bourguignon LY, Zhu H, Shao L. Ankyrin-Tiam1 interaction promotes Rac1 signaling andmetastatic breast tumor cell invasion andmigration. J Cell Biol.2000.150(1):177-191.

［3］ 续薇, 刘力华, 张明威, 等. Tiam1-Rac1 信号转导通路及其表达量值水平与胃癌恶性表型的相关性研究.中国实验诊断学.2007.11(4):462-467.

［4］ Hou M, Tan L, Wang X, et al. Antisense Tiam1 down regulates the invasiveness of 95D cells in vitro. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai).2004.36(8):537-540.

［5］ Minard ME, Kim LS, Price JE. The role of the guanine nucleotide ex-change factor tiam1 in cellular migration, invasion, adhesion and tumor progression. Breast Cancer Res Treat.2004, 84(1):21-32.

［6］ 王会河, 黄光武, 林玲, 等. Tia.1基因在喉癌中的表达和意义.临床检验杂志.2006.24(1):49-51.

［7］ Minard ME, Herynk MH, Collard JG. The guanine nucleotide exchange factor Tiam1 increases colon carcinoma growth ametastatic sites in an orthotopic nude mouse model. Oncogene.2005.24(15).2568-2573.

Expression of Tiam1 in gastric cancer tissue and its relationship with clinicopathologic characteristics and survival time

WANG Juan-xia, ZHOU Yong-ning, ZOU Shao-jing, et al.
Department of Hepatopathy, The Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730030, China

Objective To investigate effect of Tiam1 in gastric cancer tissue in occurrence and progress of gastric cancer. Methods Immunohistochemistry combined with tissue microarray were applied in detection of Tiam1 expression i.189 gastric cancer tissue cases, 54 adjacent tissue cases.30 normal tissue cases, and 59 corresponding lymphonodus. Results The positive rates of Tiam1 expression in gastric cancer tissue, adjacent tissue, and normal gastric mucosa were respectively 85.7%, 74.1% an.16.7%, and their difference had statistical significance (χ2=67.448, P＜0.001). Tiam1 expression was closely related with lymphatic metastasis, differentiated degree, and infiltration depth (P＜0.05). The positive rate of primary Tiam1 expression in gastric cancer (85.0%) was higher than corresponding lymphatic metastasis (65.0%) (χ2=4.267, P＜0.05). Positive Tiam1 expression showed remarkably survival risk, and that was an independent survival predictor. Conclusion Tiam1 expression is closely related with clinicopathologic characteristics. Its expression way has close correlation with survival time of patients, and it can be taken as the independent survival predictor.

Gastric cancer tissue; Tiam1 protein; Immunohistochemistry; Clinicopathologic characteristics; Survival time

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.32.001

2015-07-17］

国家自然科学基金(项目编号：30872478)

730030 兰州大学第二医院肝病科(王娟霞)；兰州大学第一医院消化内科(周永宁 邹绍静 任涛文)；甘肃省武威肿瘤医院(张志镒)

周永宁