多指标正交试验优选止痒乳膏提取工艺

刘　峥，周芙琼，夏崇才，隆红艳

(南京市中医院1.中医药研究所；2.中心实验室；3.儿科，江苏 南京　210001)



多指标正交试验优选止痒乳膏提取工艺

刘峥1,2，周芙琼1,2，夏崇才1，隆红艳2,3

(南京市中医院1.中医药研究所；2.中心实验室；3.儿科，江苏 南京210001)

摘要：目的优选止痒乳膏的最佳提取工艺。方法采用正交试验法，以盐酸小檗碱、芍药苷的含量及干浸膏得率为指标，多指标综合评分法处理数据，优化溶剂用量、提取次数和提取时间3个因素。结果止痒乳膏的最佳提取工艺为加6倍量水，煎煮3次，提取40 min。结论优选得到的止痒乳膏提取工艺稳定合理可行。

关键词：止痒乳膏；正交试验；多指标；提取工艺

止痒乳膏处方原为南京市中医院临床使用的医院制剂方，由黄柏、赤芍、苍术、羊蹄、地肤子等中药组成，功能燥湿止痒、清热解毒。原方以洗剂应用，存在药物易流散、载药量小、有效成分浓度低、作用时间短、生物利用度低的劣势与不足。开发成乳膏剂后不但能改善以上不足，而且乳膏作为固型剂具有润肤保湿作用，有利于维护皮肤屏障功能，尤其适合像特应性皮炎这样因反复瘙痒—搔抓而致的结疤、皲裂、苔藓样变等皮损。方中黄柏为该乳膏的君药，有清热燥湿，泻火解毒的功效，含有小檗碱、黄柏碱、巴马汀等多种活性物质[1-3]，其中盐酸小檗碱能抑菌、抗炎、抗病毒，能较好地抑制多种革兰阳性菌和阴性菌[4-7]；赤芍清热燥湿，凉血化瘀，其主要有效成分是芍药苷，能较好的抑制炎性水肿和抗过敏反应[8-9]。为提高止痒乳膏的质量，笔者以盐酸小檗碱、芍药苷含量和干浸膏得率为评价指标，采用多指标正交试验法优选其水提工艺。

1仪器与试药

1.1仪器Agilent 1290 Infinity超高效液相色谱仪；JB-5型磁力加热搅拌器(金坛市盛蓝仪器制造有限公司)；Barnstead LabTower EDI 15超纯水仪(Thermo Scientific)；MS105DU电子分析天平(Mettler Toledo)；22R entrifuge冷冻离心机(Beckman)。

1.2试药处方所用中药材(均由安徽沪春堂中药饮片有限公司提供)经过南京中医药大学生药教研室鉴定为合格品，且符合2010版《中国药典》要求。对照品盐酸小檗碱、芍药苷(批号分别为：110713-200910、110736-201136)，均购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯(Sigma)，水为超纯水(Thermo)，磷酸为分析纯(南京化学试剂有限公司)。

2方法与结果

2.1试验设计采用L9(34)正交试验优选止痒乳膏的提取工艺，以有效成分盐酸小檗碱、芍药苷的含量和干浸膏得率为本试验的主要考察指标，对提取次数、溶剂用量和提取时间进行考察，因素及水平见表1。

表1　止痒乳膏提取工艺因素及水平

按处方组成称取药材9份，每份127.5 g，分别根据L9(34)正交试验表，加入设计量的水，按所设计的提取次数和提取时间进行提取，过滤所得提取液，再减压浓缩至100 mL，备用。

2.2指标成分的含量测定

2.2.1色谱条件[10]色谱柱：Aglient ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×50 mm，1.8 μm)；检测波长240 nm；柱温30℃；流速0.4 mL·min-1；进样量5 μL；流动相：甲醇(A)—0.1 %磷酸水溶液(B)梯度洗脱，洗脱程序见表2。

表2　流动相梯度程序

2.2.2线性关系考察[10]精密称取适量盐酸小檗碱和芍药苷对照品，以甲醇溶解，得到含17.3 mg·L-1盐酸小檗碱和159.5 mg·L-1芍药苷的混合对照品溶液，按“2.2.1”项下的色谱条件，分别精密吸取2、4、6、8、16、32 μL注入超高效液相色谱仪，测定色谱峰面积，以峰面积(Y)对混合对照品的进样量(X)进行线性回归，计算得到盐酸小檗碱标准曲线方程为：Y=136.55X-9.860 8 (r=0.999 9)，芍药苷标准曲线方程为：Y=462.99X-8.286 5 (r=0.999 9)。线性范围分别为：0.034 6～0.553 6，0.319 0～5.10 4 μg。

2.2.3样品测定精密量取按各提取工艺制备的浓缩液1 mL置10 mL棕色量瓶中，加入甲醇定容至刻度，超声30 min，放冷摇匀，经0.22 μm微孔滤膜过滤即得。分别精密吸取5 μL各供试品溶液注入超高效液相色谱仪，按上述方法进行含量测定,见图1。

2.3浸出物含量的测定精密量取按各提取工艺制备的浓缩液25 mL，平行3份，置于干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后于105℃干燥3 h，再转于干燥器中冷却30 min，迅速称定各个质量[1]，结果见表3。

表3　正交试验结果

2.4正交试验结果根据处方配比，黄柏为本方的君药，赤芍为臣药，同时为了总体控制水煎煮工艺的提取效率，将干浸膏得率作为优化提取工艺的总体考察指标，按照所设计的正交试验表进行试验，分别测定有效成分盐酸小檗碱、芍药苷的含量和干浸膏得率，再以各个指标的最大值为参照，将所得的数据进行归一化，按照各指标的权重进行综合评分。分别设置盐酸小檗碱(X)、芍药苷(Y)和干浸膏得率(Z)的权重系数分别为0.4，0.3，0.3。以综合值进行统计分析，其中综合评分M= (0.3X/0.93+0.4Y/5.59 0.3Z/36.74)×100。结果见表3，4。

表4　方差分析

注:F0.10(2,2)=9.0，F0.05(2,2)=19.0。

2.5试验结果分析由方差分析结果显示，A(提取次数)是主要影响因素，具有显著性(P<0.05)，因素B(溶剂用量)、因素C(提取时间)的影响则无显著意义，各因素作用主次为A>B>C。同一因素的3个水平比较得知：A3>A2>A1，B2>B3>B1，C2>C3>C1。考虑到经济节能的因素，最终确定最佳提取工艺为A3B1C1，即加6倍量水，煎煮3次，提取40 min。

2.6工艺验证试验根据优选的最佳水提工艺条件，按止痒乳膏处方量称取3份药材进行验证，结果主要指标成分盐酸小檗碱的含量为0.92 g·L-1，芍药苷的含量为5.49 g·L-1，干浸膏得率为31.19 %，RSD分别为1.09 %，1.54 %，1.79 %。试验结果表明，所优化得到的提取工艺方法合理可靠，简单易重复，可以作为止痒乳膏的提取工艺。

3讨论

本文通过多指标正交试验，优化止痒乳膏提取工艺中的提取溶剂水的用量、提取次数和提取时间3个因素，并经过验证试验，最终确定其最佳提取工艺为加6倍量的水，煎煮3次，每次提取40 min。结果表明所优选的止痒乳膏提取工艺简单，合理稳定，可操作性强，适合放大生产。

止痒乳膏处方含有盐酸小檗碱、芍药苷等有效物质，其中君药黄柏的盐酸小檗碱类拥有较好的消炎、抑菌作用，臣药芍药的芍药苷类成分具有较好的抗炎、抗菌、镇痛等作用[11-13]。考虑到中药具有多组分、多靶点的特点，如果仅仅以单一成分进行提取工艺的考察，则稍有欠缺，而以多指标来控制和评价中药制剂的质量，能更合理地保证制剂与药效统一。因此，本实验采用主客观结合的多指标正交设计试验[14]优选止痒乳膏的水提工艺，经过验证试验，所筛选得到的水提工艺具有良好的合理性和全面性，适合用于放大生产。

中药复方制剂成分复杂，通过多指标正交试验法优选其提取工艺可有效地控制其质量。根据指标间的重要性差异给出权重，消除由于不同指标量纲不同、含量差异较大对结果造成的影响，综合评分后再进行分析。本实验中，黄柏为止痒乳膏的君药，赤芍为臣药，而干浸膏得率能反映水煎煮工艺的提取效率，故分别设置有效成分盐酸小檗碱、芍药苷含量以及干浸膏得率的权重系数为0.4，0.3，0.3。这种多指标综合评分的方法可以根据不同指标在复方中的作用不同给予不同的权重，更符合中医复方用药的特色。

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doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.12.013

基金项目：南京市医学科技发展重点项目(No ZKX13048)；南京市科技发展计划项目(No 201308046)

作者简介：刘峥，女，博士研究生

通信作者：隆红艳，女，副主任中医师，硕士生导师，研究方向：小儿神经及精神系统疾病、脾胃系统疾病的临床及实验研究， E-mail：hongyan3128@163.com

(收稿日期：2015-07-17，修回日期：2015-09-10)

Optimization of extraction technology for Zhiyang Cream
by multi-index orthogonal test

LIU Zheng1,2,ZHOU Fu-qiong1,2,XIA Chong-cai1,et al

(1.TCMResearchInstitution；2.CentralLaboratory，NanjingHospitalofTCM,

Nanjing，Jiangsu210001,China)

Abstract:ObjectiveTo optimize extraction technology of Zhiyang Cream.MethodsAn orthogonal test was adopted in this study.With berberine hydrochloride,paeoniflorin and yield of extract as indexes,data processing was carried out with the multiple guidelines grading method for optimizing extraction times,the amount of solvents and extraction time.ResultsThe best extraction technology was to extract for 3 time with 6-fold water and 40 min each time.ConclusionThe optimized extraction technology is reasonable,feasible,stable,and the extraction rate of the active principles is high.

Key words:Zhiyang Cream;orthogonal test;multi-index;extraction technology