布拉氏酵母菌散剂联合美沙拉嗪对溃疡性结肠炎大鼠模型的影响

王 烨 司立洲 崔佳宾 张 楠 贺天遥 孙理婷

(佳木斯市中心医院消化内科，黑龙江 佳木斯 154002)

布拉氏酵母菌散剂联合美沙拉嗪对溃疡性结肠炎大鼠模型的影响

王 烨 司立洲 崔佳宾 张 楠 贺天遥 孙理婷

(佳木斯市中心医院消化内科，黑龙江 佳木斯 154002)

目的 观察布拉氏酵母菌散剂联合美沙拉嗪对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道菌群和肠组织Toll样受体(TLR)4及核因子(NF)-кB激活的影响。方法 采用硫酸葡聚糖钠加乙酸复合方法制作UC大鼠模型，抽取40只大鼠为研究对象，随机分为A组和B组，每组20只大鼠，A组单纯接受布拉氏酵母菌散剂治疗，B组大鼠接受布拉氏酵母菌散剂联合美沙拉嗪治疗。结果 B组大鼠肠组织中TLR4与NF-κB p65的阳性细胞数明显减少，且显著低于A组(P<0.05)。结论 布拉氏酵母菌散剂联合美沙拉嗪可有效调节UC模型大鼠肠道菌群，并抑制肠组织TLR4、NF-κB p65的激活。

布拉氏酵母菌散剂；美沙拉嗪；溃疡性结肠炎；肠道菌群

溃疡性结肠炎(UC)属于一种病因机制还不明确的结肠慢性非特异性炎症疾病，较难治愈〔1〕。传统的类固醇皮质激素、柳氮磺胺嘧啶等具有一定的临床疗效，但还不能够达到理想的治疗效果。本组试验观察布拉氏酵母菌散剂联合美沙拉嗪UC模型大鼠肠道菌群和肠组织Toll样受体(TLR)4及核因子(NF)-κB激活情况的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 取佳木斯大学实验动物中心提供的清洁级40只成年SD大鼠为研究对象，将其随机分为A组和B组，每组20只，雌雄各半。在A组中，雌鼠的体重为190～248 g，雄鼠的体重为301～430 g；在B组中，雌鼠的体重为191～249 g，雄鼠的体重为302～428 g。将40只大鼠放置于安静的房间中，房间的面积约42 m2，室温19℃～25℃，相对湿度60%～80%。将40只大鼠分别装在10只等笼子里，定期清洗笼具和开窗通风，同时每周对笼具和房间进行常规消毒。

1.2 方法

1.2.1 实验方法 采用硫酸葡聚糖钠加乙酸复合方法制作UC大鼠模型。A组大鼠单纯接受布拉氏酵母菌散剂(saccharomyces bou-lardii，SB，亿活)治疗，将800 mg/kg的布拉氏酵母菌散溶于1 ml 生理盐水中，灌胃给药。在此基础上，给予B组大鼠美沙拉嗪(惠迪)治疗，每晚 1 次保留灌肠〔2〕。

1.2.2 检测方法

1.2.2.1 肠道菌群检测 处死大鼠后，将新鲜的粪便从肛门中挤出，并装于无菌容器内，到指定地点进行细菌培养，最后对其进行检测。

1.2.2.2 TLR4与NF-κB p65检测 取出大鼠病变肠组织约3块，每块约0.6 m2，5%甲醛固定24 h后，包埋切片，行免疫组化染色。阳性细胞主要呈现黄棕色，TLR4阳性细胞为胞膜和胞质着色，NF-κB p65阳性细胞主要是胞核和胞质着色。每个切片中，选择5个视野，要求其分布的区域较多，并在高倍镜下计数阳性细胞，将平均值作为每张切片的阳性细胞数。

1.3 统计学分析 采用SPSS15.0软件进行t检验。

2 结 果

2.1 两组大鼠肠道菌群检测结果对比 造模后，大肠埃希菌的数量为(26.2±2.4)株，明显多于造模前的(12.3±1.1)株(t=9.466，P=0.000)；但治疗后，两组大鼠中革兰阳性杆菌的数量明显增加，A组为(33.34±5.1)株，B组为(21.9±3.3)株，两组之间比较差异显著(t=6.249，P=0.013)。

2.2 两组大肠组织TLR4与NF-κB p65阳性细胞检测结果比较 造模后，B组TLR4阳性细胞表达上升(29.10±7.27)，与A组(13.46±7.15)比较差异显著(P<0.05)；且B组的NF-κB p65阳性细胞表达显著升高(28.66±5.61)，与A组(15.00±5.07)比较差异显著(P<0.05)。

3 讨 论

肠道菌群参与了UC的发病，有研究学者对部分炎症性肠病患者的肠黏膜细菌进行全面的检测，发现与普通患者比较，其肠黏膜细菌的浓度较高〔3〕。在UC形成过程中，肠道细菌起着关键性的作用。通过对UC患者进行益生菌治疗，发现患者的临床症状和病理均得到有效的改善〔4〕。在本研究中，造模后肠内菌群发生病变化，其中大肠埃希菌的数量不断增加，并成为肠内致病菌的主要条件之一，并反复发作肠道炎症，其迁延的面积越来越大。通过给予布拉氏酵母菌散剂联合美沙拉嗪治疗，大肠埃希菌的数量不断减少，显然在抑制肠道炎方面发挥着重要的作用〔1，2〕。

Aldemir等〔5〕研究发现，对于肠道炎症而言，如果肠道菌群发生变化，则需要对信号的介导进行有效的识别，细胞膜表面受体的介导信号主要是TLR。对于正常者而言，在肠道上皮细胞中会有微量的TLR4表达，但没有表达CD14 mRNA、CD14蛋白、MD2，而对于UC患者，TLR4在整个结肠上皮存在较高的表达，且多数TLR4分布在上皮基底部位。从本组试验看大鼠肠组织内的NF-κB的激活与很多方面存在着密切的联系，如肠道内大肠埃希菌的含量、肠组织内TLR4的激活等，且TLR4的激活在很大程度上与大肠埃希菌的含量存在着一定的相关性〔6〕。通过接受布拉氏酵母菌散剂联合美沙拉嗪治疗，黏膜下层TLR4/NF-κB阳性巨噬细胞数量大大减少，显然布拉氏酵母菌散剂联合美沙拉嗪在抑制TLR4、NF-κB的激活方面起着关键性的作用。本次研究结果表明，布拉氏酵母菌散剂联合美沙拉嗪治疗UC具有较大的可行性，为临床治疗UC提供了新的模式与思路，具有较高的推广价值。

1 李建军,郭连凤,李建平,等.美沙拉秦、布拉氏酵母菌散和康复新液三联疗法治疗溃疡性结肠炎的效果〔J〕.中国医药导报,2014;35(22):166-9.

2 李建军,司淑伟,李建平,等.美沙拉秦灌肠液联合布拉氏酵母菌散治疗溃疡性结肠炎的疗效观察〔J〕.临床合理用药杂志,2014;23(33):241-2.

3 刘宏晶,刘茂坤,苗德芳,等.中药灌肠联合美沙拉嗪及布拉氏酵母菌治疗溃疡性结肠炎34例〔J〕.环球中医药,2013;13(12):943-6.

4 张晓明,王晓娟,徐洪雨,等.布拉氏酵母菌散对TNBS-大鼠溃疡性结肠炎IL-8、IFN-γ的表达影响〔J〕.胃肠病学和肝病学杂志,2013;24(10):993-6.

5 Aldemir M，Kökog lu OF，Geyik MF，etal.Effect of octreotide acetate and saccharomyces boulardii on bacterial translocation in an experimen-tal intestinal loop obstruction model of rats〔J〕.Tohoku J Exp Med，2012;198(1):11-9.

6 袁琼琼.美沙拉嗪联合布拉酵母菌治疗溃疡性结肠炎的临床疗效观察〔J〕.中国药物与临床,2013;10(8):1359-61.

〔2013-12-10修回〕

(编辑 李相军)

王 烨(1977-)，男，副主任医师，医学硕士，主要从事消化系统疾病临床及消化内镜治疗的研究。

R574.62

A

1005-9202(2015)12-3271-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.12.037