HPLC法测定不同产地穿山龙中薯蓣皂苷的含量

郭红霞，李 娟，宋 飞，寮渭萍，尚 斌（.陕西稻田诊断试剂有限公司，西安 7007；.咸阳市西郊给水工程筹建处，咸阳 7000；.秦岭鲜都生态农业股份有限公司，西安 7008；.陕西省干细胞技术有限公司，西安 7000；.西安力邦制药有限公司，西安 7007）

HPLC法测定不同产地穿山龙中薯蓣皂苷的含量

郭红霞1，李 娟2，宋 飞3，寮渭萍4，尚 斌5（1.陕西稻田诊断试剂有限公司，西安 710075；2.咸阳市西郊给水工程筹建处，咸阳 712000；3.秦岭鲜都生态农业股份有限公司，西安 710018；4.陕西省干细胞技术有限公司，西安 710003；5.西安力邦制药有限公司，西安 710075）

目的 对不同产地穿山龙药材中薯蓣皂苷的含量进行比较。方法 采用HPLC法对不同产地穿山龙药材中的薯蓣皂苷进行了检测。结果 不同地域穿山龙药材中薯蓣皂苷的含量有明显差异，伊春、兰州、陕南所产含量较高，其中伊春产穿山龙药材含量最高，为19.7mg·g－1。结论 该方法简便、准确、重复性好，可以作为穿山龙药材的质量控制方法。

高效液相色谱法；穿山龙；薯蓣皂苷；含量比较

穿山龙别名穿地龙、川龙薯蓣等，属于薯蓣科、薯蓣属，为多年生草本植物，以根茎入药，具有祛风除湿、舒筋活络、止咳平喘之功效［1－2］。其有效成分主要是薯蓣皂苷（dioscin），具有扩张冠状血管、增加营养性血流量、改善冠状动脉供血不足的作用；延缓动脉粥样硬化斑块的形成；亦可降低血压、三酰甘油、高胆固醇［3－5］（参考文献中薯蓣皂苷片主要成分为穿山龙药材中的水溶性总皂苷）。因此，笔者选择薯蓣皂苷作为其指标性成分。

穿山龙药材的生长区域分布于东北、华北、西北及河南、湖北、山东、江苏、安徽、四川等地。有很多研究对不同产地穿山龙及其同属药材黄姜的薯蓣皂苷元进行了比较［6－9］，其含量测定多采用质量法或将穿山龙药材中的薯蓣皂苷水解成薯蓣皂苷元再行测定，测定薯蓣皂苷元须将药材酸解、提纯、调节酸碱度等步骤，操作复杂且耗时较长，文献鲜见不同产地穿山龙薯蓣皂苷的含量比较研究。笔者采用HPLC法对不同产地穿山龙药材中薯蓣皂苷含量进行测定，并进行了比较，为临床使用和制药企业选择原料产地提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 WATERS 600二元梯度泵＋717自动进样器＋2487紫外检测器＋Empower色谱数据处理软件。

1.2 试药 薯蓣皂苷对照品（批号111707－200501），中国药品生物制品检定所；穿山龙药材样品取自成都、河南、陕西、山西、黑龙江等种植基地，均为3年以上生穿山龙，共10批。乙腈（色谱纯）；水（超纯水，临用前制备）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：C18柱（Diamonsil，150mm ×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈－水（28∶72）；检测波长：203nm。薯蓣皂苷峰理论板数应不低于3 500。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备 取薯蓣皂苷对照品，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释，制成每1mL含0.3mg的溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 取本品干燥粉末（过四号筛），精密称定0.5g，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为65%乙醇25mL，称定质量，超声提取（功率120W，频率40kHz）30min，放凉，再称定质量，用体积分数为65%乙醇补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.3 精密度实验 取2.2.1项对照品溶液，连续进样6次，进样量10μL，记录薯蓣皂苷峰面积，其RSD为0.68%（n＝6）。

2.4 重复性实验 取6号样品6份，精密称定，分别按供试品制备方法制备供试品溶液，进样量10μL，6号样品中薯蓣皂苷的平均含量为14.6mg·g－1，RSD为0.76%（n＝6），表明其重复性较好。

2.5 加样回收率实验 取已知薯蓣皂苷含量的6号穿山龙样品约0.5g，共9份，精密称定，每3份为一组，分别加入样品量的80%，100%和120%的薯蓣皂苷对照品，并测定含量，计算回收率。结果薯蓣皂苷平均回收率为99.21%，RSD为1.45%（n＝9）。

2.6 稳定性实验 取8号样品溶液1份，在常温下放置8h，每2h测定1次，考察薯蓣皂苷的含量变化，结果含量的RSD为0.05%，表明供试品在8h内稳定。

2.7 样品测定 薯蓣皂苷对照品图谱及8号穿山龙药材样品中薯蓣皂苷含量测定图谱见图1，10批样品测定结果见表1。

图1 HPLC图A.薯蓣皂苷对照品（0.3mg·L－1）；B.供试品溶液；1.薯蓣皂苷Fig.1 HPLC chromatogramsA.dioscin control reference substance（0.3mg·L－1）；B.sample solution；1.dioscin

表1 穿山龙药材中薯蓣皂苷含量测定结果Tab.1 Determination of dioscin in Rhizoma dioscoreae nipponicae

3 小结与讨论

通过对不同地域穿山龙药材中薯蓣皂苷的含量比较，结果表明，各产地穿山龙中薯蓣皂苷含量有明显差异。《中国药典》2010年版规定，穿山龙中薯蓣皂苷的含量不得少于13.0mg·g－1［1］。研究结果表明，不同产地穿山龙的薯蓣皂苷含量差异较大，有3份样品含量未达到《中国药典》中的规定。比较几个产地穿山龙的薯蓣皂苷含量，得出伊春产（黑龙江）含量最高，安徽产含量偏低。

本文的研究结果可为穿山龙药材的临床使用和制药企业选择原料提供依据。

［1］ 国家药典委员会.中国药典2010年版［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：250－251.

［2］ 侯娟，何文辉，王明霞，等.薯蓣皂苷的药理作用［J］.河北医药，2004，26（1）：71.

［3］ 李兵雄，张朕华，唐晓红，等.薯蓣皂苷片治疗慢性肾脏疾病血脂异常的临床研究［J］.中国医药指南，2011，9（18）：192－194.

［4］ 杨瑞丰，潘伟，张戈，等.薯蓣皂甙调节血脂异常的疗效观察［J］.中西医结合心脑血管病杂志，2005，3（1）：14－15.

［5］ 狄晓萍，狄维鹏.薯蓣皂苷片治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病疗效观察［J］.医学理论与实践，2011，24（23）：2809－2810.

［6］ 李克明，董莹，张永文，等.RP－HPLC法测定穿山龙中薯蓣皂苷的含量［J］.药物分析杂志，2004，24（6）：640－641.

［7］ 昝丽霞，孙文基，张湛睿.黄姜的生态分布及化学成分研究进展［J］.西北药学杂志，2005，20（3）：138－139.

［8］ 徐雄良，张志荣，柯尊红，等.RP－HPLC法测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量［J］.中国中药杂志，2003，28（9）：885－887.

［9］ 柳全文.穿山龙的成分、药理及临床应用研究概况［J］.山东中医杂志，1998，17（1）：29－31.

Determination of dioscin in Rhizoma dioscoreae nipponicae from different areas by HPLC

GUO Hongxia1，LI Juan2，SONG Fei3，LIAO Weiping4，SHANG Bin5（1.Shaanxi Dauteen Diagnostic Reagent Limited Company，Xi′an 710075，China；2.the Western Suburbs of Xianyang City Water Supply Project Preparatory Department，Xianyang 712000，China；3.Qinling Mountains Fresh Ecological Agricultural Share Limited Company，Xi′an 710018，China；4.Shaanxi Stem Cell Technology Limited Company，Xi′an 710003，China；5.Xi′an Libang Pharmaceutical Limited Company，Xi′an 710075，China）

Objective To compare the contents of dioscin in Rhizoma dioscoreae nipponicae from different areas.Method HPLC method was used to detect dioscin.Results The results show that the contents of dioscin in Dioscorea nipponica Makino from different areas were quite different.Among the cities of Yichun，Lanzhou，and the southern Shaanxi，the highest content sample was from Yichun（19.7mg·g－1）.Conclusion The method is simple，accurate，and reproducible，and can be used as the quality control method of Rhizoma dioscoreae nipponicae.

HPLC；Rhizoma dioscoreae nipponicae；dioscin；comparison of content

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.006

R282

A

1004－2407（2015）02－0126－03

2014－07－01）