抑癌基因PTEN在结肠癌中的表达及其临床意义

刘卫梅

抑癌基因PTEN在结肠癌中的表达及其临床意义

刘卫梅

目的 观察抑癌基因PTEN在结肠癌组织中的表达, 探讨其与结肠癌发生的关系及其临床意义。方法 采用免疫组织化学S-P法检测抑癌基因PTEN在结肠癌组织和正常结肠黏膜中的表达。结果 PTEN在正常结肠黏膜和结肠癌中阳性率分别为100.0%, 64.7%。PTEN表达与结肠癌的分化程度高低、浸润深度、是否有淋巴结转移关系密切, 差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 PTEN的异常表达可为结肠癌诊断和预后提供科学依据。

结肠癌；抑癌基因PTEN；表达；免疫组化

结肠癌是较常见的肿瘤, 近年来, 发病率有所增加, 发病年龄40～55岁, 平均年龄49.4岁。多基因异常是肿瘤发生的关键所在, 肿瘤的发生、发展过程是各种基因及其表达产物作用及互相影响的结果, 一直以来是肿瘤分子机制研究的热点。PTEN是人类发现的第一个抑癌基因, 它具有磷酸酶活性, 在保持细胞增生、组织分化和细胞凋亡均衡中发挥重要的作用, 在许多肿瘤中表达缺失、突变。本组研究用免疫组化S-P法检测PTEN在结肠癌组织中的表达情况, 用以探讨它与结肠癌发生的关系及临床意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2010年12月～2012年9月本院手术切除的结肠癌患者68例, 其中男53例, 女15例, 年龄38～70岁,接受过辅助治疗和手术治疗后复发的患者, 不在本次研究之列, 取距癌肿边缘8 cm以上邻近无增生的正常结肠黏膜30例作对照。

1.2 方法 标本用10%中性福尔马林固定, 厚度4 μm切片,脱蜡、水洗, 微波炉加热抗原修复, 苏木素染色, 封胶, 鼠抗人PTEN单克隆抗体、S-P染色试剂盒、DAB显色剂均购自武汉博士德生物公司, 以肿瘤阳性切片做阳性对照, 用PBS代替一抗做阴性对照。

1.3 结果判定标准 阳性：细胞浆有棕黄色颗粒着色为阳性细胞, 阴性：细胞浆无着色。将玻片分为10个区, 在10×40倍显微镜视野下, 每个区中连续观察50个细胞, 计量值以平均个数为准, 根据相关资料, 以阳性细胞数所占比例(5个高倍视野)分为：阴性(-)为着色细胞＜5%；弱阳性(+)为细胞着色数量在5%～20%之间：阳性(++)为细胞着色数量在20%～50%之间：强阳性(+++)为细胞着色数目＞50%。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件进行统计分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 正常结肠黏膜和结肠癌PTEN表达 正常结肠黏膜和结肠癌组织PTEN的阳性率分别为100.0%(30/30)和64.7%(44/68),正常结肠黏膜显著高于结肠癌组织, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 结肠癌PTEN表达与结肠癌分化程度及淋巴结转移的联系 高、中分化腺癌PTEN表达率84.2%(32/38), 明显高于低分化腺癌表达率40.0%(12/30), 差异具有统计学意义(P＜0.05)。淋巴结无转移的PTEN阳性表达率为84.8%(39/46),明显高于有淋巴结转移的PTEN阳性表达率18.2(4/22), 差异有统计学意义(P＜0.05)。浸润深度为黏膜及黏膜下层表达85.7%(36/42), 肌层和浆膜及浆膜外表达26.9%(7/26), 二者之间差异有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨论

PTEH中文名为：人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因, 为近年来发现的一种抑癌基因［1］, 近来研究显示, 它在人类肿瘤的发生、发展中起到了重要作用,它定位于10q23染色体, mRNA编码是5.5kh, 氨基酸共403个,由180个氨基酸的催化区(N端)、165个氨基酸的C2区(中部)和50个氨基酸的尾区(C端)组成棚在N端催化区内有与3, 4-二磷酸磷脂酰肌醇相结合的结构区域, 在C端尾区内含有一个PDZ结构域和两个可能是PEST的多个位点(磷酸化)和序列, N端与磷酸化酶功能相关, 包括对蛋白质和磷脂的脱磷酸化；C2区与细胞质膜相连接：尾区C端参与稳定性的调节：尾区内的结构区域可以调节与细胞质膜的结合。1997年由Li等［1］3个研究小组发现, 也是迄今为止发现的第一个抑癌基因, 它具有双特异性磷酸酶活性, 表达主要受miRNA、乙酰化、磷酸化及泛素化等转录后调控。大量的实验证明, 在肿瘤的发生、发展中PTEN基因的缺失起到了非常重要的作用, 它通过影响磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝-苏氨酸激酶(AKT)信号途径来实现对肿瘤的血管生成过程, 主要过程是：它可以通过其脂质磷酸酶活性, PI3K的磷酸化作用的逆转, 移除磷脂酰肌醇-3磷酸的磷酸基团, 使成磷脂酰肌醇-2磷酸(PIP2)还原, 维持细胞内低PIP3水平［2］。多种恶性肿瘤组织中均能见到肿瘤抑癌基因PTEN蛋白异常表达, 但在不同肿瘤类型中基因突变率有很大的差别［3,4］,多步骤演变导致多基因突变累积的结果是引起肿瘤的发生,在结肠癌的发生、发展中抑癌基因功能丧失具有十分重要的作用。本研究发现, 结肠癌组织中PTEN的表达总阳性率为64.7%, 显著低于正常结肠黏膜组织的阳性表达率, PTEN基因的异常表达在结肠癌组织中存在, 提示在结肠癌的发生中PTEN起着非常重要的作用, 同时还发现, PTEN在低分化腺癌的阳性表达率为40.0%, 显著低于高中分化腺癌的阳性表达率84.8%(P＜0.05), 断定抑制细胞不正常增殖分裂功能丧失是PTEN蛋白下降或缺失的结果, 因而与结肠癌的变化、发展有关。本实验研究结果表明, 无淋巴结转移的PTEN表达率明显高于有淋巴结转移的PTEN的阳性表达率, 两者间差异有统计学意义(P＜0.05)；随着浸润深度的加深, 它的阳性表达率逐渐降低, 差异具有统计学意义(P＜0.05), 与文献报道一致, 肿瘤的发生是一件极其复杂的过程, 人们对它与肿瘤发生及发展的关系仍然存在着许多争议和未知因素, 转录前及转录后结肠癌发生、发展的调节机制尚需进一步探讨。

总之, 本研究表明, 结肠癌的发生、发展与PTEN表达有关, 它可为结肠癌的早期诊断、判断预后和指导治疗提供新的科学理论依据。

［1］ Li J, Yen C, Liaw D, et al. PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain, breast, and prostate cancer. Science.1997.275(5308):1943-1947.

［2］ Choi JP, Desai R, Zheng Y, et al. Androgen actions via androgen receptor promote PTEN inactivation induced uterine cancer. Endocr Relat Cancer.2015.22(5):687-701.

［3］ Salvesen HB, Stefansson I, Kretzschmar EI, et al. Significance of PTEN alterations in endometrial carcinoma: a populationbased study of mutations, promoter methylation and PTEN protein expression. Int J Oncol.2004.25(6):1615-1623.

［4］ Bu HQ, Cai K, Shen F, et al. Induction of apoptosis by capsaicin in hepatocellular cancer cell line SMMC-7721 is mediated through ROS generation and activation of JNK and p38 MAPK pathways. Neoplasma.2015, 62(4):582-591.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.32.015

2015-06-01］

454001 河南省焦作市第二人民医院病理科