宫颈癌及上皮内瘤变组织中HPV感染基因型别标杆的建立对宫颈癌防控的意义

夏 林 （江苏省扬中市人民医院，江苏 扬中 212200）

宫颈癌及上皮内瘤变组织中HPV感染基因型别标杆的建立对宫颈癌防控的意义

夏 林 （江苏省扬中市人民医院，江苏 扬中 212200）

目的：研究宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中人乳头瘤病毒（HPV）感染的基因型分布情况及其对宫颈癌防控的意义．方法：选取我院病理科2010-01／2014-03诊断为宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的患者164例，其中，宫颈癌患者56例，宫颈上皮内瘤变患者108例．所有患者采用基因扩增结合基因芯片技术对所有患者的组织标本进行 HPV基因分型检测，共23种基因型，同时对患者进行相关临床资料的收集与整理，进行HPV感染基因型别标杆的建立．结果：108例宫颈上皮内瘤变患者的HPV总阳性率为82．41%（89／108），一重感染阳性率为42．59%（46／108），多重感染阳性率为35．19%（38／108）；56例宫颈癌患者 HPV总阳性率为87．50%（49／56），一重感染阳性率为64．29% （36／56），多重感染阳性率为 21．43%（12／56）．结论：宫颈癌及上皮内瘤变组织中 HPV感染基因型别标杆的建立对宫颈癌防控的意义重大，值得临床推广．

宫颈癌；宫颈上皮内瘤变；人乳头瘤病毒；基因型；防控

0 引言

近年来，宫颈癌的发病率逐年升高，尤其是在年轻妇女中的发生率更是明显升高．研究显示［1］，2008年全世界宫颈癌总数约53万，死亡27．5万，发病率仅次于乳腺癌（138万）及结直肠癌（57万），其中85%以上的宫颈癌发生于发展中国家．随着宫颈细胞学检查的广泛开展与应用，宫颈癌及癌前病变的发病率明显下降，在过去的60年间，发达国家宫颈癌死亡率减少70%～80%［2］，但在发展中国家，至今仍是妇科恶性肿瘤第一位．目前我国的宫颈癌筛查遵循“三阶梯”［3］的诊疗原则，即细胞学检查（必要时HPV检查）——阴道镜检查——宫颈活检．液基细胞学的应用明显提高了宫颈癌前病变诊断的准确性，对检查阳性的患者再行人乳头瘤病毒（HPV）基因分型检测，则可以进一步了解其类型，更好地筛查出高危型患者．本文就宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中人乳头瘤病毒（HPV）感染的基因型分布情况及其对宫颈癌防控的意义进行研究，旨在更好地降低宫颈癌及宫颈上皮内瘤变发生率，提高筛查率．

1 资料和方法

1．1 临床资料 选取我院病理科 2010-01／2014-03诊断为宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的患者164例，其中，宫颈癌患者 56例，宫颈上皮内瘤变患者 108例．入选标准为：年龄21～83（平均45．4±15．5）岁，排除妊娠及急性生殖道炎症，24 h内无性生活，48 h内无阴道用药史，至少半年内未进行任何宫颈病变诊断和治疗方法处理．

1．2 方法

1．2．1 仪器设备 基因扩增仪：采用新加坡生产的Gene Amp PCR system 2004型；分子杂交仪：采用江苏省兴化市分析仪器厂生产的 FYY-3型；高速冷冻离心机：采用德国生产的 Eppendorf 5810 R型；生物安全柜：采用江苏省苏州市安泰空气技术有限公司生产的 BHC-1300ⅡA2型；青岛海尔有限公司生产的 －20°冰箱．

1．2．2 标本采集 标本来源为从 56例宫颈癌患者和108例宫预上皮内瘤变患者身体采集的石蜡组织，将每例患者的组织标本进行相应的处理：首先除去其病变组织周边多余的石蜡；然后将其石蜡组织切片，切片厚度约4μm，一般切 3～5片石蜡组织；其次用专用的镊子夹取标本放入小离心管中，这个过程需要小心谨慎操作．在切石蜡组织前，刀片及镊子需要使用次氯酸钠溶液分别擦拭 3次［4］．

1．2．3 检测方法 将石蜡组织切片放入离心管中，离心管规格为 1．5 mL，然后加入 150 μL裂解液，充分振荡、混匀，在100℃金属浴中加热 10 min，随后立即13 000 r／min离心10 min，待离心后取中间层DNA溶液待用［5］．按说明书对 PCR扩增、杂交、孵育以及显色进行规范操作［5］．

1．3 统计学处理 应用 SPSS17．0统计学软件对数据进行统计学分析，计量资料的比较采用 t检验，计数资料采用χ2检验，以 P＜0．05表示差异有统计学意义．

2 结果

108例宫颈上皮内瘤变患者的HPV总阳性率为82．41%（89／108），一重感染阳性率为42．59%（46／108），多重感染阳性率为35．19%（38／108）；56例宫颈癌患者HPV总阳性率为 87．50%（49／56），一重感染阳性率为 64．29%（36／56），多重感染阳性率为21．43%（12／56）．

3 讨论

宫颈癌是最常见的女性恶性肿瘤，据相关数据统计，现宫颈癌居妇科恶性肿瘤第2位．宫颈癌的发生发展有一个渐进的演变过程［6］：增生期——不典型增生期——原位癌——宫颈癌早期——浸润性宫颈癌．此过程可能需要5年甚至10年或更长时间，因此早发现、早治疗，及时阻断宫颈癌进展显得尤为重要．

HPV是一种人乳头多瘤病毒，是一组球形 DNA病毒，属于乳头瘤空泡病毒科 A亚群［3］，其20面体立体对称，无包膜，双链闭环 DNA基因组，呈嗜上皮性．自1977年 Laverty通过电镜在宫颈癌组织中观察到人乳头瘤病毒颗粒以来，许多学者开始对宫颈癌进行大量研究，包括它的发生、发展以及与HPV感染之间的关联性［4－7］，目前公认 HPV感染是宫颈癌的主要病因［3］．

本文通过对我院宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者采用基因扩增结合基因芯片技术进行组织标本HPV 23种基因分型检测，同时对患者进行相关临床资料的收集与整理，进行 HPV感染基因型别标杆的建立．结果发现，癌组织中 HPV感染的型别有所不同，既有单一型别，同时也有混合型别，但以一重感染为主，多重感染为辅，由此说明在宫颈癌及其上皮内瘤变中较丰富的是一重感染类型，而多重感染呈现出不断增加的趋势．

综上所述，宫颈癌的预防和筛查意义重大，它是一个系统工程．由于HPV感染属于性传播疾病，所以，对 HPV阳性的女性和男性进行及时的管理和治疗，并采取一些安全措施，如在性交时使用安全套等，这样不但可以降低 HPV的感染率，而且可以在持续性高危型HPV感染阶段采用一些行之有效的干预措施，同时在癌前期病变期进早诊断早治疗，就会大大造福广大女性患者．

［1］Arbyn M．Castellsague X，de Sanjose S，et al．Worldwide burden of cervical cancer in 2008［J］．Ann Oncol，2011，22（12）：2675－2686．

［2］Atilgan R，Celik A，Boztosun A，et al．Evaluation of cervical cytological abnormalities in Turkish population［J］．Indian J Pathol Microbiol，2012，55（1）：52－55．

［3］Saslow D，Castle PE，Cox JT，et al．American Cancer Society Guideline for Human Papillomavirus（HPV）vaccine use to prevent cervical Cancer and its precursors［J］．CA Cancer J Clin，2007，57（1）：7－28．

［4］Middleton K，Peh W，Southern S，et al．Organization of human papillomavirus productive cycle during neoplastic progression provides a basis for selection of diagnostic markers［J］．J ViroI，2003，77（19）：10186－10201．

［5］Peh WL，Middleton K，Christensen N，et a1．Life cycle heterogeneity in animal models of human papillomavirus-associated disease［J］．J Virol，2002，76（20）：10401－10416．

［6］Kulmala SM，Syrjänen SM，Gyllensten UB，et al．Early integration of high-copy HPV16 detectable in women with normal and low-grade cervical cytology and histology［J］．J Clin Pathol，2006，59（5）：513－517．

［7］任晓慧，耿建祥，李 海，等．某市2109例女性宫颈细胞中HPV基因型别的研究［J］．国际检验医学杂志，2012，33（13）：1542－1544．

R737．33

A

2095-6894（2015）02-022-02

2014-07-25；接受日期：2014-08-10

夏 林．E-mail：xialin2010＠163．com