双参活血胶囊中药成分鉴定与丹参酮Ⅱa的测定分析

苏园 许建中 罗燕 李莹6500如皋市中医院药剂科000南京市中医院药剂科066辽宁陆军预备役高射炮兵第一师医院

双参活血胶囊中药成分鉴定与丹参酮Ⅱa的测定分析

苏园1许建中1罗燕2李莹3
226500如皋市中医院药剂科1
210001南京市中医院药剂科2
110166辽宁陆军预备役高射炮兵第一师医院3

目的：探究双参活血胶囊中药成分鉴定与丹参酮Ⅱa的测定。方法：使用HPLC对丹参酮Ⅱa的含量进行检测，使用TLC法检测药物中人参和丹参的含量。结果：丹参酮Ⅱa浓度8～24μg/m L，线性关系良好。结论：双参活血胶囊内的有效成分为丹参酮Ⅱa，且为脂溶性，这项指标能够当作药品质量监控指标。

双参活血胶囊；人参；丹参酮Ⅱa；成分鉴定

双参活血胶囊为我国自主研发的中成药[1]，主要由益母草、人参和丹参构成。为了在根本上保证药物质量，结合实际情况，本实验对该药物使用TLC法进行全面鉴别，同时使用HPLC法检测双参活血胶囊内丹参酮Ⅱa的具体含量，现报告如下。

资料与方法

本实验使用美国Waters公司生产的高效液相色谱设备为实验器材，电子天平为梅特勒公司生产，人参和丹参等对照药物购自本市市面，人参皂苷Re和Rb1、Rg1与双参活血胶囊由中国药品生物鉴定所提供。蒸馏水和盐酸小苏碱和色谱纯、蒸馏水由本院实验室提供。

人参鉴别工作：选择10颗双参活血胶囊颗粒，碾压均匀，加入乙氧基乙烷30mL，超声波处理10min，过滤。待挥发干溶液后，加入水饱和正丁醇50mL，超声处理半小时后过滤，在此滤液中加入0.5％的NaOH溶液，过滤碱液后，使用正丁醇饱和水将上述物质洗至中性。提取出正丁醇溶液，蒸干残渣后加入CH3OH 1mL进行溶解，将其当作供试品。选择1 g人参作为对照样本，使用同样的方式制作对照药材液。另外，选择人参皂苷Re和Rb1、Rg1样品加入甲醇制作成为对照品液体，依照双参活血胶囊的制剂原则，对除却人参的药材进行称取，制作成阴性成品，并制作出阴性对照液。吸取上述溶液4～6μL，并将其放置在硅胶材料G薄板中，使用三氯甲烷-甲醇水溶液，以10℃为环境，放置12 h，后将下层溶液取出，风干后在表面喷上10％硫酸乙醇液，加热至105℃。

丹参鉴定工作：选择10颗双参活血胶囊颗粒，碾压均匀，加入乙氧基乙烷40mL，超声波处理30min，过滤，残渣中加入乙酸乙酯1mL溶解，将其当作供试品。后择取1 g丹参为对照药物，在其中加入75％乙醇30mL。在加热回流1 h后，过滤处理，在残渣中加入10mL热水做溶解工作。并使用稀盐酸，调节其pH酸碱度。后使用乙醚振荡加以提取，将乙醚溶液合并处理，干后，在残渣中加入乙酸乙酯溶解，将其当作对照药材溶液。另外择取丹参酮Ⅱa为对照品，在此中加入乙酸乙酯制作成对照品溶液，依照双参活血胶囊的配置处方，将除却丹参之外的药材称取，使用相同的方法，制作成阴性对照品。另外，也要制作成阴性对照液。吸取上述溶液4～6μL，并将其放置在硅胶材料G薄板中，使用氯仿作为展开剂，取出，风干。

丹参酮Ⅱa测定：①色谱条件：色谱柱类型为KramasilC18，预柱4 mm×18 mm，波长268 nm，流速1mL/min，进样量20μL，柱温30℃。处理方式为外标峰面积法。②溶液制作：选择10粒双参活血胶囊颗粒，另外选择1 g精密称量，后将其加入25mL的甲醇中，以超声的方式进行处理，放冷后再次称重，使用甲醇，将之前失去的重量补充，振荡均匀后过滤处理，选过滤液为供试液，依照相关处方比例，对丹参之外的药物加以称取，制作成成品，使用相同的方式，制作阴性对照溶液。③干扰性实验：称取20μL供试品、对照品和阴性对照品，在供试品和对照品色谱上的相关位置将时间性色谱峰加以保留。④绘制曲线：称量4mg丹参酮Ⅱa对照物，将其放置在10mL的量瓶中，加入甲醇溶液溶解定容，得出一定浓度的对照品。使用精密定量，分别称取0.2～0.6mL共计5份样本，分别将其置入定量瓶内，加入适当甲醇溶液摇晃均匀，使用微孔滤膜加以全面过滤，将上述样品取用20μL样，对样品浓度的峰面积加以测量。⑤精密度实验：吸取20μL、124μg/mL丹参酮Ⅱa测量，时间间隔60min。测量次数5次。⑥重复性实验：选择同一种样品，称取5份，依照上文丹参方式将供试品溶液加以提取，重复5次，记录结果。结果显示RSD=0.67％。⑦稳定性实验：选择同一样品供试液，在12 h内，每1 h取样，容量20μL，次数5次，记录稳定性结果。⑧样品测定：在5批次双参活血胶囊内取样，使用精密度测量的方式，对供试品溶液加以制备，后精确称量20μL，124μg/mL供试品和对照品取样，将丹参酮Ⅱa的峰面积加以计算，使用外标法对丹参酮Ⅱa的含量加以计算。

结果

人参鉴定结果证实：在供试品的色谱内和对照组药物与色谱相对应的位置中，出现了颜色相同的斑点，阴性对照组没有斑点显示。

丹参鉴定结果证实：在供试品的色谱内和药材与色谱相关的位置中，出现了红色点状物，阴性对照组无斑点。

丹参酮Ⅱa测定结果证明：①干扰性实验：对照品和供试品的色谱对应上保存相同时间色谱，阴性对照在该区间段不存在干扰现象。②线性关系：丹参酮Ⅱa 8～24μg/mL的线性关系好。③精密度和重复性实验：RSD=0.67％。④稳定性实验：每粒含有丹参酮Ⅱa 0.215 mg。RSD面积0.7％，将样品置于棕色小瓶中，该物质在1 h内稳定性良好。⑤样品测定：在本批次的5个样品中，每粒含量为0.215、0.219、0.216、0.222、0.221mg。

讨论

双参活血胶囊属于中药制剂，在治疗心脑血管疾病中能够发挥出良好的效果，该药物有活血化瘀、疏经通络的效果。为了在根本上实现对该药物的质量控制，本实验对该药物中的丹参、人参使用TCL法进行鉴别，结果证实，在供试品色谱内，药物中的丹参、人参均在相对应的位置上，斑点颜色一致，在此位置上，阴性对照品没有斑点显示，对丹参酮Ⅱa进行检测，结果证明，每粒含量为0.215、0.219、0.216、0.222、0.221mg。

综上所述，双参活血胶囊内的有效成分为丹参酮Ⅱa，且为脂溶性，这项指标能够当作药品质量监控指标。

[1]钟世红,古锐,王铃鑫,等.HPLC同时测定独一味中7种成分含量[J].中国中药杂志, 2014,(22)：4373-4378.

Determ ination analysis of TanshinoneⅡa and the Chinesemedicine component identification of shuangshenhuoxue capsule

Su Yuan1,Xu Jianzhong1,Luo Yan2,LiYing3
DepartmentofPharmacy,the TraditionalChineseMedicine HospitalofRugao City 2265001
DepartmentofPharmacy,the TraditionalChinese Medicine HospitalofNanjing City 2100012
The FirstDivision HospitalofAntiaircraftArtillery in Liaoning Army Reserve 1101663

Objective：To study the determination of TanshinoneⅡa and the Chinese medicine component identification of shuangshenhuoxue capsule.Methods：The contentof TanshinoneⅡawas detectwith high performance liquid chromatography and the contentofginsengand danshenwasdetectwith thin layer chromagraphy.Results：The concentration of TanshinoneⅡawas8～24μg/mL,the linear relationship was good.Conclusion：The effective components of shuangshenhuoxue capsule was Tanshinone Ⅱa,and itwas lipid soluble,which could beused as thequality control index.

Shuangshenhuoxue capsule；Ginseng；TanshinoneⅡa；Componentidentification

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.36.5